結直腸癌中EGFR、HER-2及PTEN的表達及臨床意義

王華 王志紅

結直腸癌中EGFR、HER-2及PTEN的表達及臨床意義

王華 王志紅

目的 全面探討人表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor, EGFR）、人表皮生長因子受體-2（human epidermal growth factor receptor-2, HER-2）以及張力蛋白同源物基因（phoshatase and tension homology deleted on chromosome fen, PTEN）蛋白的具體表達與結直腸癌分期、浸潤及轉移之間所存在的各種關系，為以后的研究提供理論的研究基礎。方法 采用全自動免疫組織化學染色技術，檢測80例結直腸癌和21例正常結直腸黏膜組織中的EGFR、HER-2和PTEN蛋白表達，得出實驗結果，同時結合臨床病理特征進行全面的分析。結果 EGFR、HER-2在結直腸癌中的表達61．3%（49/80）、53．8%（43/80）明顯高于正常黏膜組織23．8%（5/21）、9．5%（2/21）（均P＜0．05）。而PTEN在結直腸癌中的表達陽性率48．8%（39/80）顯著低于正常結直腸黏膜組織100%（21/21）（P＜0．05）。EGFR、HER-2和PTEN表達與結直腸癌Dukes分期、漿膜浸潤和淋巴結轉移相關（P＜0．05）。結直腸癌中EGFR表達及HER-2表達呈正相關關系，EGFR及HER-2表達與PTEN表達呈負相關關系。結論EGFR、HER-2與PTEN三者對于結直腸癌的發生過程可能起到互相協同的作用，與結直腸癌的分期、浸潤與轉移密切相關。通過對它們三者的檢測，在判斷結直腸癌的發展和預后具有一定的指導意義。

結直腸癌；人表皮生長因子受體；人表皮生長因子受體-2；張力蛋白同源物基因

近些年來，結直腸癌（CRC）患者日益增多，發病率及復發率極高，在惡性腫瘤排名中處于前列。大量研究表明，結直腸癌的轉移和發展受各種因子、多通路的共同作用，目前在臨床上沒有特效的藥物進行治療，導致死亡率很高[1]。本研究運用免疫組化的方法，全面探討人表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor, EGFR）、人表皮生長因子受體-2（human epidermal growth factor receptor-2, HER-2）以及張力蛋白同源物基因（phoshatase and tension homology deleted on chromosome fen, PTEN）蛋白的具體表達與結直腸癌分期、浸潤以及轉移之間所存在的各種關系，從而得出它們之間的關系，為以后的研究提供理論的研究基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源 選取合肥市第二人民醫院 2011—2015年手術切除的結直腸腺癌標本80例（結腸癌46例，直腸癌34例），男性53例，女性27例，平均年齡（53.1±10.7）歲。同時選取21例相同時期的患者的正常的大腸黏膜組織作為對照組（距癌灶＞4 cm）。所有實驗的標本逐一用中性福爾馬林液（10%）進行固定，然后再用石蠟包埋，最后切成4 μm厚的切片。

1.1.2 試劑 兔抗人EGFR（單克隆抗體，EP38Y），鼠抗人PTEN（單克隆抗體，6H2.1），購自福州邁新生物技術有限公司；兔抗人HER-2（單克隆抗體，4B5），UltraView DAB試劑盒購自Roche Ventana公司。

1.1.3 實驗設備 Roche Ventana Benchmark XT 全自動免疫組化儀。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學染色 切片放置65℃烤箱烤片1 h，再放入羅氏Ventana Benchmark XT 全自動免疫組化儀中，運用預先設定好的程序染色。程序設定見表1。

1.2.2 結果判斷 這三組蛋白出現棕黃色顆粒的部位分別是：EGFR表達于細胞膜和細胞質部位、HER-2表達于細胞膜部位、PTEN表達于細胞核部位。所有切片都由兩名中級病理師進行結果判定。

1.3 統計學分析

對實驗的結果進行相關性分析，采用SPSS 13.0軟件進行，用χ2檢驗作為組間陽性率的相關比較，相關性分析采用Spearman檢驗，若最終的結果P＜0.05，一般認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 EGFR、HER-2和PTEN蛋白在結直腸癌和正常腸黏膜組織中的表達

這三組蛋白出現棕黃色顆粒視為陽性，表達部位分別是：EGFR表達于細胞膜和細胞質部位、HER-2表達于細胞膜部位、PTEN表達于細胞核部位。EGFR在結直腸癌組織中其陽性表達率為61.3%（49/80），正常腸黏膜組織中陽性表達23.8%（5/21），差異有顯著性（χ2=16.73，P＜0.05）；HER-2在結直腸癌組織中陽性表達率為53.8%（43/80），正常腸黏膜組織中陽性表達率為9.5%（2/21），差異有顯著性（χ2=20.33，P＜0．05）；PTEN在結直腸癌組織當中其陽性表達率為48.8%（39/80），在正常腸黏膜組織當中其陽性表達率為100%（21/21），差異具有顯著性（χ2=14.36，P＜0.05）。

2.2 EGFR、HER-2和PTEN蛋白與結直腸癌臨床病理參數的相關性

EGFR、HER-2與PTEN蛋白表達同結直腸癌腫瘤部位、大小及分化程度沒有任何關系（P＞0.05），然而卻與結直腸癌Dukes分期、漿膜浸潤以及淋巴結轉移有很大關系（P＜0.05），具體情況見表2。

2.3 結直腸癌組織中EGFR、HER-2和PTEN蛋白表達間的關系

表1 Ventana Benchmark XT中EGFR、HER-2、PTEN程序設定

表2 EGFR、HER-2和PTEN蛋白表達與結直腸癌臨床病理參數的關系[n（%）]

在EGFR表達陽性的49例結直腸癌組織當中，HER-2及PTEN陽性表達例數分別是32例（65.3%）與13例（26.5%）；在EGFR陰性表達的31例結直腸癌組織當中，HER-2與PTEN陽性表達例數分別是11例（35.5%）與26例（83.9%）；在EGFR陽性表達的結直腸癌組織當中HER-2陽性表達率比EGFR陰性表達的結直腸癌組織高出很多，兩者之間的差異具有顯著性（χ2=14.36，P＜0.05），然而PTEN陽性表達率卻比EGFR陰性表達的結直腸癌組織低很多，兩者之間同樣具有顯著性（χ2=22.85，P＜0.05）；在HER-2陽性表達的43例結直腸癌組織當中，PTEN陽性表達12例（27.9%）；在HER-2陰性表達37例當中，PTEN陽性表達為27例（73.0%）；在HER-2表達陽性的結直腸癌組織當中PTEN陽性表達率比HER-2陰性表達的結直腸癌組織低很多，且兩者之間的差異具有顯著性（χ2=19.02，P＜0.05）。

3 討論

EGFR不但是原癌基因c-erbB1的主要表達產物，而且還是表皮生長因子受體（HER）家族的重要成員。HER家族包含HER-1（erbB1與EGFR）、HER-2（erbB2和NEU）、HER-3（erbB3）以及HER-4（erbB4）。該家族在細胞進行大量繁殖生長的過程當中，起到了極大的調節作用。EGFR廣泛分布在各細胞的外表面，比如哺乳動物上皮細胞、成纖維細胞以及膠質細胞等等，而且在細胞大量繁殖、生長及分化等生理過程中，起到了十分關鍵的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能嚴重缺失或是其相關信號中關鍵因子的活性及細胞定位出現異常狀況，都會大大提高糖尿病、腫瘤、免疫缺陷與心血管疾病的發生率[2]。由本次研究所得到的相關數據能夠看出，在80例結直腸癌組織當中EGFR表達陽性率高達61.3% ，比正常的腸黏膜組織23.8%高出很多，而且伴隨著Dukes分期逐漸增高、漿膜浸潤及淋巴結轉移，其自身的表達水平也有明顯的增高。證實EGFR表達同結直腸癌的發生、發展、生物學行為以及臨床進展有很大的關系，而高表達就是結直腸癌患者預后不良的主要標志。

HER-2基因定位于染色體17q21，其全長為28 515bp，轉錄4624nt的mRNA，編碼一個185kD蛋白（p185）。HER-2作為一個跨膜蛋白主要包括三個區域，具體如下：N端胞外區結構域、細胞內的酪氨酸激酶、含一個螺旋的跨膜區這三個區域構成。HER-2在細胞的生長過程中，雖然它能夠抑制細胞大量凋亡，可是卻也能促使腫瘤細胞快速生長；同時還能上調血管內皮生長因子（VEGF）/血管通透性因子（vPF）使腫瘤生成新型的血管，從而促進腫瘤的生長；而且能夠提高新生腫瘤細胞自身的侵襲力，對機體自身的抗侵襲屏障等諸多活動造成一定的破壞[3]。HER-2在乳腺癌、胃癌、肺癌、前列腺癌等都有不同程度的表達。1986年，Sakai等[4]最早對胃癌中的HER-2進行了詳細的闡述分析，后期有些資料顯示，它在胃癌中過表達的比例為7%～34%[5]。既往研究顯示HER-2過表達的胃癌患者腫瘤具有極高的侵襲性，預后效果相對較差，認為HER-2可作為預測胃癌患者預后的重要指標[6]。本次研究結果表明，在80例結直腸癌組織當中HER-2表達陽性率高達53.8%，遠遠高于正常的腸黏膜組織的比率，而且伴隨著Dukes分期逐漸增高、漿膜浸潤以及淋巴結轉移，其自身的表達水平也有明顯的增高。證實HER-2在結直腸癌發生、發展、侵襲以及轉移過程中起到了十分關鍵的作用，也可能作為結直腸癌患者預后的重要指標之一。

PTEN是在1997年，被專家Li等[7]發現，這種物質能夠起到抑制癌癥的作用，是人類歷史上發現的第一個抑癌基因，它對人類的腫瘤的生長有重要的作用，它本身含有雙特異性磷酸酶活性，表達主要受miRNA、乙酰化、磷酸化及泛素化等轉錄后調控，能夠抑制腫瘤的發生。既往研究表明，許多腫瘤的發生、發展都與PTEN基因的缺失有一定的關系[8-10]。通過本實驗結果分析得知，PTEN在結直腸癌中的陽性率為48.8%，比正常的腸黏膜組織的陽性率100%要低很多，而且伴隨著Dukes分期逐漸增高、漿膜浸潤以及淋巴結轉移，其自身的表達水平也有明顯的降低。PTEN在結直腸癌中的異常表達，提示著在結直腸癌的發生、發展過程中PTEN亦可能起到一定的作用。

在臨床工作中，通過對于相關基因表達蛋白的檢測，能夠作為研究腫瘤的依據，并且能夠進行早期的診斷、判斷預后以及指導臨床治療都有很重要的實際價值。腫瘤的發生、發展往往是多個癌基因或者抑癌基因異常表達作用的結果。本文主要是以80例結直腸癌標本為研究對象，通過免疫組化的方法檢測了EGFR、HER-2和PTEN三種蛋白表達，從而得出相關的結論，如下：（1）在EGFR陽性表達的結直腸癌組織當中，HER-2陽性表達率比EGFR陰性高出很多，且差異有顯著性（P＜0.05），而PTEN陽性表達率低于EGFR陰性，差異有顯著性（P＜0.05）；（2）HER-2表達陽性的結直腸癌組織中，PTEN陽性表達率低于HER-2陰性，且差異有顯著性（P＜0.05）。

通過以上的實驗可以得知，EGFR、HER-2與PTEN三者對于結直腸癌的發生過程起到互相協同的作用，通過對它們三者的聯合檢測，可有助于對結直腸癌的早期診斷、惡性程度評估、轉移潛能、預后判斷及選擇合理的治療方案提供參考依據。

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Expression and Clinical Significance of EGFR、HER-2 and PTEN in Colorectal Carcinoma

WANG Hua WANG Zhihong Department of Gastroenterology, Guangde Road Branch of Hefei Second People's Hospital, Hefei Anhui 230000, China

Objective To comprehensively investigate the epidermal growth factor receptor (epidermal growth factor receptor, EGFR) and human epidermal growth factor receptor 2 (human epidermal growth factor receptor 2, HER - 2) and tension protein homologue gene (phoshatase and recogniton homology does on chromosome fen, PTEN) protein specific expression and, infiltration and metastasis in colorectal cancer staging, various existing relationships between provide theoretical researchfoundation for later study. Methods Used automatic immunohistochemical staining techniques, the detection of 80 cases of colorectal cancer, and EGFR in 21 cases of normal colorectal mucosa tissues, HER-2 and PTEN protein expression, it is concluded that the experimental results, and combining with clinical pathological characteristics of comprehensive analysis. Results The expression of EGFR, HER -2 in colorectal cancer was 61.3% (49/80), 53.8% (43/80) significantly higher than normal mucous membrane tissue 23.8% (5/21), 9.5% (2/21) (P ＜ 0.05). PTEN's expression in colorectal cancer was 48.8% (39/80) significantly lower than normal colorectal adhesion tissue 100% (21/21) (P ＜ 0.05). The expression of EGFR, HER-2 and PTEN were correlated with Dukes staging, serosal itfiltration, lymph node metastasis of colorectal carcinoma(P ＜ 0.05). The expression of EGFR was positively correlated with that of HER-2. The expression of EGFR and HER-2 was negatively correlated with that of PTEN in colorectal carcinoma. Conclusion A close relationships exists between the expression of EGFR, HER-2 and PTEN with infiltration as well as metastasis in colorectal carcinoma. It can be used as a reference index to judge the biological behavior and prognosis of colorectal cancer, and it has certain significance for guiding clinical treatment.

colorectal carcinoma; EGFR; HER-2; PTEN

R735

A

1674-9316（2017）14-0128-04

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．14．072

合肥市第二人民醫院廣德路院區消化內科，安徽 合肥230000

王志紅