一起霍亂疫情應急處置的實驗室檢測分析

胡倫文

湖北省松滋市疾病預防控制中心，湖北松滋 434200

一起霍亂疫情應急處置的實驗室檢測分析

胡倫文

湖北省松滋市疾病預防控制中心，湖北松滋 434200

目的進一步發揮和完善實驗室檢測在疫情處置中的重要作用，提高檢測技術水平。方法包括樣品采集器材、采樣方法、樣品種類和數量以及實驗室檢測器材和檢測方法，檢測方法按霍亂防治手冊（第6版）和WS289-2008。結果全部所檢樣品中，8份患者第1次采集糞便和1份患者服藥后采集的肛拭樣品、2名未發病者的肛拭、6份外環境樣品(主要是病家廁所化糞池消毒前標本)為O139群霍亂弧菌陽性，其余均為陰性。結論檢測工作在疫情處置中起到至關重要作用，應加大疫情應急演練的力度和頻次，進一步提高基層實驗室的應急處置能力和檢測技術水平。

霍亂疫情；實驗室檢測；應急處理

霍亂屬于甲類傳染病，是由霍亂弧菌引起的一種急性腹瀉性傳染病。病發高峰一般在夏季，傳播途徑主要是通過水、水產品或海產品、生活接觸和蒼蠅傳播，人感染后能在數小時內造成腹瀉脫水甚至死亡。目前發現的能引起人類致病的主要是血清型為O1和O139群霍亂弧菌。湖北省松滋市境內于2016年10月發生了一起由O139群霍亂弧菌引起的霍亂疫情。由于衛生部門反應迅速、措施有效、處置得當，在最短的時間內有效控制了疫情的蔓延，未造成疫病流行。

1 疫情發生及流行病學調查經過

2016年10月5日上午8:30，松滋市疾病預防控制中心接到該市第一人民醫院電話報告，該院收治了1例疑似霍亂患者。市疾病預防控制中心立即組織流調和檢驗專業人員按照二級生物安全防護要求迅速趕赴現場。經流行病學調查，患者黎某，女，53歲，家住松滋市新江口鎮某小區，于10月1日到過家住松滋市陳店鎮某村的妹妹家參加了其侄子的結婚宴,晚上回家后出現腹瀉嘔吐，第2天到市人民醫院就診。入院時臨床表現以腹瀉稀水樣便并伴嘔吐為主，腹瀉物無粘液、濃血，嘔吐呈現噴射狀，無腹痛，無畏寒的發熱，呈重度脫水，神志清楚但呈煩燥不安狀。經臨床診斷和該院實驗室檢測為O139群霍亂弧菌血凝陽性。市人民醫院公共衛生科遂迅速報告市疾病預防控制中心，并按甲類傳染病進行隔離治療。市疾控中心實驗室迅速派人到醫院實驗室收集該患者復核標本并到病房采集患者糞便標本，經專人專車送回實驗室。經對患者的兩份培養標本(堿胨水增菌液和慶大霉素平板)進行復核,結果為O139群霍亂弧菌血凝陽性。市疾控中心迅速向荊州市疾控中心報告,并派專人專車將標本送至荊州市疾控中心，經省市專家復核結果為O139群霍亂弧菌陽性。于時湖北省和荊州市兩級專家組連夜趕赴松滋指導疫情處置工作。松滋市立即成立疫情處置指揮部,迅速啟動疫情應急預案。經流行病學調查,這是一起由于婚宴集中進餐引發感染事件。經查明，2 d內參加婚宴就餐的人數為222人，主要集中分布于松滋市的陳店鎮、新江口鎮、老城鎮、涴市鎮、八寶鎮、沙道觀鎮等6個鄉鎮，另外對宜昌的20名就餐者和荊州市沙市區的6名就餐者分別向當地疾控部門發出協查通知。

表1 首發病例病原學檢測結果

2 實驗室采樣及檢測

2.1 采樣及檢測材料

2.1.1 采樣器材 含10 mL堿性蛋白胨水試管、含濃縮10倍堿性蛋白胨水50 mL的廣口瓶、500 mL空無菌廣口瓶、15 mL無菌采樣管、肛拭采樣器、棉簽、一次性紙杯和塑料漏斗、封口膜、UN2814標本運送箱等。

2.1.2 檢測器材 堿胨水增菌培養基、慶大霉素瓊脂培養基、霍亂O1群和O139群診斷血清、霍亂O1群和O139群快速診斷金標試紙、氧化酶試紙、生物顯微鏡、暗視野顯微鏡等。

2.2 采樣方法、種類及數量

2.2.1 采樣方法 糞便、嘔吐物用棉簽取少量于10 mL堿胨水管中；水樣（含污水）用一次性紙杯和漏斗取約450 mL于10倍濃縮堿胨水采樣瓶中；食品或水產品取一定數量于無菌食品袋中密封；肛拭用肛拭采樣器插入直腸內3～5 cm輕輕轉動取出然后放入含10 mL堿胨水試管中，棄去尾部。

2.2.2 標本種類及數量 收集復核標本2份（患者糞便堿胨水增菌液1份、慶大平板培養物1份）；整個疫情處置過程中實驗室共采集和收集本次霍亂疫情相關樣品480份。其中患者糞便樣品或肛拭樣品63份，外環境樣品（主要是廁所糞便樣品和水樣）47份，食品（含水產品）16份，物表樣品14份，參加集中就餐人員肛拭樣品61份，密切接觸者肛拭樣品29份，各疫點消毒效果監測樣品120份，腹瀉病例主動監測130人份。

2.3 檢測方法

檢測方法按霍亂防治手冊（第6版）[1]和WS289-2008[2]。

2.3.1 增菌 標本接種于堿性蛋白胨水培養基中置37℃增菌6～8 h。為了提高檢出率，可進行二次增菌。

2.3.2 分離培養 取增菌管中菌膜下表層一接種環培養物于慶大霉素瓊脂平板中劃線分離，置37℃培養18～24 h。

2.4 菌株鑒定

2.4.1 玻片凝集試驗 直接挑取慶大霉素瓊脂平板上的呈半透明狀、表面光滑濕潤、邊緣整齊、菌落中央略呈灰黑色的可疑菌落與O1群霍亂弧菌多價診斷血清及O139群霍亂弧菌診斷血清做玻片凝集試驗，同時以生理鹽水作對照，如玻片上在1 min內出現肉眼可見的凝集塊即斷為陽性。

2.4.2 氧化酶試驗 挑取慶大平板上血清凝集呈陽性的可疑菌落接種于營養瓊脂平板中進行純培養，取純培養物涂抹于氧化酶試紙條上，在1～2 min內試紙變為紫紅色至紫黑色的即判斷為氧化酶試驗陽性，不變色判定為陰性。

2.4.3 革蘭氏染色 為革蘭氏陰性短小稍彎曲的桿菌，無芽孢，無莢膜，菌體兩端鈍圓或稍平。

2.4.4 動力試驗 取純培養物在暗視野顯微鏡下可觀察到霍亂弧菌呈穿梭樣運動。

2.4.5 黏絲試驗 霍亂弧菌呈黏絲試驗陽性。

2.4.6 快速試驗 用霍亂O1群和O139群快速診斷金標試紙做快速輔助檢測。為檢測贏得時間和提供下一步檢測方向。

3 結果

3.1 病原學檢測結果

因為該市此起霍亂疫情為湖北省2016年首發疫情，必須將首發病例標本送至湖北省疾控中心復核鑒定。鑒定結果如表1。

3.2 病原菌株藥敏試驗結果

該病原菌株對慶大霉素、阿奇霉素、氯霉素耐藥；氨芐西林、頭孢他啶中介；氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢噻肟、紅霉素、環丙沙星、甲氧芐啶等敏感。

3.3 相關樣品檢測結果

對本次霍亂疫情相關樣品480份經檢測，O139霍亂弧菌血清凝集試驗陽性的樣品共17份，其中患者9份（其中包含1例患者服藥后肛拭檢測仍為陽性樣品1份），健康帶菌者2份，外環境樣品6份（外環境陽性樣品主要是病家廁所和化糞池消毒前的樣品）。其余463份樣品為O139霍亂弧菌血清凝集陰性。

4 討論與思考

①檢測工作在疫情處置中起到至關重要作用。在該次霍亂疫情應急處置中，檢驗人員有條不紊、夜以繼日地工作，在最短的時間內迅速上報檢測結果，湖北省疾控中心和荊州市疾控中心的專家在第一時間內趕到進行復核確認，使得松滋市政府及時啟動《突發公共衛生事件應急預案》四級應急響應，為疫情的聯防聯控、及時控制傳染源，切斷傳播途徑起到了非常重要作用。

②在處置疫情過程中，由于時間緊迫，對于患者早期的稀樣便標本在進行增菌培養的同時可直接接種于慶大霉素瓊脂培養上培養18～24 h，以節省時間[3]。

③增菌培養并不強求一定是6～8 h，應注意觀察增菌液出現明顯的細菌生長現象，即可進行分離培養。但原始樣品增菌時間超過20 h時，樣品中的大腸桿菌等大量繁殖，會給霍亂弧菌分離帶來較大影響[4]。

④對于帶菌狀況調查、恢復期患者檢測、水體樣品、食品、海水產品、物品涂抹標本等可能目標菌含量較少，為提高檢出率，需進行二次增菌[5]。其方法是從第一次增菌的6～8 h培養物中，吸取0.1～0.2 mL表層培養物，接種到新鮮堿性蛋白胨水中，再放置37℃培養6～8 h后，進行選擇性培養基的劃線分離。

⑤該次疫情的成功處置得益于湖北省近年來在疾控系統經常性開展應急演練。松滋市疾控中心在2008年全省舉行的縣級《霍亂疫情應急處置》演練中，獲得了全省第一名。該次實戰正是應急演練的翻版。正因為在多次演練中取得的經驗，才使得檢驗人員在應急采樣及檢測中能有條不紊、臨危不亂、快速準確，不做無用功，少走彎路，為控制疫情蔓延贏得寶貴時間。希望今后象類似的應急演練能夠在基層長期開展下去。

⑥該市的這次霍亂疫情為一起集中進餐引發的群體性感染事件,雖然目前疫源檢索還沒有明確結論,但在此次疫情的發現和處置過程中,衛計部門快速準確的處置,流調組、檢測組、消殺組密切配合,僅僅只用了10 d的時間就控制住了疫情,沒有讓疫情蔓延和擴散,沒有發生第二代病例,特別是檢驗組人員在省市專家組的指導下，通過夜以繼日的辛勤工作，在第一時間內發現陽性病例和帶菌者，讓醫療部門迅速采取治療和隔離措施，對防止疫情擴散起到了至關重要的作用。這充分說明該省基層疾控中心實驗室檢測技術水平有了很大的提高。

[1]霍亂防治手冊（第6版）[M].北京：人民衛生出版社,2013.

[2]WS289-2008霍亂診斷標準[S]中華人民共和國衛生部,2008.

[3]吳強，王樹坤，楊汝松，等.2009年通海縣一起食源性O139型霍亂暴發疫情的調查與應急處置[J].預防醫學論壇，2010（12）：1097-1099.

[4]涂正波，唐麗君，吳景文，等.一起輸入性O139型霍亂的暴發調查[J].現代預防醫學，2011，38（14）：2844-2845.

[5]趙江義，付小強，李莎，等.一起群體聚餐引起的O139型霍亂疫情分析[J].疾病監測，2013，28(6)；508-510.

Analysis of Laboratory Test of Emergency Handling of a Cholera Epidemic

HU Lun-wen
Songzi Disease Control and Prevention Center,Songzi,Hubei Province,434200 China

ObjectiveTo further give play to and improve the important effect of laboratory test in the handling of epidemic and improve the test technical level.MethodsThe sample apparatus collection,collection method,sample species and number and laboratory test apparatus and test method were included and the test method was based on the cholera control handbook (sixth edition)and WS289-2008.ResultsOf all tested samples,the first stool collection of 8 cases,anal swab samples after medication collected of 1 case,anal swab of 2 cases without disease and 6 external environment samples were the positive vibrio cholerae O139 and the others were negative.ConclusionThe test work is of important significance to the handling of epidemic,and we should increase the emergency exercises force and frequency of epidemics and further improve the emergency handling ability and test technical level of the primary laboratories.

Cholera epidemic;Laboratory test;Emergency treatment

R115

A

1672-5654（2017）05（c）-0015-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.15.015

2017-02-20）

胡倫文（1965-），男，湖北松滋人，本科，副主任技師，研究方向：衛生檢驗。