人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子1第3內(nèi)含子突變對海南黎族人群高尿酸血癥發(fā)生的影響

韓 珠 黃東愛 張瑞城 歐月秀 陳江秀 黃家禧 許振華 王小英

(海南省第三人民醫(yī)院腎內(nèi)科，海南 海口 572000)

人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子1第3內(nèi)含子突變對海南黎族人群高尿酸血癥發(fā)生的影響

韓 珠 黃東愛1張瑞城2歐月秀 陳江秀 黃家禧 許振華 王小英1

(海南省第三人民醫(yī)院腎內(nèi)科，海南 海口 572000)

目的 明確人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子(hURAT)1第3內(nèi)含子(hURAT1 IVS-3+11G>A)突變對海南黎族人群高尿酸血癥發(fā)生的影響。方法 海南黎族高尿酸血癥患者100例為觀察組，同期行體檢的海南黎族非高尿酸血癥者100例為對照組。采用突變特異性擴增系統(tǒng)(ARMS)對比兩組hURAT1 IVS-3+11G>A等位基因突變情況。結(jié)果 觀察組hURAT1基因IVS-3+11G>A多態(tài)性A等位基因頻率顯著高于對照組(P<0.05)。經(jīng)單因素及Logistics回歸分析顯示：飲酒、體重超重及攜帶hURAT1 IVS-3+11G>A多態(tài)性A等位基因為影響海南黎族高尿酸血癥發(fā)生的獨立風(fēng)險因素(P<0.05)。結(jié)論 hURAT基因突變可能影響了海南黎族人高尿酸血癥的發(fā)生，這一結(jié)果為此類疾病的遺傳學(xué)病因探索提供了參考。

高尿酸血癥；人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子1；基因突變；等位基因；海南黎族

高尿酸血癥基本病理生理過程為嘌呤代謝紊亂而導(dǎo)致外周血尿酸水平異常升高。該病的發(fā)病機制尚未完全明確，但目前認為是在飲食習(xí)慣、生活方式、性別等因素綜合作用下發(fā)病〔1,2〕。研究顯示人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子(hURAT)1基因第3內(nèi)含子11G>A(IVS-3+11G>A)突變與中國漢族人群原發(fā)性高尿酸血癥的發(fā)病密切相關(guān)〔3,4〕。基因多態(tài)性有明顯的種族差異，本研究分析hURAT1基因IVS-3+11G>A突變對海南黎族人群高尿酸血癥發(fā)生的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年1月至2014年12月我院接受診療的海南黎族高尿酸血癥患者100例為觀察組，均明確診斷為高尿酸血癥。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他代謝性疾病；合并活動性感染；合并嚴重肝腎功能障礙；合并惡性腫瘤等終末期疾病。另納入同期我院行體檢的100例海南黎族健康者為對照組。

1.2 hURAT1基因突變檢測方法 清晨空腹采集外周血5 ml，采用GenElute試劑盒(Sigma-Aldrich，德國)提取血液基因組DNA。采用突變特異性擴增系統(tǒng)(ARMS)特異引物直接鑒定法檢測兩組hURATI基因IVS-3+11G>A突變情況。IVS-3+11G>A的引物設(shè)計為：內(nèi)對照片段上游引物L(fēng)：CTCAGCGGGCAAGCATAGGGT(7496....7516)；內(nèi)對照片段下游引物R：ACTCCCCAGCCCCCAGGGAA(8090....8071)；IVS-3+11G>A特異性突變引物(下游)T：CCCCTGCATGGCGCCACGTT；IVS-3+11G>A正常引物(下游)N：CCCCTGCATGGCGCCAGGTC。每份標(biāo)本做T和N兩管聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)：在N管加入含有引物L(fēng)、R和N的反應(yīng)體系，在T管加入含有引物L(fēng)、R和T的反應(yīng)體系，兩管同時進行PCR，然后取PCR產(chǎn)物進行電泳鑒定。PCR反應(yīng)條件：Robocycler Gradient 40 PCR擴增儀進行溫度梯度(50℃～65℃)，確定最佳退火溫度為63℃；在Hema4800 PCR儀上進行ARMS，反應(yīng)體積為25 μl，含基因組DNA 0.5 μg。94℃變性3 min后進行25～30個循環(huán)。72℃保溫約5 min。15 μl PCR產(chǎn)物于20 g/L瓊脂糖凝膠電泳，溴乙啶染色，觀察分析實驗結(jié)果。

1.3 海南黎族高尿酸血癥發(fā)生的危險因素分析 納入10個可能影響海南黎族高尿酸血癥發(fā)生的因素進行單因素分析，包括：性別、年齡、飲酒、吸煙、高血壓、糖尿病、高甘油三酯(≥1.9 mmol/L)、高膽固醇(≥6.25 mmol/L)、體重超重(體質(zhì)指數(shù)≥24 kg/m2)、hURAT1基因IVS-3+11G>A攜帶A等位基因(簡稱：攜帶A基因)。將單因素分析所得陽性結(jié)果納入多因素分析模型，分析影響海南黎族高尿酸血癥發(fā)生的獨立危險因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計軟件進行t、χ2檢驗，Logistics回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組hURAT1基因IVS-3+11G>A突變情況 觀察組hURAT1基因IVS-3+11G>A多態(tài)性A等位基因頻率顯著高于對照組(P<0.01)。見表1。

2.2 影響海南黎族高尿酸血癥發(fā)生的單因素分析 觀察組飲酒、高甘油三酯、體重超重及攜帶A基因的比例均顯著高于對照組(P<0.05)。見表2。

2.3 影響海南黎族高尿酸血癥發(fā)生的獨立危險因素 飲酒及攜帶A基因為影響海南黎族高尿酸血癥發(fā)生的獨立風(fēng)險因素(P<0.05)。見表3。

表1 兩組hURAT1基因IVS-3+11G>A等位基因頻率、基因型頻率比較〔n(%),n=100〕

表2 兩組一般資料比較(n,n=100)

表3 影響海南黎族高尿酸血癥發(fā)生的獨立危險因素

3 討 論

我國是一個高尿酸血癥較為高發(fā)的國家，該病常無法徹底治愈，患者即便在正常嘌呤含量的飲食情況下仍然面臨痛風(fēng)發(fā)作的可能〔5〕，此外該病還是心血管系統(tǒng)疾病的高危因素〔6,7〕。高尿酸血癥在老年人群常見病發(fā)生中占有重要的地位，可與痛風(fēng)、高血壓、糖尿病、高血脂、冠心病、腎臟損傷等多種疾病的發(fā)生存在一定的因果關(guān)聯(lián)。高尿酸血癥是一種在多種因素作用下所產(chǎn)生的疾病，其中遺傳學(xué)因素越來越受到重視。在尿酸鹽的代謝過程中，由于尿酸鹽為極性分子，不能自由通過細胞膜脂質(zhì)雙分子層，其在近曲腎小管的重吸收和分泌必須由離子通道來介導(dǎo)〔8,9〕。迄今，在人近曲腎小管上皮細胞膜上發(fā)現(xiàn)4個與尿酸轉(zhuǎn)運有關(guān)的離子通道，其中hURAT1主要參與腎小管對尿酸的分泌，是尿酸從腎臟排泄的關(guān)鍵離子通道〔10～12〕。本研究提示，hURAT1基因第3內(nèi)含子突變可能會影響海南黎族人群高尿酸血癥的發(fā)生。但高尿酸血癥作為一種代謝性疾病可能受到多種環(huán)境或生活習(xí)慣的影響。

1 Maharani N,Kuwabara M,Hisatome I.Hyperuricemia and atrial fibrillation〔J〕.Int Heart J,2016;57(4):395-9.

2 Kuwabara M.Hyperuricemia,cardiovascular disease,and hypertension〔J〕.Pulse (Basel),2016;3(3-4):242-52.

3 韓 琳,于 清,胡東明,等.中國漢族人尿酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白1基因啟動子區(qū)多態(tài)性與原發(fā)性高尿酸血癥的關(guān)聯(lián)研究〔J〕.中華內(nèi)分泌代謝雜志,2012;28(1):36-9.

4 路 杰,王 燦,王 瑤,等.人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子1基因第3內(nèi)含子+11G>A單核苷酸多態(tài)性功能研究〔J〕.中華內(nèi)科雜志,2014;53(7):550-4.

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6 Acevedo A,Benavides J,Chowdhury M,etal.Hyperuricemia and cardiovascular disease in patients with hypertension〔J〕.Conn Med,2016;80(2):85-90.

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8 Peng J,Hu Q,Gu C,etal.Discovery of potent and orally bioavailable inhibitors of human uric acid transporter 1 (hURAT1) and binding mode prediction using homology model〔J〕.Bioorg Med Chem Lett,2016;26(2):277-82.

9 施映楓,徐柳青,嚴海東,等.尿酸轉(zhuǎn)運蛋白的研究進展〔J〕.中華腎臟病雜志,2014;30(11):876-80.

10 Li C,Yu Q,Han L,etal.The hURAT1 rs559946 polymorphism and the incidence of gout in Han Chinese men〔J〕.Scand J Rheumatol,2014;43(1):35-42.

11 葉德邵,趙東寶.尿酸鹽轉(zhuǎn)運體在原發(fā)性高尿酸血癥中的研究進展〔J〕.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2012;16(4):271-3.

12 關(guān)寶生,白 雪,王艷秋,等.痛風(fēng)/高尿酸血癥患者生活習(xí)慣的危險因素〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2014;34(2):455-7.

〔2016-03-19修回〕

(編輯 苑云杰)

2012年度三亞市醫(yī)療衛(wèi)生科技創(chuàng)新項目(No.YW1215)

韓 珠(1968-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事尿毒癥、腎功能障礙研究。

R589.6

A

1005-9202(2017)13-3207-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.037

1 海南醫(yī)學(xué)院生物技術(shù)專業(yè)實驗室 2 海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科