胃癌組織中Mina53和Survivin基因的表達及臨床意義

阮 佼

(三峽大學仁和醫院重癥醫學科，湖北 宜昌 443001)

胃癌組織中Mina53和Survivin基因的表達及臨床意義

阮 佼

(三峽大學仁和醫院重癥醫學科，湖北 宜昌 443001)

目的 探討胃癌組織Mina53和Survivin的表達及臨床意義。方法 應用RT-PCR技術檢測38例胃癌組織和對應的癌旁組織中Mina53和Survivin mRNA表達水平，并統計其與胃癌臨床分期之間的關系。結果 胃癌組織中Mina53、Survivin mRNA陽性檢出率明顯高于癌旁組織，隨著胃癌臨床分期的上升，Mina53、Survivin mRNA表達水平也明顯升高。結論 Mina53和Survivin參與胃癌的發生發展，聯合檢測Mina53和Survivin可能有助于胃癌的早期臨床診斷、早期治療、病情評估及預后判定。

胃癌；Mina53；Survivin

胃癌的發生發展是一個涉及癌基因、抑癌基因、凋亡相關基因、轉移相關基因不同形式改變的復雜過程。大多數早期患者無典型的臨床癥狀，少數患者會出現惡心、嘔吐或是類似消化性潰瘍的上消化道不適癥狀，而待其出現較明顯的臨床表現如腹部持續性疼痛多提示腫瘤擴展已經超出胃壁。如經積極的手術治療、結合化療或其他輔助治療措施，早期胃癌的預后情況較好。在缺乏特異性腫瘤標志物的情況下，X線鋇餐、胃鏡以及腹部CT在胃癌的診斷方面起到了非常重要的作用，但鋇餐和CT檢查需在有明顯形態改變的情況下方可有陽性發現，胃鏡可較前者更早期發現黏膜的形態改變并可直視下取組織活檢，但其終歸為一種有創檢查，過程較痛苦，而且多數健康查體人員對無痛胃鏡的接受率還不高。Mina53是新近發現在消化道腫瘤如結腸癌、食管癌組織中明顯高表達的一種有原癌基因c-Myc誘導的核抗原，已有研究表明其表達水平在胃癌組織中顯著高于正常胃黏膜組織，且同胃癌的臨床分期呈正相關〔1〕。Survivin是一種強有力的凋亡抑制因子，參與胃癌等〔2，3〕眾多腫瘤的發生發展進程，胡華等〔4〕通過對胃癌患者血清中Survivin抗體的檢測發現胃癌組血清Survivin抗體水平明顯高于正常對照組，其與腫瘤的淋巴結轉移、分化程度、臨床病理分期顯著相關。本研究擬對胃癌組織中原癌基因c-Myc誘導的核抗原Mina53和凋亡抑制因子Survivin的表達情況及其臨床意義進行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年3月至2013年9月就診于三峽大學仁和醫院行手術治療且術前未行放化療的胃癌患者，并排除其他系統明顯疾患，手術切除胃癌組織標本38例和距腫瘤邊緣>5 cm癌旁組織38例，男24例，女14例；年齡36～76〔平均(56.18±10.21)〕歲。組織標本均經病理科確診為胃癌，并根據國際抗癌聯盟TNM分級標準進行嚴格的臨床分期，其中Ⅰ期6例，Ⅱ期10例，Ⅲ期18例，Ⅳ期4例。所有標本收集后均存放于-80℃冰箱凍存供后續實驗使用。

1.2 儀器和試劑 PCR儀(EppendofAG)，電泳槽(美國伯樂)，Trizol RNA提取試劑盒(Invitrogen)，RT-PCR試劑盒(大連寶生物工程有限公司)，低溫離心機(Eraeus instruments公司)，電子稱量儀(德國METTLER TOLEDO公司)。

1.3 PCR引物設計與合成 本實驗涉及Survivin、Mina53及內參β-actin三條引物均由上海生工設計合成，Mina53上游：5′cccattatgatgatgtcga3′，下游：5′tgttctggtaggtgctgat3′；Survivin上游：5′caccgcatctctacattcaaga3′，下游：5′caagtctggctcgttctcagt3′；β-actin上游：5′ctgggacgacatggagaaaa3′，下游：5′aaggaaggctggaagagtgc3′。

1.4 RT-PCR檢測 將所有組織標本逐一剪碎后置入勻漿器中，加入Trizol試劑按一步法提取各組織中總RNA，并按試劑盒中說明書測定各樣品中RNA的純度和濃度，以確保各OD260/OD280比值在1.8～2.0之間。取適量提取RNA反應物嚴格按照試劑盒說明書進行逆轉錄反應生成cDNA(反轉錄條件為30℃反應10 min；42℃～60℃反應15～30 min，95℃ 反應5 min，5℃ 反應5 min)，然后按試劑盒說明書反應條件擴增：94℃預變性5 min，40個循環(94℃變性30 s，54℃退火45 s，72℃延伸10 s，共40個循環)，72℃再延伸10 min。取擴增產物5 μl和緩沖液 2 μl混合均勻后于1.5%瓊脂糖凝膠上點樣電泳并將結果掃描成像統計分析，每一組織標本重復擴增3次，產物量取平均值進行統計分析。

1.5 結果判讀 將所有組織標本PCR電泳結果攝像分析，應用凝膠分析系統處理，產物量以條帶光密度/面積表示，將不同標本中Mina53和Survivin mRNA產物量同內參β-actin mRNA產物量比值分別進行統計分析，計算各臨床分期胃癌組織及所有癌旁組織標本中Mina53和Survivin mRNA陽性檢出率和平均表達水平。

1.6 統計學方法 應用SPSS13.0統計軟件包進行χ2檢驗、單因素方差分析。

2 結 果

2.1 胃癌標本組織和癌旁組織中Mina53、Survivin mRNA 檢出情況 癌旁組織中Mina53 mRNA、Survivin mRNA陽性檢測率分別為10.53%(4例)、18.42%(7例)，明顯低于癌組織中Mina53 mRNA〔26.11%(30例)〕、Survivin mRNA〔76.32%(29例)〕的陽性檢測率(χ2=35.98，25.54，P<0.01)。隨胃癌組織臨床分期的增高，Mina53、Survivin mRNA的檢出率并不呈逐漸增高趨勢(χ2=3.62，P>0.05)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織中Mina53和Survivin mRNA檢出率分別為50%(3例)、80%(8例)、83.33%(15例)、100%(4例)和66.67%(4例)、70%(7例)、77.78%(14例)、100%(4例)。

2.2 胃癌組織標本和癌旁組織中Mina53和Survivin mRNA表達水平 不同臨床分期胃癌組織中Mina53 mRNA含量隨分期不斷增加(F=9.952，P<0.01)，Ⅲ期、Ⅳ期胃癌組織中Mina53 mRNA含量明顯高于癌旁組織(P=0.007和P<0.001)。不同臨床分期胃癌組織中Survivin mRNA含量也隨胃癌臨床分期的升高而不斷上升(F=9.101，P<0.01)，Ⅲ期、Ⅳ期胃癌組織中Survivin mRNA含量明顯高于癌旁組織(P=0.038和P=0.001)。見表1，圖1。

表1 不同分期胃癌組織和癌旁組織中Mina53和Survivin mRNA表達情況

與其他臨床分期胃癌組織比較：1)P<0.01；與癌旁組織比較：2)P<0.05

圖1 Mina53和Survivin mRNA在不同臨床分期胃癌組織中表達

3 討 論

Mina53為原癌基因myc誘導的核抗原并作為myc基因部分功能的具體行使者參與細胞增殖或分化的調節。它位于3號染色體(3q12.1)上，人類Mina53基因有12個外顯子，11個內含子，編碼一種465個氨基酸的蛋白質Mina53，分子量估計為52 800.28 D。其中第128～271號氨基酸序列中有一個JmjC結構域，與DNA或染色質結合，可能介導Mina53對染色質重塑的調節作用，從而影響著基因的表達模式。研究表明Mina53的過度表達與多種腫瘤患者的預后呈負相關性，且在以結腸癌為代表的腫瘤組織中Mina53的過度表達更多地出現于疾病的早期階段〔5〕。王珂等〔1〕研究表明Mina53可能參與了胃癌的發生和發展，有望作為胃癌預后判斷的標記物。而Survivin為凋亡抑制蛋白家族(IAP)中的一個新成員，結構獨特。它只含有一個桿狀病毒IAP重復序列(BIR)結構，羥基末端缺乏鋅指結構，代以交織螺旋結構(Coiled-Coil)，編碼分子量約16.5 kD的胞質蛋白，mRNA編碼區包含426個堿基的開放閱讀框。Survivin能抑制FAS、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶、Bcl-2相關X蛋白(Bax)、某些化療藥物、白細胞介素(IL)-3、腫瘤壞死因子(TNF)-α、X-射線誘導的凋亡，選擇性表達于胃癌、結直腸癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、皮膚癌等常見惡性腫瘤，而在癌旁正常組織和成人分化組織并不表達，推測惡性腫瘤細胞Survivin的重新表達可能與獲得的某種異常抗凋亡能力有關〔6〕。研究表明檢測組織中Surivin的表達情況可以協助臨床早期診斷胃癌和判定胃癌患者的預后〔2，7〕；胡華等〔4〕通過對胃癌患者血清中Survivin抗體的檢測得出血清中Survivin抗體水平有助于胃癌病情及預后的判斷。

本研究結果表明核抗原Mina53和凋亡抑制因子Survivin可能為介導胃癌發生和進展相關信號通路中的重要角色，其表達水平同胃癌的臨床分期明顯正相關，臨床上對其核酸或蛋白水平的檢測可能使得胃癌的早期診斷、靶向治療或預后判斷更加方便。本實驗結果有待后續大樣本量和蛋白水平、細胞水平、組織水平等多水平的多中心隨機對照實驗的進一步證實。后續研究可探索胃癌患者和健康志愿者體液標本中Mina53和Survivin的表達情況及其與胃癌臨床分期和預后之間的關系，以期能夠進一步易化檢驗流程、提高胃癌早期診斷率，從而更早進行干預，提高胃癌患者的生活質量，延長胃癌患者的生存時間。

1 王 珂，刑 敬，彭延申.胃癌組織Mina53的表達及其臨床病理意義〔J〕.胃腸病學，2010；15(2)：76-80.

2 苗蘭英，劉滿華，李 舒.胃癌組織中Survivin和DcR3基因的表達及臨床意義〔J〕.中國老年學雜志，2013；33(17)：4126-8.

3 黃國福，冷曉玲，陸 紅.結腸癌組織中Survivin、Caspase-3、Ki-67表達水平〔J〕.中國老年學雜志，2012；32(18)：4083.

4 胡 華，金建軍.胃癌患者血清Survivin抗體和胃泌素水平變化及意義〔J〕.山東醫藥，2013；53(8)：45-6.

5 Tsuneoka M，Fujita H，Arima N，etal.Mina53 as a potential prognosticfactor for esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Clin Cancer Res，2004；10(21)：7347-56.

6 Tamm I，Wang Y，Sausville E，etal.IAP-family protein Survivin inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas(CD95)，Bax，caspases and anticancer drugs〔J〕.Cancer Res，1998；58(23)：5315.

7 王 彬，譚逸然.Surivin表達在胃癌診斷中的作用研究〔J〕.陜西醫學雜志，2013；42(12)：1579-80.

〔2016-02-10修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

阮 佼(1980-)，男，主治醫師，主要從事重癥醫學研究。

R604

A

1005-9202(2017)13-3179-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.024