PTEN和P63在絕經前后子宮內膜息肉中的表達及意義

郝國榮 白鳳樓 胡佩

·論著·

PTEN和P63在絕經前后子宮內膜息肉中的表達及意義

郝國榮 白鳳樓 胡佩

目的 研究PTEN和P63在絕經前后子宮內膜息肉(EP)組織中的表達水平，探討其與EP發生、發展的關系。方法 選取存檔石蠟標本180 例，其中絕經前EP 54例，絕經后EP 40例，絕經前正常增生期子宮內膜46例，絕經后正常萎縮型子宮內膜40例。應用免疫組化SP法測定PTEN和P63在94例EP組織及86例正常子宮內膜組織細胞胞漿中的表達水平。結果 絕經前、后EP組織中PTEN表達率均低于正常EP組織(P<0.05)；絕經后EP組織中PTEN表達水平低于絕經前EP(P<0.05)；絕經前、后EP組織中P63表達率均高于正常EP組織(P<0.05)；絕經前、后EP組織中P63表達水平差異無統計學意義(P>0.05)。結論 PTEN表達缺失或降低及P63高表達可能是EP發生、發展的機制之一,PTEN可能與絕經后EP惡變率增高有一定關系。

PTEN；P63；子宮內膜息肉

子宮內膜息肉(endometrial polyps,EP)是子宮內膜的一種常見的局灶性良性病變，主要表現為突向宮腔的結節，呈單發或多發。雖然EP是良性病變，但其所引起的不孕、經期延長及異常子宮出血等癥狀嚴重影響女性的生活質量。而且有文獻報道EP存在一定的惡變潛能，其發展為惡性腫瘤的幾率為1%～3%，絕經后其惡變的幾率更高[1,2]。本研究通過探討PTEN基因和P63基因在絕經前、后EP組織中的表達水平，研究其與EP的發生、發展的關聯性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2008年1月至2015年5月在我院婦科進行手術治療的EP的漢族北方女性(絕經前54例，絕經后40例)為病例組。所有患者均為初治，術后均有病理證實為EP。有腫瘤家族史、慢性疾病(心腦血管疾病、糖尿病、腎病等)、曾接受過激素治療的均排除。選取同期因子宮肌瘤于我院接受子宮全切或次全切除患者為對照組。對照組所有標本術后均經病理學證實為無器質性病變的正常子宮內膜組織86例(絕經前正常的子宮內膜組織46例，絕經后萎縮正常子宮內膜40例)。2組初潮年齡、體重指數、年齡以及孕、產次等因素差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法 選取符合該試驗研究標準的EP，將其進行固定、制備石蠟包塊，并切成4 μm厚的石蠟切片。用SP免疫組化方法檢測病例組和對照組子宮內膜組織中PTEN及P63在細胞胞漿中的表達水平，每次染色過程均同步設置陰性對照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。采用計算機圖像分析技術對各組結果進行定量分析。

1.3 試劑 SP免疫組化試劑盒及鼠抗人P63單克隆抗體均由福州邁新生物技術公司提供。免疫人PTEN多克隆抗體由北京中杉生物技術有限公司提供。

1.4 結果判斷 (1)參照Constantine等標準：結合高倍鏡(×400)下將陽性細胞所占比例和染色強度兩者結合進行半定量計算。規定：陽性細胞所占比例的評分標準：<10%為0分，10%～40%為1分，41%～70%為2分，>70%為3分。(2)細胞染色強度的評分標準：不著色者計0分，黃色者計1分，棕黃色者計2分，黃褐色者計3分。兩種評分結果相加，0～1分者為陰性(-)，2分者為弱陽性 (+)，3～4 分者為陽性 (++)，5～6分者為強陽性。(+++)。本研究規定≥2分者為陽性，除此之外均為陰性。(圖1～4為PTEN在絕經前后EP組織及絕經前后正常子宮內膜組織免疫組化；圖5～8為P63在絕經前后EP組織及絕經前后正常子宮內膜組織免疫組化)

1.5 統計學分析 應用SPSS 17.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PTEN在絕經前、后EP組織及正常子宮內膜組織中的表達 絕經前、后EP組織中PTEN蛋白的表達呈低表達或表達缺失(圖3和圖4中PTEN的表達水平明顯高于圖1和圖2)，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1、2。

表1 PTEN與在絕經前EP組織及絕經前正常內膜組織中的表達 例(%)

表2 PTEN在絕經后EP組織及正常萎縮內膜組織中的表達 n=40,例(%)

圖1 PTEN在絕經前EP中的表達(SP×400)圖2 PTEN在絕經后EP中的表達(SP×400)

圖3 PTEN在絕經前正常子宮內膜中的表達(SP×400)圖4 PTEN在絕經后正常子宮內膜中的表達(SP×400)

2.2 PTEN在絕經前、后EP患者中的表達 與絕經前EP組織比較，絕經后EP組織中其PTEN呈表達缺失或低表達水平(圖1中PTEN的表達水平明顯高于圖2)，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 PTEN在絕經前、后EP組織中的表達 例(%)

2.3 P63蛋白在正常子宮內膜組織及絕經前、后EP組織中的表達 絕經前、后EP組織中P63蛋白陽性率高于正常內膜組織(圖5和圖6中P63的表達水平明顯高于圖7和圖8)，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4、5。

表4 P63在絕經前EP及絕經前正常子宮內膜組織中的表達 例(%)

表5 P63在絕經后EP及正常萎縮內膜組織中的表達 n=40,例(%)

圖5 P63在絕經前EP中的表達(SP×400)圖6 P63在絕經后EP中的表達(SP×400)

圖7 P63在絕經前正常子宮內膜中的表達(SP×400)圖8 P63在絕經后正常子宮內膜中的表達(SP×400)

2.4 P63在絕經前、后EP中的表達 P63在絕經前、后EP組織中表達水平(圖5與圖6中P63的表達水平相近)差異無統計學意義(P>0.05)。見表6。

表6 P63在絕經前、后EP中的表達 例(%)

3 討論

EP為可發生于任何年齡段女性的子宮內膜組織的一種良性病變，并且具有一定的惡變潛能。據資料統計EP惡變的概率為0.8%～4.8%，而且隨著年齡的增加，其惡變的風險也隨之增加，絕經后EP的惡變率為10%[3,4]。Gregoriou等[5]報道指出絕經前EP患者發生癌變的風險要明顯低于絕經后EP患者。因此對EP發生、發展機制的研究也成為目前研究的焦點。有研究顯示炎性刺激、藥物刺激或激素水平均與EP的發生、發展密切相關，尤其是子宮內膜局部雌激素水平、孕激素水平與EP的緊密相關[6]；近來隨著分子生物學這一學科的發展，多種細胞因子、凋亡相關基因的異常表達所導致的子宮內膜細胞的增殖-凋亡機制失衡這一機制在EP的發生、發展中起著重要作用。

PTEN是具有雙重磷酸酶活性的抑癌基因，其不僅可以通過多種細胞因子信號途徑：FAK、PIP3和MAPK等來抑制細胞的增殖、誘導細胞的凋亡，而且還能抑制腫瘤細胞侵襲轉移等。已有研究顯示PTEN表達缺失或下降與多種腫瘤的發生、發展密切相關[7,8]。Chu等[9,10]研究指出PTEN基因正常表達的小鼠的子宮內膜發生復雜性增生、不典型增生甚至癌變的風險均明顯低于PTEN缺失或低表達的小鼠，該研究表明PTEN基因對調控細胞的周期、維持子宮內膜的正常的生長平衡起著至關重要的作用。本研究顯示無論絕經前EP還是絕經后EP組織其PTEN與正常子宮內膜組織相比均呈現低表達狀態；絕經后EP組織中PTEN蛋白的表達水平明顯低于絕經前EP組織。雖然EP為良性疾病，但具有惡變潛能，且隨著年齡增加惡變風險也隨之增加。絕經期EP的發生多與細胞的增殖-凋亡這一機制失衡相關，而且隨著年齡的增長，自身的免疫機制下調、基因突變概率也明顯升高，可能會導致增殖-凋亡機制失衡的更加明顯，因此導致絕經期惡變率的升高。結合本研究結論，我們推測PTEN表達缺失或低表達可能與絕經后EP惡變相關。PTEN可能是EP預后的指標之一。

P63是抑癌基因P53的同源基因，其以全長型P63異構體(TAP63)及短截型p63異構體(△Np63)兩種形式存在。TAP63可以誘導細胞凋亡，△Np63通過抑制p53基因或TAP63活性而抑制細胞凋亡，在腫瘤的發生、發展中起著重要作用。由于△Np63結構比較穩定，所以p63基因主要以此種形態存在，發揮癌基因的作用。Nogueira等[11]報道絕經后EP組織中p63表達的陽性率明顯高于EP周圍正常的子宮內膜組織，因此，Nogueira等[11]認為P63尤其是△Np63通過調控細胞的增殖、分化從而影響絕經后EP息肉的形成。我們的研究顯示P63在Ep組織中表達的陽性率明顯高于正常內膜組織；但絕經前、后Ep組織中P63的表達水平差異無統計學意義(P>0.05)。P63是否可做為EP預后的指標還有待進一步研究。

綜上所述，本研究發現P63蛋白的高表達、PTEN蛋白的低表達或表達缺失，均可通過調控子宮內膜組織細胞的異常增殖或抑制細胞凋亡，影響EP的發生及發展。PTEN可能與EP預后有一定關系。隨著醫療科學技術的發展，從分子水平研究發病機制并為預防EP的復發、惡變理論依據，并進一步指導臨床。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.13.010

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