聯合檢測EZH2、Ki67在乳腺癌中的表達及相關性①

馮亞靜，田 寅，陳高輝，曹玉杰，周 昱

(佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007)

聯合檢測EZH2、Ki67在乳腺癌中的表達及相關性①

馮亞靜，田 寅，陳高輝，曹玉杰，周 昱

(佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：研究果蠅zeste基因增強子同源物 2(Enhancerofzestehomolog2，EZH2)和增殖細胞核抗原(Ki-67)在人乳腺癌中的表達及二者表達的相關性。方法：對50例乳腺癌石蠟包埋的組織標本，采用免疫組化法檢測EZH2、Ki-67的表達情況，分析其與臨床病理因素的關系及兩者的相關性。結果：①乳腺癌EZH2、Ki-67陽性表達率分別為78%、62%，明顯高于癌旁正常組織的表達，差異均有統計學意義(P<0.05)；②二者的表達與患者發病年齡、絕經情況無關，差異無統計學意義(P>0.05)，但與淋巴結轉移、臨床分期及組織學分級有關，差異均有統計學意義(P<0.05)；③乳腺癌中二者呈正相關表達(P<0.05)。結論 ：乳腺癌中EZH2、Ki-67的異常表達與淋巴結轉移、臨床分期、組織學分級相關，二者表達呈正相關。

乳腺癌;EZH2;Ki-67;聯合監測;相關性

隨著時代的發展，乳腺癌儼然已成為一種嚴重威脅女性健康,隨著飲食習慣及環境變化和人們生活水平的提高發病率逐年升高的惡性腫瘤之一[1]。EZH2是在PCG基因家族中起著核心作用的一個成員，它被研究發現歸屬轉錄抑制因子的一種，高表達于各種癌組織中[2]，密切相關于增殖腫瘤細胞。Ki-67是一種核抗原，高表達于增殖期細胞中，經研究發現其可作為細胞增殖活性的反映。國內外研究顯示，許多種惡性腫瘤的發生發展和預后均與EZH2 和Ki67 的異常表達息息相關。但聯合檢測EZH2與Ki67 在乳腺癌中的相關研究鮮有論述。

1 材料與方法

1.1 材料

選取50例2014～2016年佳木斯大學附屬第一醫院腫瘤科的乳腺癌手術患者的包埋石蠟標本及50例乳腺癌旁組織包埋的蠟塊標本。選取標準：選取患者術前均沒有行內分泌口服治療、卵巢去勢治療、靶向治療、放化療及其他治療方法。選取標本均經本院病理組織學檢查證實。

標本處理:福爾馬林緩沖溶液固定標本，常規脫水、透明、石蠟包埋，石蠟切片(3μm)，后貼于載玻片上，烘片，行免疫組織化學染色。

1.2 主要試劑

濃縮型鼠抗人EZH2單克隆抗體(CellSignalingTech-nology，USA)、濃縮型鼠抗人Ki-67單克隆抗體(CellSignalingTech-nology，USA),免疫組織化學試劑盒、顯色試劑盒(北京中山生物技術有限公司)。

1.3 方法

采用Envision免疫組織化學染色法檢測EZH2和Ki-67的表達，操作嚴格依照購置試劑盒說明書，用PBS緩沖液代替一抗做陰性對照。脫蠟至水，陽性對照組為已知陽性乳腺癌組織。抗原修復，滴加一抗4℃過夜，二抗孵育，顯色、復染、脫水、透明、封片。

1.4 結果判定

結果判定:EZH2和Ki-67二者均主要表達于細胞核，陽性染色為顯微鏡下胞核見黃色顆粒沉淀，陰性即不染色。染色結果采取雙盲法觀察，每個標本隨機觀察高倍視野(×400)5個，對各個視野中陽性細胞個數、細胞總個數行計數。最后結果采取半定量積分法來分析。按文獻參照染色強度評分[3]：0分、1分、2分、3分分別為不顯色、淡黃色、棕黃色、棕褐色。百分比評分(陽性細胞占細胞總數的比例)：0分、1分、2分、3分、4分，分別為陰性、陽性細胞<25%、25%～50%、50%～75%、>75%。總體評分值=評分(染色強度)×評分(陽性細胞比例)，判定：陰性(-)、弱陽性(+)、陽性(++)、強陽性(+++)分別為總分≤3 分、>3分且≤5分、>5分且≤7分、>7 分。

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1.5 統計學方法

采用SPSS16.0 ，樣本陽性率用χ2檢驗，P<0.05差異具有統計學意義。

2 結果

2.1EZH2表達

EZH2陽性表達主要位于胞核。EZH2在乳腺癌中、癌旁正常組織中的陽性表達率分別為78%、30%，在乳腺癌及癌旁正常組織中比較差異有統計學意義(χ2= 23.19，P<0.05),見表 1。

表1 乳腺癌及乳腺癌旁正常組織中EZH2的表達(例數)

2.2Ki-67表達

Ki-67陽性表達主要位于胞核。Ki-67在乳腺癌中、癌旁正常組織中的陽性表達率分別為62%、34%，Ki-67在乳腺癌及癌旁正常組織中比較差異有統計學意義(χ2=7.85，P<0.05)，見表2。

表2 乳腺癌及乳腺癌旁正常組織中Ki-67的表達

2.3EZH2與臨床病理因素的關系

見表3。經統計學分析，EZH2的表達與組織分化、臨床分期及淋巴結轉移情況有相關性，差異有統計學意義(P<0.05)；與年齡、絕經情況無相關性，差異無統計學意義(P>0.05)。

表3 EZH2與臨床病理因素的關系

2.4Ki-67與臨床病理因素的關系

經統計學分析，Ki-67的表達與組織分化、臨床分期及淋巴結轉移情況有相關性，差異有統計學意義(P<0.05)；與年齡、絕經情況無相關性，差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 Ki-67與臨床病理因素的關系

2.5EZH2與Ki-67二者的關系

經統計學分析，EZH2與Ki-67表達成正相關(χ2=3.93，P<0.05) ，見表 5。

表5 乳腺癌中EZH2 與 Ki-67的相關性

3 討論

EZH2在PCG基因家族中扮演著重要角色,細胞的生長及調節與其相關,研究發現，機制調節細胞增殖主要是抑制染色質中的靶點基因,增殖細胞進入S期與其高表達相關。原代細胞的生長能力增強,EZH2在多種原發腫瘤中表達,密切相關于腫瘤的形成和生長[4]。作為轉錄抑制因子之一的EZH2蛋白，多種基因的活性可被其抑制,尤其是腫瘤轉移抑制基因,即EZH2一定程度上能夠促進腫瘤的侵襲和轉移[5]。姚凡等[6]采用免疫組化法檢測EZH2在乳腺癌(共105例)中的表達，發現乳腺癌組織中EZH2陽性表達率為 69.5%，并分析淋巴結轉移情況、腫瘤惡性程度與其表達水平有正相關性，ER表達和乳腺癌預后與其表達有負相關性，由此發現乳腺癌惡性細胞的侵襲、轉移與EZH2的表達密切相關。

作為位于細胞核內[7]的一種大分子蛋白質，細胞增殖相關核抗原Ki67蛋白簡稱Ki67。Gerdes[8]等發現Ki67 除外G0期不表達，其他G1、G2、S、M期均表達。后又有發現Ki67[9]在活躍增值組織高度表達，低表達于靜止細胞中，二者研究均吻合，其他國內外研究亦驗證了這一結論，有許多學者已將其作為細胞增殖度的標志之一[10]。隨著生物醫學發展，另有證明存在Ki67 對乳腺癌預后判斷也有參考意義的依據。

目前,EZH2和Ki67蛋白聯合監測的表達在膀胱癌、宮頸癌、結腸癌、胃癌中的表達研究較多。EZH2、Ki67在轉移性結腸癌、胃癌中的表達明顯增高,而且和未轉移者相比預后較差。二者可作為腫瘤標志物監測結腸癌、胃癌的演變。目前在國外關于兩種蛋白EZH2和Ki67聯合檢測在乳腺癌中的研究鮮見報道,而在國內尚未見報道。

本研究試圖采用免疫組化方法,通過對EZH2和Ki67兩種蛋白在癌旁正常組織及乳腺癌組織中表達的聯合檢測,在探討其與乳腺癌各臨床病理參數的基礎上，更進一步探討二者表達的相關性及此種相關性可能蘊含的臨床意義，即與診斷、治療以及預后的關系。

[1]王新，韓麗麗，趙海豐，等．PDCD4、mTOR在乳腺癌中的表達及意義[J]． 黑龍江醫藥科學，2016，39(1):82-86

[2]包合新,李建國,邢桂濱．EZH2和Bmi-1基因在結直腸癌組織中的表達及其意義[J]． 黑龍江醫藥科學，2014，37(1) :10-12

[3]周穎，曾林波，李喆．甲狀腺功能亢進癥患者肝功能生化指標的測定及其臨床意義 [J]．標記免疫分析與臨床，2010，17(2)：115-116

[4]ChenH,RossiterC,AntonorakisSE.CloningofahumanhomologoftheDrosophilaenhancerofzestegene(EZH2)thatmapstochromosome21q22.2 [J].Genomics,1996,38:30

[5]HillierLW,FultonLA.TheDNAsequenceofhumanchromosome7[J]．Nature,2003,424:157

[6]姚凡, 劉崇,房月,等.EZH2在乳腺癌中的表達及其臨床意義[J]. 中國微生態學雜志, 2013, 25(2):143-146

[7]DowsettM,SmithIE,EbbsSR,etal.PrognosticvalueofKi67expressionaftershort-termpresurgicalendocrinetherapyforprimarybreastcancer[J].JNatlCancerInst, 2007, 99(13):167-170

[8]GerdesJ，SchwabU，LemkeH.ProductionofamousemonoclonalantibodyreactivewithahumannuclearantigenassociatedwithcellProliferation[J]．IntJCancer,1983，31：13-20

[9]AnderUrruticoechea，IanESmith，MitchDowsett,etal．ProliferationmarkerKi-67inEarlybreastcancer[J]．Nature,2005，23(28)：7212-7220

[10]XuT,ZhuY,XiongY,etal.Ki67suppressestumorigenicityandregulatesG1/Stransitionofhumanhepatocellularcarcinomacells[J].Hepatology, 2009, 50(1):113-121

佳木斯大學研究生創新項目，編號：YM2016-061。

馮亞靜(1989～)女，河南新鄭人，在讀碩士研究生。

周昱(1969～)男，黑龍江雙鴨山人，學士，副主任醫師，碩士研究生導師。E-mail：zhouyu731@126.com。

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1008-0104(2017)03-0080-02

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