急性胰腺炎大鼠胰腺細胞骨架F-actin與再生因子RegI相關性研究①

崔 瑩，田 樺，程 開，遲男男，張雪梅，卓 越

(佳木斯大學附屬第一醫院， 黑龍江 佳木斯 154003)

急性胰腺炎大鼠胰腺細胞骨架F-actin與再生因子RegI相關性研究①

崔 瑩，田 樺，程 開，遲男男，張雪梅，卓 越

(佳木斯大學附屬第一醫院， 黑龍江 佳木斯 154003)

目的：研究L-精氨酸誘導大鼠急性胰腺炎胰腺細胞骨架F-actin與再生因子RegI的水平變化情況及相關性。方法：將SD大鼠隨機分為空白組、對照組、模型組，通過腹腔注射L-精氨酸誘導急性胰腺炎模型后將兩組分別選取12h、24h、48h、72h時間點觀察胰腺大體病理變化，通過westernblot檢測各組F-actin與RegI的含量。結果：western-blotting檢測模型組F-actin相對表達量與空白組、對照組相比差異有統計學意義(P<0.05)，模型組RegI相對表達量較空白組、對照組明顯升高，且差異有統計學意義(P<0.05)。結論：腹腔注射L-精氨酸誘導的急性胰腺炎胰腺細胞骨架F-actin與再生因子RegI可能呈負相關。

胰腺炎；細胞骨架；F-actin；RegI蛋白

急性胰腺炎(AP)是以胰腺局部炎癥反應為主要特征的疾病，細胞骨架對于維持細胞的形態有一定作用，同時在細胞內運輸和細胞器移動間起著交通作用，并在細胞有絲分裂中起著重要作用。急性胰腺炎時胰腺腺泡細胞骨架發生變化，F-actin(纖維狀肌動蛋白)出現解聚，含量降低。本實驗檢測F-actin與再生因子RegI(胰島再生源蛋白)各時間段的含量變化，從而探討二者的相關性以及急性胰腺炎組織壞死后再生蛋白RegI對胰腺的保護與修復作用。

1 材料與方法[1,2]

1.1 主要動物及材料

雄性SD大鼠(n=45), 體重250～300g(由佳木斯大學實驗動物中心提供)。L-精氨酸(上海翊圣公司)，RegIβ抗體(博奧森生物公司)，F-actin抗體(美國abcam公司)，β-actin抗體(三鷹生物有限公司)，二抗(博奧森公司)等。

1.2 實驗方法

隨機分為A組(AP模型組)、B組(對照組)、C組(空白組)，前兩組再按12h、24h、48h、72h(每個時點n=5)分組。實驗前各組動物禁食12h，不禁水。A組腹腔注射20%L-精氨酸(200mg/100g3次，每隔1h)，B組腹腔注射同體積的生理鹽水，C組不予處理。按實驗設計分別于各時間點處死大鼠，取胰腺分為固定和凍存用。常規脫水、透明、包埋、切片(3μm)，蘇木精-伊紅染色(HE染色)；Western-blotting檢測F-actin和RegI表達量，應用全自動化學發光圖像分析系統進行曝光并對其灰度值分析。

1.3 統計學方法

采用SPSS20軟件對數據進行統計，用Pearson積差相關分析法分析F-actin和RegI的相關性，P<0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 根據Nakamura[3]等標準從水腫、炎細胞浸潤、壞死進行病理組織評分，各組胰腺織病理評分見表1。

表1 大鼠胰腺病理評分±s，分)

注:P<0.05

2.2western-blotting檢測結果顯示：AP模型組F-actin蛋白表達量較空白組、對照組減少；AP模型組RegI蛋白表達量與空白組、對照組相比明顯增多。見表2。

表2 胰腺組織F-actin和RegI western blot圖像凈光密度比值

注:P<0.05

3 討論

細胞骨架微絲結構是F-actin與G-actin之間維持著聚合和解聚的動態平衡，大量的F-actin趨向于胞周分布,形成F-actin環，從而維持著細胞的形態與功能。有文獻表明[4]，F-actin與細胞周期進入分裂末期的胞質分裂有密切關聯。細胞骨架的改變可致細胞遷移及黏附力降低，同時也降低細胞增殖能力。當胰腺受損時，胰酶原顆粒提前釋放胰酶并激活，細胞骨架微絲出現結構紊亂，F-actin含量減少，導致腺泡細胞分泌胰酶受阻，加重自身消化[5]。Reg是胰腺炎時胰腺組織中提取出的一組蛋白，當胰腺損傷時腺泡細胞分泌大量Reg，故該蛋白表達呈升高趨勢，RegI在48h雖有下降，但仍呈現較高水平，因此被稱為應激蛋白，對保護、修復胰腺有重要作用。R.Graf,Ph.D[6]使用雨蛙素誘導急性胰腺炎，發現胰腺組織中RegI明顯表達，并在48h達高峰，說明RegI對胰腺具有保護、修復作用，并促進導管和β胰島細胞有絲分裂；但在Bimmler[7]的實驗則證明輕度、中度急性胰腺炎可見RegI表達明顯升高，而在重度急性胰腺炎則出現低表達情況，說明在胰腺受到輕、中度損害的前提下，RegI出現明顯高表達。本實驗F-actin在胰腺受損時逐漸下降，RegI在胰腺炎發展時逐漸升高，于24h后兩者呈相反趨勢，RegI在一定水平刺激F-actin增多,從而穩定細胞達到再生修復的作用。RegI蛋白與F-actin具體相互作用機制及信號傳導途徑尚不十分清楚，具體機制有待進一步研究。

[1]張舒揚，艾迎春.急性胰腺炎大鼠血清NGAL變化及意義[J].黑龍江醫藥科學,2015,38(2):61-63

[2]李思，王歆，沈德鳳.速胰康片劑對急性胰腺炎小鼠血清白細胞介素-6的影響[J].黑龍江醫藥科學,2015,38(1):47-50

[3]NakamuraH,TashiroM,AsaumiH,etal.IncreasedexpressionofSmad6deterioratesmurineacuteexperimentalpancreatitisintwomodels[J] .Gut, 2008, 57(6):788-798

[4]ShihJY,LeeYC,YangSC,etal.Collapsinresponsemediatorprotein-1:anovelinvasion-suppressorgene[J].ClinExpMetastasis,2003, 20:69-76

[5]黃剛,湯為學,陶小紅.生長抑素對大鼠胰腺腺泡細胞內骨架蛋白F-actin分布和細胞外分泌功能的影響[J].第三軍醫大學學報,2010,32(7):672-676

[6]GrafR,SchinesserM,LussiA,etal.Coordinateregulationofsecretorystressproteins(PSP/regandPAPIPAPII&Ⅲ)intheratexocrinepancreasduringexperimentalacutepancreatitis[J].SurgRes,2002,105:136-144

[7]BimmlerD,SchiesserM,PerrenA,etal.CoordinateregulationofPSP/regandPAPisoformsasafamilyofsecretorystressproteinsinananimalmodelofchronicpancreatitis[J].JSurgRes,2004,118:122-135

Correlation between cytoskeleton F-actin and regenerative factor RegI in acute pancreatitis ratsL

CUIYing,TIANHua,CHENGKai,CHINan-nan,ZHANGXue-mei,ZHUOYue

(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003，China)

Objective: To investigate the changes and correlation of cytoskeleton F-actin and regenerative factor RegI in pancreas tissue of rats with acute pancreatitis induced by L-arginine. Methods: SD rats (n=45)were randomly divided into blank group, control group and model group. Acute pancreatitis was induced by intraperitoneal injection of L-arginine, then the rats were sacrificed at 12h, 24h, 48h and 72h. The levels of F-actin and RegI were detected by western blot. Results: The relative expression of F-actin in model group was significantly lower than those in blank group and control group (P<0.05),andtherelativeexpressionofRegIinmodelgroupwassignificantlyhigherthanthoseinblankgroupandcontrolgroup(P<0.05). Conclusion: Cytoskeleton F-actin may be negatively correlated with RegI in acute pancreatitis induced by intraperitoneal injection of L-arginine.

pancreatitis；cytoskeleton；F-actin；RegI

1. 黑龍江省自然基金面上項目, 編號：H2015072；2. 佳木斯大學研究生創新項目,編號：YM2016_021；3. 佳木斯大學校管項目,編號:S2009-060；S2011-038。

崔瑩(1987～)女，內蒙古呼倫貝爾人，在讀碩士研究生。

卓越(1964～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，教授，碩士研究生導師。E-mail：zhuoyuejmsu@126.com。

R

A

1008-0104(2017)03-0028-02

2017-03-03)