左乙拉西坦對癲癇模型大鼠海馬組織中GFAP及PSD95表達的影響①

王 禹，聶 磊，趙冬梅，鄒艷紅，李春玉

(佳木斯大學附屬第一醫院兒內二科,黑龍江 佳木斯 154003)

左乙拉西坦對癲癇模型大鼠海馬組織中GFAP及PSD95表達的影響①

王 禹，聶 磊，趙冬梅，鄒艷紅，李春玉

(佳木斯大學附屬第一醫院兒內二科,黑龍江 佳木斯 154003)

目的：研究左乙拉西坦對癲癇模型大鼠海馬組織中膠質纖維性蛋白(GFAP)及突觸后致密物(PSD95)表達的影響。方法：選取清結級Wistar大鼠104只作為研究對象，隨機分為4組：生理鹽水組(NS組)23只，左乙拉西坦對照組(LEV組)24只，模型組(Li-pilo組)27只，模型+左乙拉西坦組(Li-pilo+LEV組)30只，LEV組與Li-pilo+LEV組的大鼠每日給予左乙拉西坦200mg/kg進行灌胃，連續給藥4周。分別于第7d、14d、28d采用RT-PCR方法動態檢測大鼠海馬組織中GFAP及PSD95表達情況。結果：經治療后，與NS組相比，Li-pilo+LEV組第7d、14d、28dGFAP的表達水平明顯升高，PSD95的表達量明顯降低(P<0.05)；與Li-pilo組相比，Li-pilo+LEV組第7d、14d、28dGFAP的表達水平明顯降低，PSD95的表達水平明顯升高(P<0.05)。結論：左乙拉西坦的抗癲癇作用可能與通過上調PSD95的表達及抑制GFAP的表達有關，具體作用機制還需進一步研究。

左乙拉西坦；癲癇模型；海馬組織；GFAP；PSD95

癲癇是兒科常見的神經系統疾病之一，是一種由大腦神經元反復發作性異常放電所引起的暫時性中樞神經系統功能障礙的慢性疾病[1]。臨床研究表明，癲癇的反復、持續發作以及多種抗癲癇藥物均會對發育階段兒童的認知功能造成不同程度的影響，嚴重影響了患兒的生活質量[2]。因此，尋找一種既能有效抗癲癇還具有腦保護的抗癲癇藥物已成為國內為關注的焦點。左乙拉西坦是一種新型廣譜抗癲癇藥物，其主要通過與中樞神經元突觸囊泡蛋白結合而發揮抗癲癇作用，對多種癲癇發作類型具有明顯的療效而且還能改善患兒認知功能[3]。本研究通過建立癲癇大鼠模型，旨在探討左乙拉西坦對癲癇模型大鼠海馬組織中膠質纖維性蛋白(GFAP)及突觸后致密物(PSD95)表達的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

選取清結級Wistar大鼠104只(大連醫科大學動物實驗中心提供)作為研究對象，體重約為(100±20)g。隨機分為4組：NS組23只，LEV組24只，Li-pilo組27只，Li-pilo+LEV組30只。

1.2 實驗試劑

氯化鋰和匹羅卡品(Sigma公司)、左乙拉西坦(藥品注冊號H20091019UCBS.A.Belgim公司)、RT-PCR試劑盒和引物合成(天津市寶坻區意園達生物試劑有限公司)。兔抗大鼠GFAP抗體和兔抗大鼠PSD95抗體(上海寶泰生物科技有限公司)。

1.3 動物模型的制備

模型建立的具體步驟[4]：Li-pilo組和Li-pilo+LEV組先給予120mg/kg氯化鋰腹腔注射，于20h后腹腔注射1.5mg/kg東莨菪堿，再于0.5h后腹腔注射80mg/kg匹羅卡品，并觀察大鼠的行為。根據RACINE癲癇等級分級標準[5]，0級：無反應或抽搐停止；1級：面部、嘴出現節律性抽動；2級：出現點頭或甩尾的現象；3級：肌陣攣、單側肢體抽動；4級：出現多肢抽動或強直；5級：全面性強直，伴不自主跌倒。當出現Ⅳ級或以上發作持續45min后，給予地西泮10mg/kg腹腔注射終止發作。成功建模后，LEV組與Li-pilo+LEV組的大鼠每日給予左乙拉西坦200mg/kg進行灌胃，NS組和Li-pilo組給予生理鹽水灌胃，連續給藥4周。分別于第7d、14d、28d提取大鼠海馬組織，采用RT-PCR方法動態檢測大鼠海馬組織中GFAP及PSD95表達情況。

1.4RT-PCR方法檢測大鼠海馬組織中GFAP及PSD95表達水平

PCR反應條件：預變性(95℃，5min)，變形性(95℃，30s)，退火(55℃，30s)延伸(72℃，60s)，終末延伸(72℃，10min)。最后采用Quantityone凝膠成像系統采集和分析結果。

1.5 統計學方法

2 結果

(1)NS組與LEV組相比，GFAP及PSD95表達水平無明顯差異(t=2.473,P>0.05)；(2)與NS組相比，Li-pilo+LEV組第7d、14d、28dGFAP的表達水平明顯升高(t=5.849,P<0.05)；與Li-pilo組相比，Li-pilo+LEV組第7d、14d、28dGFAP的表達水平明顯降低(t=6.752,P<0.05)。(3)與NS組相比，Li-pilo+LEV組的PSD95的表達量明顯降低(t=4.137,P<0.05)；與Li-pilo組相比，Li-pilo+LEV組的PSD95的表達水平明顯升高(t=4.642,P<0.05)。見表1。

表1 大鼠海馬組織中GFAP和PSD95的相對表達量比較

3 討論

癲癇是自發、短暫、慢性、反復發作的神經系統疾病，好發于小兒時期[6]。癲癇科引起患兒認知功能障礙、記憶力減退等表現，長期反復的癲癇發作可對患兒日后生長發育及生活質量造成嚴重影響[7]。國內外研究表明，左乙拉西坦作為一種新型廣譜抗癲癇藥物，在治療各類型癲癇疾病中均有明顯療效，該藥物主要通過與中樞神經元突觸囊泡蛋白結合而發揮抗癲癇作用[8]。PSD95是突觸后膜的一層致密的蛋白質復合體，與N-甲基-D-天冬氨酸結合，共同參與興奮性突觸的可塑性調節。GFAP屬于細胞骨架蛋白家族，在調節星形細胞運動及神經突觸形成過程中具有重要意義[9]。本研究結果表明，應用左乙拉西坦治療后，大鼠海馬組織中GFAP的表達水平明顯升高，PSD95的表達水平明顯降低。綜上所述，左乙拉西坦的抗癲癇作用可能與通過上調PSD95的表達及抑制GFAP的表達有關，具體作用機制還需進一步研究。

[1]聶磊,王海燕,李春玉,等. 左乙拉西坦對癲癇大鼠海馬組織中GFAP及5-HT2A受體表達的影響[J]. 黑龍江醫藥科學,2015,38(2):26-28

[2]聶磊,張濤,王海燕,等. 左乙拉西坦對癲癇大鼠海馬組織中5-HT2A受體表達及其認知功能的影響[J]. 中國老年學雜志,2015,35(19):5415-5417

[3]韓麗萍,王海燕,喬霜,等. 左乙拉西坦對癲癇大鼠海馬組織中μ-calpain及caspase-3表達的影響[J]. 黑龍江醫藥科學,2015,38(6):61-62，64

[4]潘曉華,王海燕. 左乙拉西坦對癲癇大鼠海馬組織EphA4表達的影響[J]. 齊齊哈爾醫學院學報,2016,37(10):1272-1273

[5]王禹,王海燕,王婧,等. 左乙拉西坦對癲癇大鼠海馬組織中Syt1和PSD95表達的影響[J]. 黑龍江醫藥科學,2016,39(4):14-15

[6]王一川,穆國軍,王影. 左乙拉西坦對致癇大鼠海馬組織中BMP4表達的影響[J]. 黑龍江醫藥科學,2014,37(3):28-30

[7]馮宏達,王禹,王海燕,等. 左乙拉西坦對癲癇大鼠海馬組織中突出后致密物PSD-95表達的影響[J]. 黑龍江醫藥科學,2014,37(4):63-64

[8]張巖,王海燕,王影,等. 左乙拉西坦對癲癇大鼠認知功能的影響研究[J]. 黑龍江醫藥科學,2013,36(2):6-8

[9]王海燕,王影,聶磊,等. 左乙拉西坦對癲癇大鼠認知功能及海馬組織中NPY和NCAM-mRNA表達的影響[J]. 黑龍江醫藥科學,2013,36(3):3-5

1.黑龍江省衛生計生委科研課題，編號：2014-225；2.佳木斯大學校級面上項目，編號：13z1201542。

王禹(1968～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，副主任醫師。

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1008-0104(2017)03-0018-02

2016-11-19)