Foc4 2個谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶基因的克隆、鑒定及其在外源氧化脅迫下的表達

齊興柱，汪軍，劉磊

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4 2個谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶基因的克隆、鑒定及其在外源氧化脅迫下的表達

齊興柱1,2，汪軍3，劉磊3

1 海南大學熱帶生物資源教育部重點實驗室，海南海口 570228 2 海南大學海洋學院，海南海口 570228 3 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院環(huán)境與植物保護研究所，海南海口 571101

齊興柱, 汪軍, 劉磊. Foc4 2個谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶基因的克隆、鑒定及其在外源氧化脅迫下的表達. 生物工程學報, 2017, 33(6): 995–1005.Qi XZ, Wang J, Liu L. Cloning and characterization of two glutathione S-transferases cDNAs in Foc4 and expression under exogenous oxidative stress. Chin J Biotech, 2017, 33(6): 995–1005.

為鑒定香蕉枯萎病菌 (尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種，f. sp.44) 中的2個假想谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶 (GSTs) ，采用RT-PCR方法克隆了這2個GSTs基因cDNA編碼序列，隨后分別將2個基因定名為1和2。其中，1的開放閱讀框長609 bp，編碼202個氨基酸殘基，2的開放閱讀框長693 bp，編碼230個氨基酸殘基。進化樹分析表明：Fogst1屬于GSTs超家族的sigma(σ)亞型成員，F(xiàn)ogst2屬于GSTs超家族中目前未知的亞家族成員。為了驗證1和2的表達，分別構(gòu)建了1和2的原核表達重組載體pET28a-1和pET28a2，并將pET28a-1和pET28a2轉(zhuǎn)化到大腸桿菌表達菌株BL21，經(jīng)IPTG誘導后獲得以可溶形式表達的重組蛋白Fogst1和Fogst2。GSTs 活性分析表明，以CDNB為底物檢測，2個重組蛋白均具有GSTs酶活性。分別取外源氧化脅迫處理后1、5、12、24 h菌絲樣品進行相對熒光定量PCR分析，結(jié)果表明：1和2在前5 h表達量均大幅上調(diào)，表達量隨后下調(diào)并恢復正常水平。這些結(jié)果均暗示1和2可能參與了4抗外源氧化脅迫過程。

4，谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶，氧化脅迫

尖孢鐮刀菌古巴專化型4號小種 (f.sp.4，4) 是香蕉枯萎病的病原菌，自2001年首次在海南省三亞鳳凰鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)以來，對海南省乃至我國香蕉種植業(yè)造成了重大影響。谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶 (Glutathione-transferases，GSTs；……