種雞開產前免疫不同新城疫傳染性支氣管炎禽流感H9 三聯油苗的效果觀察

焦鵬濤，蔣維維，姬忠華，何怡寧，曹艷杰，吳科敏 ，陳 果，劉 婷，侯雪嬌，何旭少，韋 平

(1.廣西大學養禽與禽病研究所，廣西南寧530005 ； 2.廣西鴻光農牧有限公司，廣西容縣537500)

種雞開產前免疫不同新城疫傳染性支氣管炎禽流感H9 三聯油苗的效果觀察

焦鵬濤1，蔣維維2，姬忠華1，何怡寧1，曹艷杰1，吳科敏1，陳 果1，劉 婷1，侯雪嬌1，何旭少2，韋 平1

(1.廣西大學養禽與禽病研究所，廣西南寧530005 ； 2.廣西鴻光農牧有限公司，廣西容縣537500)

為了探討盡可能延長母雞開產后免疫保護期的可能性，本試驗選用市售的兩種新城疫(ND)-傳染性支氣管炎(IB)-禽流感(AI)H9三聯滅活商品疫苗在廣西地區主要地方品種三黃雞的兩個品系黃1和黃2上分別進行對比免疫試驗。種雞開產前的150日齡分別使用疫苗A(精制濃縮型油苗)、疫苗B (普通油苗)免疫，然后分別于免疫時以及免疫后的1個月、2個月、3個月、4個月和5個月分別使用HI試驗和ELISA測定兩組雞只相應產生的血清抗體滴度。結果表明，在黃1品種上的試驗，疫苗A免疫組的ND抗體水平高于疫苗B免疫組，兩組雞的H9、IB抗體水平則無明顯差異；在黃2品種的試驗，疫苗A免疫組的ND、H9、IB抗體水平均高于疫苗B免疫組；開產前免疫疫苗A后5個月，黃1和黃2品種均仍能維持較高的抗體水平，其中黃1品種可推遲補免時間20多天，黃2品種推遲補免時間1個月。

新城疫 ； 傳染性支氣管炎 ； 禽流感H9 ； 三聯油苗 ； 血清抗體 ； 免疫效果

新城疫(ND)是一種急性、高度接觸性傳染病，主要侵害雞和火雞，亦可感染其他禽類及人類，是禽類重要疾病之一，世界動物衛生組織將其列為A類傳染病，我國亦將其列為一類動物傳染病；傳染性支氣管炎(IB)是一種可引起雞呼吸道、輸卵管、腎臟、腸道等多個器官上皮細胞損傷，導致雞的呼吸道、泌尿生殖系統及腸道疾病的傳染病，并且容易引起細菌、支原體等的繼發感染；禽流感(AI)分為高致病性和低致病性兩種類型，其中H5亞型屬于高致病性的A類(一類)傳染病[1]，而H9亞型則屬于低致病性的而且是我國當前流行的主要亞型[2]。很長一段時間以來，ND、IB和H9亞型禽流感在雞群中的流行和危害給我國養殖業帶來了巨大損失，這3種疾病是養禽業中必須預防和控制的重要疾病。

單苗分別接種(注射3次)預防往往導致免疫程序復雜、接種次數多、勞動強度大、對免疫雞只的應激大等問題，使用新城疫-傳染性支氣管炎-禽流感H9三聯滅活疫苗(以下簡稱新-支-流三聯苗)能1次完成3種疫苗的免疫，收到一針預防3種疾病的效果，具有減少免疫注射次數、減少應激、省時省力省錢等優點[3]。種雞開產前免疫油苗，不僅能使其在產蛋期間的安全得到保障，而且還能使后代雛雞得到高而整齊的母源抗體，對于保證雛雞的存活率具有重要意義[4-5]。目前生產上普遍在開產前免疫的是普通的新-支-流三聯疫苗，由于免疫抑制病的存在等因素，疫苗產生的保護水平的免疫維持時間相對比較短，往往很難維持到產蛋高峰期。而且隨著產蛋率上升，雞體代謝旺盛，抵抗力差，就極易受到病原的侵襲[6]。生產實踐中，如果開產前的免疫所產生的抗體不足以維持到產蛋高峰期過后的話，往往需要正在產蛋高峰期或者還未達到高峰期就進行補免，補免所帶來的應激反應可使產蛋率受到影響，雞群往往需要數天至1周甚至更長的時間才能使其產蛋恢復到正常水平，給種雞的生產效益帶來很大的損失。為了尋找一種在種雞開產前免疫既可產生較高的抗體水平，又能使其保護水平的免疫力維持到產蛋高峰期過后的新-支-流三聯苗，進一步了解、掌握不同新-支-流三聯苗對種雞開產前免疫的效果。筆者選用兩類市售三聯滅活疫苗A(精制濃縮型)和B(普通型)，在廣西鴻光農牧有限公司開展了試驗觀察。

1 材料與方法

1.1 試驗疫苗 新-支-流(H9)精制濃縮三聯苗A(公司A生產，批號20150324)；普通新-支-流(H9)三聯苗B(公司B生產，批號20150411)。供試疫苗均在有效期內。

1.2 試驗動物 開產前即150 日齡三黃雞兩個品系黃1和黃2，為廣西鴻光農牧有限公司種大欖雞場籠養的父母代種雞，飼養方式、日齡、免疫程序、試驗雞的數量等條件基本一致。

1.3 診斷試劑 禽流感H9株抗原(批號20150201)和陽性血清(批號20150208)，新城疫抗原(批號20150311)和陽性血清(批號20150314)，均購自中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所；傳染性支氣管炎抗體檢測試劑盒，由廣西大學養禽與禽病研究所研發[7]；紅細胞懸液采自非免疫雞只，按照常規方法制備成1%懸液；生理鹽水、抗凝劑、96孔V型板等自備。

1.4 試驗方案 試驗于2015年3月～8月在廣西鴻光農牧有限公司的黃1和黃2兩個品系中分別進行，免疫疫苗A組、疫苗B組各6 500羽；在種雞開產前即150 日齡，分別按常規肌肉注射免疫疫苗A組、疫苗B組(0.5 mL/只)；然后在免疫時以及免疫后的1個月(M)、2 M、3 M、4 M和5 M分別隨機采血樣(30份/組)進行新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感H9抗體的檢測。

1.5 檢測方法 新城疫和禽流感H9的血清抗體，按照《中國獸藥典》方法和試行規程進行[8]；傳染性支氣管炎的血清抗體，按照廣西大學養禽與禽病研究所建立的間接N-ELISA方法[7]進行檢測，統計組內平均值，分析組間差異。

1.6 數據統計分析 數據用生物學統計軟件SPSS21.0進行統計分析。

2 結果與分析

兩個品系雞上進行的試驗及其3種病原的特異性抗體產生情況見表1。

表1 兩種品系雞免疫兩種疫苗后ND、IB、H9抗體效價檢測結果 log2/OD值

注：同一列肩標不同小寫字母之間的數據差異顯著(P<0.01或P<0.05)，不同大寫字母的數據之間差異極顯著(P<0.01)，未標字母表示差異不顯著(P>0.05)

2.1 黃1品種抗體水平及消長規律 黃1品種雞免疫兩組疫苗后，ND抗體水平兩組都是先下降，后上升，免疫后4 M、5 M兩組抗體水平差異極顯著(P<0.01)；而H9抗體水平兩組都是先上升后下降，差異不顯著(P>0.05)(圖1)；IB抗體水平兩組的消長規律都是免疫三聯疫苗后抗體水平先下降，1 M后開始上升，3 M后達到高峰，免疫后5 M兩組抗體均下降，水平基本一致(P>0.05)(圖2)。

圖1 黃1品種ND、H9抗體水平消長規律圖2 黃1品種IB抗體水平消長規律

2.2 黃2品種抗體水平變化及消長規律 黃2品種雞免疫后的ND抗體水平，兩組均在免疫后升高，免疫后1 M達到峰值，然后開始下降，2 M后又開始上升，免疫后4 M恢復到較高水平，免疫后5 M又下降到較低水平，其中免疫后4 M、5 M兩組抗體水平差異極顯著(P<0.01)；H9抗體水平兩組在免疫后均整體升高，免疫A組在2 M后有所下降，免疫B組升高，兩組在免疫3 M后開始下降，其中免疫后5 M兩組抗體水平差異極顯著(P<0.01)(圖3)。IB抗體水平兩組在免疫后均先升高后下降，免疫后4 M恢復至較高的水平，免疫后5 M又下降到較低水平，其中免疫后1 M、3 M兩組抗體水平差異極顯著(P<0.01)，免疫后5 M兩組抗體水平差異顯著(P<0.05)，而且整體來看免疫A組穩定性優于免疫B組(圖4)。

圖3 黃2品種ND、H9抗體水平消長規律圖4 黃2品種IB抗體水平消長規律

3 討論

新-支-流精制三聯苗A在黃2品種試驗中ND、H9、IB抗體水平均優于普通三聯疫苗B，在黃1品種試驗中ND抗體水平優于普通三聯疫苗B，H9、IB抗體水平無明顯差異。免疫新-支-流精制三聯苗產生抗體滴度的離散度在兩個品種中均小于免疫普通三聯油苗。

總結長期生產實踐的經驗是把ND≥7 log2、H9≥8 log2作為種雞群的臨床發病保護水平，當抽檢樣本有20%的個體低于保護率水平時，需要對種雞群進行補免[9-11]。根據試驗的具體情況及其多年來的生產經驗，為了使雞群能抵抗外界強毒的攻擊，對于產蛋前免疫普通三聯苗的雞群，一般在免疫后的100～106 d進行一次補免(雖然此時抗體水平處于臨界值以上)。

而本次試驗中，根據抗體檢測的結果，黃1品種雞群在免疫新-支-流精制三聯苗后一直持續到129 d才對雞群進行了補免，補免時間推遲了20多天；黃2品種在免疫新-支-流精制三聯苗后一直持續到136 d才需要進行補免，比免疫普通三聯苗推遲補免時間長達30多天之久。這樣免疫新-支-流精制三聯苗可有效的避免了種雞產蛋高峰期前后進行疫苗補免可能對雞群造成的應激大、產蛋量下降、雞蛋品種差等不利影響。

不同廠家生產的疫苗在實際生產中，免疫效果受多種因素的影響，免疫接種時不僅要根據養殖場的實際情況，還要及時對雞群抗體水平進行檢測，適時抽檢，制定合理的免疫方案，減少損失。

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2016-04-28

國家現代農業產業技術體系廣西肉雞產業創新團隊建設項目(nycytxgxcxtd-04-20-2)；廣西重大科研項目(桂科重14121003-4-1)

焦鵬濤(1989-)，男，碩士生，主要從事禽病與病原分子生物學研究，E-mail:pengtaojiao66@126.com

韋平，E-mail:pingwei8@126.com

文獻標志碼：B 文章編號：0529-6005(2017)-04-0044-03