nm23在子宮內膜異位癥中的表達與意義探討

黃 建，郭金強，周偉新，馮春宇，凌學民

（廣東省深圳市龍崗區第二人民醫院婦科，廣東 深圳 518100；2.廣東省深圳市龍崗區第二人民醫院功能科，廣東 深圳 518100；3.廣東省深圳市龍崗區第二人民醫院病理科，廣東 深圳 518100）

子宮內膜異位癥在婦科疾病中屬于較多見的良性病癥，通常主要臨床癥狀為慢性盆腔疼痛或者痛經、不孕，給患者的身心以及生活帶來極大不便。該病雖被歸結為良性病癥，但卻可表現為惡性腫瘤的生物學行為，如新生血管的生成、細胞凋亡、轉移等現象，其中，黏附、侵襲以及新生血管是該病發生發展的三大步驟，當子宮內膜碎片通過逆向流動進入盆腔時粘附在盆腔生長[1-2]。在整個疾病過程中，腫瘤轉移機制基因（non-metastatic23，nm23）在細胞信號傳遞以及增殖分化中起到了主導作用，目前也有文獻報道nm23或許可抑制腫瘤血管生成。本研究使用免疫組織化學法檢測nm23在子宮內膜異位癥中的表達，并探討其在子宮內膜異位癥發生中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院于選取我院于2012年6月～2017年12月收治的子宮內膜異位癥患者38例作為研究組；同時選擇同期因不孕癥（排除器質性疾病及子宮內膜異位癥）行子宮內膜活檢結果為正常子宮內膜患者32例作為對照組。其中研究組年齡24～50歲，平均（33.18±6.61）歲；對照組年齡24～44歲，平均（33.13±5.57）歲。納入標準：患者術前未接受放療與化療，3個月內未使用甾體類激素。排除標準：不愿意參與本次試驗者。所有患者的年齡，差異無統計學意義（P＞0.05）。所有患者均簽署知情同意書，且該方案通過倫理委員會批準。

1.2 方法

組織樣品均在手術時采樣，取樣后經10%甲醛溶液固定12h，脫水包埋，切片厚度5μm，篩選后進行下一步。免疫組化使用SP法，nm23是鼠抗人單克隆抗體，DAB顯色液與SP試劑盒購自福州邁新生物技術開發有限公司。實驗流程參照試劑盒說明書，陰性染色對照使用PBS替代一抗，陽性對照來自試劑盒陽性片。

1.3 結果判定

通過細胞著色強度與染色細胞的面積的總和判定：1）染色強度的評判標準：未染上顏色為0分，染上黃色為1分，染上棕色為2分，染上黃褐色為3分；2）染色細胞的面積評判標準：未見陽性細胞染色的為0分，陽性細胞＜25%的為1分，陽性細胞占25%～50%的為2分，陽性細胞＞50%的為3分；3）兩個評分總和＞2為陽性，≤2為陰性；其中，分數于0～1分之間的為陰性，2分為弱陽性，于3～4分之間為陽性，于5～6分之間為強陽性。

1.4 統計學方法

所有數據均采用SPSS 20.0軟件分析，采用x2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 nm23免疫組織化學法染色結果

nm23免疫組織化學法染色顯示其主要表達在子宮內膜腺上皮細胞漿中，細胞核中僅有少數表達，對照組內膜中nm23的表達率高達90.63%，而研究組內膜中的表達率僅42.11%，顯著低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 nm23在子宮內膜異位及正常子宮內膜組織中的表達

3 討 論

目前子宮內膜異位癥的機制以及機理尚未完全闡明，其有著與惡性腫瘤相同的轉移與入侵能力這一奇特現象被大家所關注，目前多數學者贊成黏附、侵襲以及血管的生成是該病病程中的主要步驟，且在病程中起主導作用，在這些過程中，黏附又是該病發展的第一步[3]。

nm23基因與腫瘤轉移與抑制存在某種關聯，該基因編碼的蛋白產物不僅有著核苷二磷酸激酶 (NDPK)活性，還具有其他多種生物學用途，如：與許多蛋白之間存在交互作用；可結合DNA，參與DNA與蛋白質的合成等多種用途。若該基因發生缺失或突變將導致nm23蛋白直接影響細胞骨架激活細胞運動，使加入至腫瘤中的浸潤轉移這一過程中去，同時參與至腫瘤的發育過程，其次，該蛋白也將引起異常的微管聚合過程，最終導致紡錘體在減數分裂時期出現異常，致使癌細胞的非整倍染色體出現，從而起到促進腫瘤生長的效果。此外，nm23還參與到了抑制血管新生的過程中，已有研究表明[4]，nm23的蛋白產物會與新生血管以及腫瘤的發生產生某種關聯，最終達到負調控乳腺癌的轉移。已有文獻通過RT-PCR等方法檢測了子宮內膜異位癥患者異位內膜的nm23蛋白及mRNA水平顯著低于正常子宮內膜[2,5]，該實驗與本文研究結果相對應。

雖然子宮內膜異位癥屬于良性病癥，卻具有與惡性腫瘤相同的轉移與入侵能力，目前導致這一特殊現象的原因機理還未闡明，因此研究nm23基因在子宮內膜異位癥中的調控機理以及其本身作用對該病本身具有十分重要的研究意義。

[1] Youn B, Kim H D,Kim J.Nm23-H1/nucleoside diphosphate kinase as a key molecule in breast tumor angiogenesis[J].Expert Opinion on Therapeutic Targets, 2008,12(11):1419-30.

[2] 汪根蓮,林愛琴,段仁杰,等.nm23-H1和p53基因在子宮內膜異位癥患者異位組織中的表達及意義[J].皖南醫學院學報,2016,35(01):5-7.

[3] Li Y,Kang S,Qin JJ, et al. nm23 gene polymorphisms are associated with survival of patients with epithelial ovarian cancer but not with susceptibility to disease[J]. Gynecol Oncol, 2012, 126(3):455-459.

[4] Huang X I, Wei Z, Yan L I, et al. Association between nm23 gene polymorphisms and the risk of endometriosis[J]. Biomedical Reports,2015, 3(6): 874-878.

[5] 汪根蓮.子宮內膜異位癥中nm23-H1基因和p53基因的表達及相關性研究[D].皖南醫學院, 2016.