人巨細胞病毒UL135蛋白的原核表達及其多克隆抗體的制備和鑒定

胡盈盈，郭剛強，葉思思，孫祥威，毛晨晨，薛向陽，呂杰強

（1.溫州醫科大學附屬第二醫院 婦產科，浙江 溫州 325027；2.溫州醫科大學 分子病毒與免疫研究所，浙江 溫州 325035；3.溫州醫科大學附屬第一醫院 胃腸外科，浙江 溫州 325015）

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人巨細胞病毒UL135蛋白的原核表達及其多克隆抗體的制備和鑒定

胡盈盈1，郭剛強2，葉思思2，孫祥威3，毛晨晨3，薛向陽2，呂杰強1

（1.溫州醫科大學附屬第二醫院 婦產科，浙江 溫州 325027；2.溫州醫科大學 分子病毒與免疫研究所，浙江 溫州 325035；3.溫州醫科大學附屬第一醫院 胃腸外科，浙江 溫州 325015）

目的：制備人巨細胞病毒（HCMV）UL135原核表達蛋白及其多克隆抗體。方法：生物信息學分析HCMV UL135蛋白的跨膜區結構，經原核密碼子優化后對胞外序列進行全基因合成，將序列克隆至原核表達載體構建pET21a（+）/HCMV UL135重組質粒，IPTG誘導蛋白表達后，Ni-NTA親和層析法純化UL135重組蛋白，免疫新西蘭兔制備多克隆抗體，ELISA、Western blot法檢測抗體靈敏度和特異性。結果：HCMV的UL135基因在原核表達系統中成功表達，經Ni-NTA親和純化后獲得高純度的目的蛋白；免疫新西蘭兔誘導產生特異性的多克隆IgG抗體，且效價為1∶12 800；經ELISA以及Western blot證實制備的兔抗多克隆抗體可特異性識別UL135蛋白。結論：成功實現了HCMV UL135的重組表達并制備了UL135兔多克隆抗體，為進一步研究UL135蛋白的生物學功能奠定基礎。

人巨細胞病毒；UL135蛋白；多克隆抗體

人巨細胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）是一種雙螺旋DNA病毒，屬于皰疹病毒科β亞科，是皰疹病毒家族中的重要成員之一，整個230 kb的基因組能編碼約180種蛋白[1-2]。HCMV存在免疫逃避特性，能逃避自然殺傷細胞的殺傷；……