MAGE-A3多克隆抗體的制備及在胃癌細胞檢測中的應用

蔡一奇，程開，陳旭東，陳孝冬，岑丹維，張嬋瓊，宋易玲，毛姍姍，葉曉鮮，張麗芳，朱冠保

（1.溫州醫科大學附屬第一醫院 胃腸外科，浙江 溫州 325015；2.溫州醫科大學 分子病毒與免疫研究所 微生物學與免疫學教研室，浙江 溫州 325035）

MAGE-A3多克隆抗體的制備及在胃癌細胞檢測中的應用

蔡一奇1，程開1，陳旭東1，陳孝冬1，岑丹維2，張嬋瓊2，宋易玲2，毛姍姍2，葉曉鮮2，張麗芳2，朱冠保1

（1.溫州醫科大學附屬第一醫院 胃腸外科，浙江 溫州 325015；2.溫州醫科大學 分子病毒與免疫研究所 微生物學與免疫學教研室，浙江 溫州 325035）

目的：通過原核表達系統制備人黑色素瘤抗原A3（MAGE-A3）蛋白，制備其多克隆抗體，經鑒定后用于胃癌細胞檢測。方法：將MAGE-A3全長核酸序列經原核密碼子優化后全基因序列合成，克隆至原核表達載體pET21a（+），構建pET21a（+）/MAGE-A3重組質粒，轉化至大腸桿菌BL21（DE3），經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導表達MAGE-A3蛋白，并經SDS-PAGE及Western blot分析鑒定；純化后的MAGE-A3蛋白免疫日本大耳白兔制備多克隆血清抗體，用ELISA、Western blot、免疫熒光技術分析該多克隆抗體的特異性，并用免疫組織化學技術鑒定MAGE-A3兔多克隆抗體在人胃癌細胞免疫檢測應用中的可行性。結果：成功構建重組質粒pET21a（+）/MAGE-A3，并經原核表達系統表達MAGE-A3蛋白。SDS-PAGE顯示目的蛋白分子質量大小約為48 kDa，與預期蛋白大小一致，并以His單抗進行Western blot鑒定，出現了特異性的單一條帶。MAGEA3蛋白免疫日本大耳白兔，可誘導兔產生特異性抗體，免疫后第8周達到高峰，經Western blot檢測顯示多克隆血清可特異性識別靶蛋白，出現陽性單一條帶；經免疫熒光檢測顯示，在MAGE-A3陽性細胞A-375（黑色素瘤細胞株）和SGC-7901細胞（胃癌細胞株）的胞漿內出現熒光團塊。……