VEGF、P53的表達與食管癌臨床特征及預后的關系

李鐵志 石彥濤 高少林 鄭兆偉 張合林

·論著·

VEGF、P53的表達與食管癌臨床特征及預后的關系

李鐵志 石彥濤 高少林 鄭兆偉 張合林

目的 探討食管癌中VEGF和P53的表達與食管癌臨床特征的關系，分析其在食管癌患者淋巴結轉移、預后中的作用。方法 選取胸外科診治的54例食管癌患者以及同期40例健康人群作為研究對象，采用ELISA方法檢測所選者P53蛋白、VEGF的表達情況并進行分析。結果 食管癌患者VEGF、P53的濃度明顯高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；以年齡、性別及TNM分期等指標差異進行比較，VEGF、P53 蛋白在食管癌患者中的表達水平均無顯著差異(P<0.05)；而患者有無淋巴結轉移、5年生存率指標差異進行比較，VEGF、P53 蛋白表達水平差異有統計學意義(P<0.05)；通過隨訪后發現VEGF、P53表達陽性的食管癌患者其復發率明顯高于陰性患者，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 VEGF、P53在食管癌患者中高表達，且與食管癌是否發生淋巴結轉移有關，影響著患者的5年生存率，可作為食管癌的重要生物學指標為臨床診治食管癌提供參考。

食管癌；P53蛋白；血管內皮生長因子

食管癌是發生在食管黏膜上皮或者腺體的一種惡性腫瘤，其在國內外均有較高的發病率，在我國尤為高發，其病死率亦較高[1]。至今食管癌的發病原因、發病機制仍未明確，多數研究認為是多因素協同作用所致。隨著分子生物學技術的不斷發展，諸多細胞因子被發現在腫瘤的發生發展中發揮著重要的作用，人們在分子水平或是基因的水平對腫瘤的發生機制獲得深層次的認識。這些腫瘤標志物對腫瘤的診斷、治療以及評估預后等均具有重要指導意義[2]。血管內皮生長因子(VEGF)是血管內皮細胞特異性的生長因子，具有促進血管內皮細胞增殖，促進血管生成等功能，與腫瘤的生長、浸潤以及轉移密切相關。P53是一種抑癌基因，大量研究證實P53在腫瘤的發生發展中起著重要作用，并直接影響其生物學行為[3]。我們采用酶聯免疫吸附法方法(ELISA)檢測食管癌組織中 VEGF 和 P53的表達,探討VEGF和P53蛋白表達與食管癌臨床各參數之間的關系，探討VEGF和P53在食管癌患者轉移、預后中的作用，為食管癌的診治提供參考，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2015年1月我院胸外科診治的食管癌患者54例作為研究對象，所選患者均經病理檢查明確診斷，初治患者，Karnofsky功能狀態評分(KPS)[4]≥70,可行手術或根治性放療,行PET/CT檢查，臨床及隨訪資料完整，排除患者曾進行過新輔助治療，局部復發患者或初次確診時即有轉移的患者，其中男34例，女20例；年齡42～78歲，平均(58.8±10.5)歲；體重(62.3±8.9)kg；身高(169.3±8.1)cm；TNM分期[5]：Ⅰ～Ⅱ期36例，Ⅱ～Ⅳ期18例；根據有無遠處轉移分為有淋巴結轉移28例,無淋巴結轉移26例。選取同期體檢中心的健康人群40例作為健康對照組，男26例，女14例；年齡43～74歲，平均(58.3±10.2)歲；體重(62.1±8.3)kg；身高(168.9±7.8)cm。2組年齡、性別比等一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 實驗試劑及設備:P53、VEGF ELISA檢測試劑盒，購自美國USCNLIFE公司。96孔細胞培養板和 ELISA 板，Costar 公司；酶標儀，UV-250 型分光光度計，日本島津公司；TG16W 高速離心機，長沙平凡儀器廠。

1.2.2 檢測方法:收集所選對象空腹靜脈血，于3 000 r/min離心10 min,分離出血清后，在-20℃冰箱保存備用。采用ELISA方法檢測血清中的VEGF、P53濃度，具體操作步驟依據說明書。

2 結果

2.1 VEGF、P53在食管癌中的表達與臨床特征之間的相關性 所選食管癌患者手術順利出院，隨訪5年，記錄5年生存率情況。食管癌患者VEGF的濃度明顯高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；食管癌患者P53的濃度明顯高于健康對照組，差異顯著(P<0.05)。與臨床特征之間的關系結果提示，以年齡、性別及TNM分期等指標差異進行比較，VEGF、P53 蛋白在食管癌患者中的表達水平均無顯著差異(P>0.05)；而患者有無淋巴結轉移、5年生存率指標進行比較，VEGF、P53 蛋白表達水平均有顯著差異(P<0.05)。見表1、2。

組別VEGF(ng/L)P53(ρ·Pg-1·ml-1)食管癌組(n=54) 101.3±54.5190.15±44.56健康對照組(n=40)55.3±54.5*105.57±12.26*

注：與食管癌組比較，*P<0.05

表2 VEGF、P53在食管癌中的表達與臨床特征的關系 ±s

2.2 P53蛋白與VEGF表達的相關性 VEGF表達與P53蛋白表達有較好的相關性。見表3。

表3 P53蛋白與 VEGF 表達的相關性 例

2.3 P53、VEGF表達與食管癌預后關系的隨訪結果 隨訪所選54例患者，記錄患者復發例數，P53、VEGF陽性患者其復發率明顯高于陰性患者，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 P53、VEGF對食管癌復發率的影響

3 討論

腫瘤細胞的無限生長，主要是新生血管的不斷形成，輸送細胞生長所需的營養，輸出細胞代謝廢物。人體正常組織中，新生血管形成有著嚴格的生理調控機制，但在腫瘤細胞中，患者的內環境發生變化，血管形成調控機制發生障礙，新生血管不斷形成，無限增多。

3.1 VEGF與食管癌的相關性 VEGF是目前發現最強的促進血管生長的細胞因子。腫瘤的進展即腫瘤的生長，要有充足的營養供給，新生血管形成能為腫瘤細胞生長提供必需的氧氣以及營養物質。當腫瘤逐漸生長，病灶逐漸變大，呈浸潤性生長或者發生轉移，經由微循環滲透所帶來的營養不足以提供其生長所需養分，新生的血管即逐步形成。腫瘤新生血管形成主要依靠各種促血管形成因子的作用。VEGF促血管生成的機制可能為：VEGF能特異性地激活、誘導血管內皮細胞發生分裂，促進血管生成；VEGF增強血管通透性，使得血漿纖維蛋白滲出，形成纖維網絡為血管內皮細胞的增殖、血管形成提供支架，利于毛細血管網以及腫瘤間質的形成[6]。

關于VEGF與食管癌的相關研究表明，VEGF在食管癌的發生、發展及轉移的過程中，均起著重要的作用，作為最強的有道腫瘤血管生成的細胞因子，已經被作為判定食管癌預后的相關指標，并開展了諸多關于其靶向治療的研究。諸多研究表明，VEGF在食管癌中的陽性率為23.9%～93.3%，大量文獻均提示VEGF的表達與食管癌的侵襲性密切相關[7,8]。VEGF與食管癌的浸潤深度、淋巴管侵犯、淋巴結轉移呈明顯相關性，能作為預測食管癌發生轉移并評估預后的一個強有力的生物學指標[9]。

本文研究中食管癌患者中的VEGF表達量明顯高于健康對照組，且在食管癌患者中，VEGF的表達與癌癥是否發生轉移密切相關，并影響著患者的5年生存情況。進一步證實了VEGF與食管癌的相關性，參與了食管癌的發生、發展過程，影響患者的生存質量。本研究結果支持上述觀點，VEGF陽性患者其復發率顯著高于陰性患者，VEGF加快了食管癌的進展。VEGF陽性患者術后是VEGF陰性患者腫瘤復發風險高3.316 倍，說明VEGF確實使促進血管生成的蛋白表達增多，促進腫瘤組織形成大量結構和功能異常的血管,促進了食管癌的發展。

3.2 P53與食管癌的相關性 P53基因是一種腫瘤抑制基因，具有特異性的轉錄激活作用，控制細胞周期的啟動[10]。在人體內存在著野生型P53和突變型P53兩種形式，野生型通過刺激抑制血管生成基因 Smad4 等的表達，抑制腫瘤生長，抑制細胞分裂和增殖。突變型則通過刺激VEGF等血管生長因子分泌增加，參與細胞生長，促進細胞發生惡化[11]。

關于P53基因的研究，既往多以惡性腫瘤細胞為研究對象，近年來逐漸關注于臨床研究。在食管癌中P53被認為是分子水平的改變，提高了腫瘤的轉移率，影響患者術后的生存期，一般突變型P53被看作是判定患者預后的獨立危險因素。P53在健康人群中未有表達，而在食管癌患者中高表達，提示其可以鑒別食管癌的良惡性病變。有文獻報道，P53的陽性率隨著食管癌分化程度的增高而升高，且與是否發生淋巴結轉移呈正相關性，高P53表達預示著淋巴結轉移的潛在可能性[12]。由此可以為手術提供一個參考依據，當術中未見食管癌發生淋巴結轉移，亦應擴大手術范圍并行淋巴結清掃術。

本文研究中P53在食管癌患者中高表達，且與食管癌患者否發生轉移及5年生存情況密切相關。對食管癌患者進行隨訪，發現P53陽性患者的復發率明顯高于P53陰性患者。有研究P53對膀胱癌復發率的影響結果提示，P53陽性患者術后與P53陰性患者相比，腫瘤復發風險為2.913倍[13]。說明P53蛋白陽性者預后較差，P53蛋白表達可作為判斷食管鱗癌患者預后的指標之一。

3.3 P53、VEGF在食管癌中的相關性 通過以上描述，可知VEGF、P53與食管癌均存在著相關性。VEGF與P53基因之間亦存在一定的相關性。本文研究結果提示VEGF 表達與 P53 蛋白表達有較好的相關性(r=0.42)，進一步證實二者之間的關系。考慮機制可能為P53基因可以刺激VEGF的過度分泌，VEGF的過度表達與抑癌基因失活、原癌基因激活有關[14]。野生型P53基因抑制VEGF表達，從而抑制腫瘤血管生成，突變型P53基因則促進VEGF表達，促進腫瘤血管生成。大量研究表明，P53對血管生長的作用主要包括：(1)下調栓橋蛋白的表達(TSP)，從而降低血管生長抑制；(2)增強蛋白激酶C(PKC)活性，促進VEGF的表達；(3)野生型P53基因可以通過調節VEGF啟動子的四個SPI結合位點反向調節VEGF啟動子，抑制VEGF的轉錄合成，突變型P53基因基因突變后失去調節VEGF啟動子的作用，進而失去抑制VEGF轉錄的作用，失去了抑制腫瘤血管的形成作用[15]。

綜上，P53、VEGF在食管癌中的陽性表達可能存在相關性，與食管癌血管生成密切相關。食管癌中較高的 VEGF、P53 蛋白表達是否發生淋巴結轉移相關，將兩者有機結合，可望提高對淋巴結轉移診斷的準確率。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.12.021

項目來源：河北省醫學科學研究重點課題(編號：20150229)

050000 石家莊市，河北醫科大學第二醫院

張合林，050000 石家莊市，河北醫科大學第二醫院；

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2016-12-12)