山茱萸商品規格與其色素、多糖、總有機酸含量的相關性研究*

段亮亮,崔永霞,王利麗,陳隨清

(河南中醫藥大學藥學院，河南 鄭州 450046)

·藥學研究·

山茱萸商品規格與其色素、多糖、總有機酸含量的相關性研究*

段亮亮,崔永霞,王利麗,陳隨清

(河南中醫藥大學藥學院，河南 鄭州 450046)

目的：探討山茱萸商品規格與其色素、多糖、總有機酸含量的相關性，為制定其商品規格行業新標準提供實驗依據。方法：收集山茱萸樣品65份并結合外觀性狀進行等級劃分，采用紫外-可見分光光度法測定多糖的含量及色素的吸光度，采用電位法測定總有機酸含量；并采用SPSS軟件進行相關性分析。結果：山茱萸商品規格與色素、總有機酸含量具有顯著的相關性，而與多糖含量相關性不顯著。結論：以外觀性狀、色澤為主要依據的山茱萸等級的劃分科學合理，有利于山茱萸資源的合理利用。

山茱萸；商品規格；色素；多糖；總有機酸；紫外-可見分光光度法；電位法

山茱萸為山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb.et Zucc.的干燥成熟果肉，具有補益肝腎、收澀固脫的功效。隨著山茱萸被臨床廣泛使用，種植面積不斷擴大，主要產地有河南省的欒川、嵩縣、西峽，陜西省的佛坪、周至，浙江省的臨安、淳安，以及山西的沁縣等地。種植地地域不同、氣候條件不同，所產山茱萸藥材品質有很大差異；加之許多栽培品種[1]的出現，造成了市場上山茱萸藥材品質不一，經濟價值和藥材質量有著明顯的不同，既不利于臨床合理、規范用藥，也不利于山茱萸藥材資源的合理利用。目前國內外學者對山茱萸的研究只涉及化學成分[2，3]和藥理活性研究[4]，缺少對其商品規格等級劃分的研究。如何建立既有外觀性狀又能體現藥材內在質量的藥材商品規格等級研究模式是中藥材標準化研究的重點研究任務之一。另外，隨著山茱萸存放時間延長，其顏色由鮮紅色變為黑褐色，口嘗其酸度也發生改變，因此，本研究對山茱萸進行了規格等級的劃分，并對不同商品規格進行了色素、多糖、總有機酸含量的相關性研究，旨在辨狀論質的基礎上，運用性狀特征與化學成分的相關分析來驗證規格等級劃分的科學合理性，以更好地規范市場、指導臨床用藥。

1 藥品、試劑與儀器

1.1 藥材與等級劃分

從河南、浙江、山西、陜西等主產地，以及藥材市場共收集65份山茱萸樣品，經河南中醫藥大學陳隨清教授鑒定，均為《中國藥典》收載品種山茱萸CornusofficinalisSieb.et Zucc.的干燥成熟果肉。對65份樣品進行等級劃分，分類結果如下。一等：果肉呈不規則片狀或囊狀；表面鮮紅色，暗紅色不超過10%，皺縮、有光澤；味酸澀；果核不超過1%，無雜質、蟲蛀、霉變；編號為101-107。二等：果肉呈不規則片狀或囊狀；表面暗紅色，紅褐色不超過15%,皺縮、有光澤；味酸澀；果核不超過3%；無雜質、蟲蛀、霉變；編號為201-236。三等：果肉呈不規則片狀或囊狀；表面紅褐色，黑色不超過15%，皺縮有光澤；味酸澀；果核不超過3%；無雜質蟲蛀、霉變；編號為301-308。四等：果肉呈不規則的片狀或囊狀；表面黑色，皺縮；味酸澀；果核不超過3%；無雜質蟲蛀、霉變；編號為401-414。分別取不同等級及編號的山茱萸藥材100 g，干燥、粉碎，過40目篩，備用。

1.2 試劑與儀器

水為超純水；葡萄糖，天津市致遠化學試劑有限公司產品，批號20160301；苯酚，天津市致遠化學試劑有限公司產品，批號20150416；甲醇，天津市武清區大良鎮工業園產品，批號20151205；酒石酸，天津市科密歐化學試劑有限公司產品，批號20130313；乙酸乙酯，天津市北方天一化學試劑廠產品，批號20130516，所用試劑均為分析純。 UV-2600紫外可見分光光度計，日本島津公司產品；FA2004B電子天平，上海精科天美科學儀器有限公司產品；PH-3C Precision pH/mV meter，杭州奧利龍儀器有限公司產品；Molecular型超純水器，重慶摩爾水處理設備有限公司產品。

2 方法與結果

2.1 山茱萸色素吸收度的測定

參照參考文獻[5]。由于等級劃分與山茱萸色澤直接相關，故對色素進行提取，以期提取得到的溶液能真正反應藥材本身的顏色。受儀器所限，僅采用紫外-可見分光光度計測定溶液的吸收度作為色素的衡量指標。對于色素的提取方法，本實驗對提取溶劑的種類、溶劑的質量分數、提取方法、提取溫度和時間進行了單因素考察；考慮到溶液pH 值對色素的穩定性及吸光度有所影響，同時也考察了pH值對測定的干擾，最終確立了如下方法：精密稱取山茱萸樣品粉末1.0 g于具塞錐形瓶中，分別加入500 mL/L乙醇溶液10 mL，稱量，在40 ℃的水浴中浸提4 h，取出，放冷，再次稱量，補足失重，搖勻，過濾，濾液作為供試品溶液。在510 nm波長處測定各樣品溶液的吸光度(空白對照用其各自的溶劑)，作為色素的考察指標。色素吸收度測定結果見表1。

表1 色素吸收度A測定結果 ±s

2.2 山茱萸多糖的含量測定

參照參考文獻[6]。

2.2.1 葡萄糖對照品溶液的制備

取干燥至恒重的葡萄糖對照品0.01 g，精密稱定，置于100 mL容量瓶中, 以蒸餾水溶解，定容至刻度，搖勻備用。

2.2.2 山茱萸多糖供試品溶液的制備

分別取不同編號山茱萸粉末0.1 g，精密稱定，用800 mL/L 的乙醇溶液50 mL回流1 h；趁熱過濾；濾渣用800 mL /L 的乙醇溶液洗滌4次，每次10 mL；合并洗滌液，濾過，濾渣干燥后，加水40 mL，沸水浴溫浸1 h；趁熱過濾，濾渣用熱蒸餾水洗滌4次，每次10 mL；合并濾液及洗滌液；以氯仿-正丁醇(3∶2)進行萃取；棄去有機層；將水層移至100 mL容量瓶中；用蒸餾水定容到刻度，搖勻，即得山茱萸多糖供試品溶液，備用。

2.2.3 山茱萸多糖的測定方法

標準曲線的繪制：精密吸取標準溶液0.1，0.3，0.4，0.6，0.7，1.0，1.2，1.6 mL，分別置于10 mL具塞刻度試管中；加蒸餾水稀釋到2 mL。另外吸取2 mL蒸餾水置于具塞刻度試管中作空白對照。分別加入1.0 mL 60 g/L苯酚溶液，搖勻，再加入5.0 mL濃硫酸，搖勻，放置5 min，置沸水浴中15 min，取出，冷水浴中冷卻，用紫外-可見分光光度法在492 nm處測定吸光度(A)。以所含葡萄糖的量為橫坐標(x)，吸光度為縱坐標(y)，其回歸方程是y=7.989 4x-0.291 34，r=0.999 05，葡萄糖在0.01～1.60 mg范圍內線性良好。樣品的測定：分別精密吸取2.2.2項下各供試品溶液1.0 mL，置10 mL具塞刻度試管中，按照標準曲線的制備方法制備各供試品溶液，在最大吸收波長處分別測定吸光度，根據工作曲線計算多糖的含量。結果見表2。

表2 山茱萸多糖的含量測定結果 ±s

2.3 山茱萸總有機酸的含量測定

參照參考文獻[7]。

2.3.1 酒石酸對照品溶液的配制

精密稱取在105 ℃下干燥至恒重的酒石酸對照品1.5 g，放于100 mL容量瓶中，用800 mL /L 乙醇溶液溶解并稀釋至刻度，即得含酒石酸15.005 g/L的對照品溶液。

2.3.2 工作曲線的繪制

吸取酒石酸對照品溶液5，8,15,25,30 mL，分別用800 mL/L 乙醇溶液定容到50 mL。準確吸取上述酒石酸對照品溶液20 mL于50 mL燒杯中，加入2～3滴酚酞，放入攪拌子，參照2015版《中國藥典》第四部通則0701電位滴定法與永停滴定法測定，建立標準曲線。

2.3.3 總有機酸的提取

精密稱取山茱萸粉末5.0 g于具塞錐形瓶中，加入800 mL/L乙醇溶液50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾渣加入800 mL/L乙醇溶液50 mL再次超聲，濾過，合并濾液，置于100 mL容量瓶中，用800 mL/L 的乙醇溶液定容至刻度，備用。

2.3.4 總有機酸的測定方法

樣品的滴定：準確吸取所測樣品溶液20 mL于燒杯中，加入2～3滴酚酞，放入磁子，將燒杯置于磁力攪拌器上，將調節好的pH計插入液面以下，待其穩定讀出pH值，按照滴定酒石酸對照品的方法進行滴定，并記錄數據，利用二階導數法計算總有機酸的含量。結果見表3。

表3 總有機酸的含量測定結果 ±s

2.4 統計學方法

以SPSS 18.0軟件，進行相關性分析(雙變量的Kendall的tau-b.檢驗)，考察各成分含量與山茱萸商品規格的相關性，結果見表4。

表4 山茱萸商品規格與各成分相關性研究結果

注：**在置信度(雙側)為0.01時，相關性是極顯著的；*在置信度(雙側)為0.05時，相關性是顯著的。

3 討 論

從表4中可以看出，多糖含量與山茱萸商品規格的相關系數是-0.059，表明了多糖與山茱萸規格等級間沒有明顯的相關性；色素、總有機酸與山茱萸商品規格的相關系數分別是-0.581、-0.225，相關性極其顯著；另外，色素與有機酸含量的相關系數為0.218，也呈現了顯著相關性。 目前，市場銷售的山茱萸全是以統貨流通，未分規格等級，因此亟需制定規范的山茱萸藥材商品規格和等級劃分標準以約束及規范市場流通，確保山茱萸藥材質量。本文主要是依據外觀顏色及性狀對65份山茱萸藥材進行的規格等級劃分，故色素與規格等級間呈極顯著相關。有機酸是山茱萸藥材中的有效成分之一，與商品等級間呈現顯著相關性，且有機酸與色素之間也有顯著相關性，正是性狀特征與化學成分的相關分析來驗證規格等級劃分的合理性，該結果為從山茱萸藥材內在化學成分角度制定山茱萸藥材的商規格標準提供了參考。

本實驗所收集的65份藥材來自各個主產地，還有同一產地不同貯存年限的樣品。本課題將全面考慮各產地及不同貯藏年限對化學成分的影響，繼續考察山茱萸藥材中的其他有效成分及有效成分群與等級間的相關性，為合理制定山茱萸藥材的商品規格、等級和山茱萸的貯存提供較為全面的實驗依據。

[1]陳延惠，馮建燦，鄭先波，等.山茱萸研究現狀與展望[J].經濟林研究，2012,30(1):143-150.

[2]劉劍芳，路福平，黃明勇，等.山茱萸的化學、藥理及開發應用研究進展[J].現代生物醫學進展，2006，6(12):127-130.

[3]于淼，王曉先，賈琳.山茱萸的藥理作用研究進展[J].東南國防醫院，2010，5(12)：240-243.

[4]王浴銘，楊云，劉翠萍.山茱萸臨床作用與藥理作用[J].河南中醫學藥刊，1999，14(1)：61-62.

[5]梁冬梅，李記明，林玉華.分光光度法測葡萄酒的色度[J].中外葡萄與葡萄酒，2002,27(3):9-11.

[6]陳隨清，李君，李雪菊.山茱萸不同生長期多糖含量的動態累積研究[J].中國實驗方劑學，2009，15(1):1-2.

[7]陳磊磊，陳隨清，王靜.不同采收期山茱萸總有機酸的含量變化規律研究[J].世界中醫藥，2011,6(3)：268-269.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2017)04-0076-03

R284

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2017.04.32

陳隨清，博士，教授， suiqingchen@sohu.com

中央本級重大增減支項目子課題(2060302)

2017-02-22；

2017-03-29