49例同型地中海貧血攜帶者產前基因診斷分析

姜柯安，劉東云，陳 霞，李雪齊，賈朝莉，黃國寧

(重慶市婦幼保健院遺傳與生殖研究所 400013)

論著·臨床研究

49例同型地中海貧血攜帶者產前基因診斷分析

姜柯安，劉東云，陳 霞，李雪齊，賈朝莉，黃國寧△

(重慶市婦幼保健院遺傳與生殖研究所 400013)

目的 探討防止嚴重類型地中海貧血(簡稱地貧)患兒出生的有效手段和重要意義。方法 2013年1月至2015年12月于該院產前檢查的孕婦及配偶通過地貧篩查和基因診斷，對確診的49例同型地貧攜帶者夫婦進行羊水地貧產前基因診斷，并在產前診斷后進行隨訪。結果 在49例同型地貧攜帶者夫婦中，基因診斷檢測出α-地貧主要突變類型為--SEA/αα(50.0%)、-α3.7/αα (36.5%)、 -α4.2/αα(11.5%)，β-地貧主要突變類型為CD17/N(42.0%)、CD41-42/N (26.0%)、IVS-Ⅱ-654/N(22.0%)。產前診斷檢測出HbH病4例，Bart′s水腫胎兒2例，重型β-地貧10例，α-地貧攜帶者19例，β-地貧攜帶者10例，α-地貧合并β-地貧1例，健康胎兒3例。隨訪結果與產前診斷結果相符。結論 通過開展地貧產前篩查和產前診斷能有效地防止重癥地貧患兒出生。

地中海貧血；基因診斷；產前診斷

地中海貧血(簡稱地貧)是一類由于珠蛋白合成障礙而引起的慢性溶血性疾病，是世界上最常見的單基因遺傳病之一，世界上約有4.8%的人攜帶變異的珠蛋白基因[1]。根據珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型，主要分為α-地貧和β-地貧。重型α-地貧是一種致死性疾病，該類患兒稱為血紅蛋白Bart′s水腫胎，多造成流產、死胎或出生后不久死亡[2];重型β-地貧患兒通常在出生后6～9個月出現溶血性貧血，多數在5歲以前死亡，即使存活也需要終身輸血維持生命[3-4]。地貧患者主要分布在我國南方地區，貴州、四川及重慶等西南地區也是地貧高發區；相關流行病學研究顯示重慶地區兒童α-地貧攜帶率為5.20%[5]，β-地貧攜帶率為1.51%[6]。因此在重慶地區進行地貧產前診斷對優生優育具有重要意義，現將本院近年來開展地貧產前基因診斷的結果回顧性分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年1月至2015年12月在本院進行孕期檢查或優生遺傳咨詢的孕婦及配偶，通過血常規結合血紅蛋白電泳進行篩查，對篩查為陽性的疑似地貧攜帶者夫婦進行基因診斷。經地貧基因診斷結果顯示夫妻雙方為同型地貧攜帶者共49例，均進行產前診斷；孕婦年齡22～41歲,平均(28.2±4.5)，孕16～25周，平均(19.9±2.5)周；夫婦雙方均為重慶市戶籍人口。本研究符合本院醫學倫理委員會相關標準，并獲得該倫理委員會批準，所有夫婦均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 采集夫婦雙方外周血各2 mL，用乙二胺四乙酸(EDTA) 抗凝；胎兒標本為每例抽取羊水20 mL，對有母體血污染的羊水標本經細胞培養后再用于基因分析[7]。

1.2.2 基因分析 將外周血和羊水進行基因組DNA提取后，按照試劑盒操作說明書進行基因分析。α-地貧缺失型基因檢測試劑盒購自中山大學達安基因股份有限公司，α-地貧突變型和β-地貧基因檢測試劑盒購自深圳亞能生物技術有限公司。(1) α-地貧基因診斷：應用單管多重Gap-PCR技術檢測-α3.7、-α4.2和--SEA這3種常見的α-珠蛋白基因缺失突變。應用單管多重PCR體系結合反向點雜交(reverse dot blot,RDB)技術檢測αQSα、αCSα和αWSα這3種常見的α-珠蛋白基因點突變。(2)β-地貧基因診斷：應用單管多重PCR體系結合RDB技術檢測中國人常見的17種β-珠蛋白基因點突變，依次為CD41-42(-TCTT)、CDl7(A→T)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、CD71-72(+A)、βE(G→A)、-29(A→G)、CD43(G→T)、CD31(-C)、CDl4-15(+C)、Int(T→G)、CD27-28(+C)、IVS-Ⅰ-5(G→C)、IVS-Ⅰ-1(G→T)、-30(T→C)、-32(C→A)、CAP+40-+43(-AAAC)。

1.2.3 隨訪 根據地貧產前診斷結果對所有受檢者進行優生遺傳咨詢和指導，基于知情和自愿原則下，孕婦自愿選擇是否對重型地貧和中間型地貧胎兒采取干預措施，并對妊娠結局進行隨訪。同時在嬰兒出生半年后對其是否貧血及生長發育情況進行隨訪，以驗證產前診斷結果的準確性。

2 結 果

2.1 基因分析 共24對夫婦雙方均為α-地貧攜帶者，從基因型構成比來看，其攜帶靜止型-α3.7/αα占36.5%(19/52)，-α4.2/αα占11.5%(6/52)，αCSα/αα占1.9%(1/52)；攜帶東南亞型--SEA/αα占50.0%(26/52)。共25對夫婦雙方均為β-地貧攜帶者，從基因型構成比來看，其攜帶CD41-42/N突變基因型占26.0%(13/50)，IVS-Ⅱ-654/N占22.0%(11/50)，CD17/N占42.0%(21/50)，其余4種突變占10.0%(5/50)，CD27-28/N、-28/N、-29/N、CD43/N分別占2.0%、2.0%、2.0%、4.0%。其中有4例是α-地貧缺失型合并β-地貧突變型。

表1 α-地中海貧血產前基因診斷胎兒情況

表2 β-地中海貧血產前基因診斷胎兒情況

2.2 產前診斷 通過對49例孕婦進行孕中期羊水地貧產前診斷，結果檢測到正常胎兒3例，靜止型α-地貧11例，輕型α-地貧8例，中間型α-地貧(HbH病)4例，重型α-地貧(Bart′s水腫胎)2例；輕型β-地貧10例，重型β-地貧10例；檢測到輕型α-地貧合并輕型β-地貧1例。見表1、2。

2.3 隨訪 所有懷嚴重類型(重型和中間型)地貧胎兒的孕婦，均在遺傳咨詢和知情自愿原則下選擇終止妊娠；所有非嚴重類型胎兒在出生半年后對其貧血和生長發育情況進行隨訪，隨訪結果與產前診斷結果相符。

3 討 論

人類珠蛋白基因簇分為α珠蛋白基因簇和β珠蛋白基因簇。α珠蛋白基因簇位于16號染色體短臂，每條染色體上均有兩個α珠蛋白基因；β珠蛋白基因簇位于11號染色體短臂，每條染色體上只有一個β珠蛋白基因；若兩類基因發生突變則會引起相應的貧血疾病[8]。目前發現的α-地貧基因突變類型至少有81種，其中點突變46種，缺失突變35種[9]；β-地貧突變類型至少有200種，主要為點突變[10]。在本研究中通過對49對同型地貧攜帶者夫婦進行基因檢測，結果顯示α-地貧基因突變類型主要為--SEA缺失型(50.0%)和-α3.7缺失型(36.5%)；而β-地貧基因突變類型主要為CD17(42.0%)、CD41-42(26.0%)和IVS-Ⅱ-654(22.0%)，與重慶和國內其他地區文獻報道的主要突變類型相似[11-13]。

地中海貧血是常染色體隱性遺傳病，在家系中的遺傳規律符合孟德爾遺傳，若父母一方為α-地貧靜止型，另一方為α-地貧東南亞缺失型，則有1/4的概率生育中間型地貧患兒(HbH病)，雙方都為東南亞缺失型，則有1/4的概率生育重型α-地貧患兒 (Bart′s水腫胎)；若父母雙方都為β-地貧突變攜帶者，則有1/4的概率生育中間型或重型β-地貧患兒[14]。本研究在49例孕婦產前診斷中共檢測到4例α-地貧中間型患兒，兩例Bart′s水腫胎患兒和10例重型β-地貧患兒。部分中間型地貧患兒在出生后貧血程度呈進行性加重，嚴重者需要以輸血維持生命[15]；在本研究中檢測到的4例懷中間型地貧患兒孕婦均知情選擇終止妊娠。已在中國人群中發現的20多種β-地貧突變類型中，除了-28(A→G)和-29(A→G)為β+突變外，其余均為β0突變，β0突變純合子或雙重雜合子無β鏈生成，引起重型β-地貧[16]；本研究中檢測到的4例純合子和6例雙重雜合子β-突變患兒全部為重型地貧患兒。

嚴重類型地中海貧血尚無有效的治療方法，產前診斷和選擇性終止妊娠減少重癥患兒出生，是最為有效的預防措施。通過血常規結合血紅蛋白電泳對孕前檢查和產前檢查的人群進行地貧篩查，篩查陽性則進一步做基因診斷，診斷為同型地貧攜帶者的夫婦需在臨床醫生指導下做產前診斷及遺傳咨詢；該模式應用于臨床能有效避免重癥地貧兒出生。在本研究中的49例孕婦，14例曾有重癥地貧胎兒孕產史，其中包括引產Bart′s水腫胎1例，產Bart′s水腫胎2例，引產重癥β-地貧患兒3例，產重癥β-地貧患兒8例(其中5例已經夭折)；可見在本地區開展地貧產前篩查和診斷對提高人口素質、減少家庭和社會負擔具有重要意義，特別是對β-重癥地貧的產前診斷顯得尤為突出。另外，各基層醫院在發現重癥地貧患兒時，應對該患兒家庭進行相關遺傳指導，以幫助其在以后孕育過程中做好產前診斷和遺傳咨詢，防止再次生育重癥地貧患兒。目前，重慶已作為地貧高發地區納入國家地貧防控項目；本文的回顧性研究分析，為下一步對本地區國家地貧防控項目的開展和實施具有重要臨床意義。

[1]Shen XT,Xu YW,Zhong YP,et al.Preimplantation genetic diagnosis for α-and β-double thalassemia[J].J Assist Reprod Genet,2011,28(10):957-964.

[2]Yuan Y,Yuan X,Zhou CQ.Does thalassemia influence ovarian response?An analysis of 127 cycles involving pre-implantation genetic diagnosis of thalassemia in southern China[J].J Obstet Gynecol,2016,36(6):1-5.

[3]中華醫學會兒科學分會血液學組,《中華兒科雜志》編輯委員會.重型β地貧的診斷和治療指南[J].中華兒科雜志,2010,48(3):186-189.

[4]Li DZ,Pan M,Han J,et al.Prenatal diagnosis of thalassemia in twin pregnancies in mainland China[J].J Obstet Gynecol,2016,36(3):1-4.

[5]于潔,憲瑩,姚秀云,等.重慶市學齡前兒童α地中海貧血的分子流行病學研究[J].中華血液學雜志,2014,35(5):419-423.

[6]姚秀云,張渝美,秦蓁子,等.重慶市漢族兒童β-地中海貧血的分子流行病學研究[J].中華兒科雜志,2013,51(7):518-522.

[7]李東明,杜娟,張海燕,等.細胞培養在地中海貧血產前診斷中的應用[J].中國誤診學雜志,2008,8(28):6834-6835.

[8]李軍,殷和.地中海貧血的診斷技術及進展[J].重慶醫學,2009,38(7):864-865.

[9]莫宗平,喻長順,胡朝暉,等.α地中海貧血的基因診斷方法[J].中華臨床醫師雜志,2012,6(3):682-684.

[10]Durmaz B,Ozkinay F,Onay H,et al.Genotyping of β-globin gene mutations in single lymphocytes:a preliminary study for preimplantation genetic diagnosis of monogenic disorders[J].Hemoglobin,2012,36(3):230-243.

[11]何建維,黃恒柳,張燕,等.重慶地區地中海貧血基因突變類型分析[J].國際檢驗醫學雜志,2014,35(18):2488-2489.

[12]Li J,Xie XM,Liao C,et al.Co-inheritance of α-thalassaemia and β-thalassaemia in a prenatal screening population in mainland China[J].J Med Screen,2014,21(4):167-171.

[13]Zhang J,Zhu BS,He J,et al.The spectrum of alpha-and beta-thalassemia mutations in yunnan province of south-western China[J].Hemoglobin,2012,36(5)：464-473.

[14]Najmabadi H,Ghamari A,Sahebjam F,et al.Fourteen-year experience of prenatal diagnosis of thalassemia in Iran[J].Community Genet,2006,9(2):93-97.

[15]趙馨,王逾男,何天文,等.廣東省地貧基線調查中影響地貧高風險夫婦進一步干預的因素分析[J].中國婦幼衛生雜志,2015,6(2):20-22.

[16]周永娥,朱衛健.地中海貧血的產前診斷及治療進展[J].醫學綜述,2011,17(21):3306-3308.

Analysis on prenatal gene diagnosis in 49 cases carrying same type thalassemia

JiangKean,LiuDongyun,ChenXia,LiXueqi,JiaChaoli,HuangGuoning△

(GeneticandReproductiveInstitute,ChongqingMunicipalHealthCenterforWomenandChildren,Chongqing400013,China)

Objective To explore the effective means and important significance for preventing the born of neonatal patients with severe thalassemia.Methods Among the pregnant women and spouses receiving prenatal examination in our hospital from January 2013 to December 2015 were performed the thalassemia screening and gene diagnosis,49 couples carrying the same type thalassemia were conducted the prenatal amniotic fluid thalassemia gene diagnosis and follow up after prenatal diagnosis.Results In 49 couples carrying the same type thalassemia,the main gene mutation types of α-thalassemia detected by the gene diagnosis were --SEA/αα(50.0%),-α3.7/αα (36.5%) and -α4.2/αα (11.5%),which of β-thalassemia were CD17/N(42.0%),CD41-42/N (26.0%) and IVS-Ⅱ-654/N(22.0%).The results of prenatal diagnosis showed that there were 4 cases of HbH disease,2 cases of Bart′s hydrops fetus,10 cases of severe β-thalassemia,19 α-thalassemia carriers,10 β-thalassemia carriers,1 case of co-inheritance of α-and β-thalassemia,and 3 health fetuses.The follow up results were consistent with those of prenatal diagnosis.Conclusion Conducting prenatal screening and diagnosis of thalassemia in pregnant women can effectively prevent the birth of neonatal patients with severe thalassemia．

thalassemia;genetic diagnosis;prenatal diagnosis

姜柯安(1986-)，檢驗師，碩士，主要從事臨床分子診斷研究?！?/p>

，E-mail:gnhuang217@sina.com。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.10.020

R174.6

A

1671-8348(2017)10-1360-03

2016-10-18

2017-01-24)