煙管菌T1原生質(zhì)體制備及菌絲再生條件優(yōu)化

高雪艷 儲(chǔ)巧玲 周凌峰 韓國(guó)民

摘要[目的]研究煙管菌T1（Bjerkandera adusta）原生質(zhì)體制備及菌絲再生的最佳條件。[方法]研究菌齡、滲透壓穩(wěn)定劑種類(lèi)和濃度、pH、酶濃度及酶解時(shí)間對(duì)原生質(zhì)體得率的影響，并研究再生培養(yǎng)基種類(lèi)對(duì)菌絲再生的影響。[結(jié)果]在 PDA 液體培養(yǎng)基中，以28 ℃搖床培養(yǎng)3 d 的菌絲最適于該菌原生質(zhì)體制備；用0.5 mol/L KCl配制的含有15 mg/mL的溶壁酶于30 ℃下酶解3 h，獲得原產(chǎn)量最高，達(dá)118×106個(gè)/mL；RM1培養(yǎng)基再生率最高，達(dá)1.22%。[結(jié)論]該研究?jī)?yōu)化了原生質(zhì)體制備及菌絲再生條件，為進(jìn)一步研究煙管菌噬藻分子機(jī)制提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞煙管菌T1；原生質(zhì)體制備；菌絲再生；優(yōu)化

中圖分類(lèi)號(hào)S182文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2017）11-0001-02

Abstract[Objective]To study protoplasts preparation and hyphae regeneration conditions of Bjerkandera adusta.[Method] The effect of different culture conditions （hyphae age，stabilizer and stabilizer concentration，pH， enzymatic concenfration，enzymatic hydrolysis time） on protoplasts preparation and hyphae regeneration conditions of Bjerkandera adusta was studied.[Result] The fungal mycelia cultured in the liquid PDA medium at 28 ℃ for 3 days was the most suitable for protoplast preparation.15 mg/mL soluble wall enzyme in 0.5 mol /L KCl hydrolyzing for 4 hours could generate as many as 118×106 protoplasts/mL.The RM1 medium was the preferred regeneration medium on which the regeneration rate was as high as 1.22%.[Conclusion] The study optimize the conditions of protoplasts preparation and regeneration， and provide theory basis for further study of molecular mechanism of Bjerkandera adusta.

Key wordsBjerkandera adusta T1；Protoplast preparation；Hyphae regeneration；Optimization

近年來(lái)，水華的暴發(fā)越來(lái)越頻繁，巢湖、太湖、滇池、北美的伊利湖、歐洲的波羅的海、非洲的維多利亞湖等全世界的許多主干水系均曾出現(xiàn)過(guò)嚴(yán)重的藍(lán)藻水華[1-3]。水華常釋放大量的有毒物質(zhì)——藻毒素，引起水生和陸生生物中毒，導(dǎo)致人體過(guò)敏、致癌、肝受損等，嚴(yán)重影響人類(lèi)生活。利用真菌菌膜包裹并去除藍(lán)藻是近幾年發(fā)現(xiàn)的一種新的除藻方式[3-4]。Jia等[5-6]發(fā)現(xiàn)真菌冷杉附毛孔菌——1302BG（Trichaptum abietinum）菌絲體將活體藻細(xì)胞包裹后并將其完全分解，藻細(xì)胞在48 h內(nèi)完全消失，藻溶液變得澄清透明，并可以在較短時(shí)間內(nèi)（12 h）降解藍(lán)藻毒素。Wang等[7]分離到一株類(lèi)似除藻模式的真菌Lopharia spadicea，該菌在39 h內(nèi)可以分解所有藻細(xì)胞，再生菌絲體仍具有高效的除藻能力。Han等[8]從紫金山分離得到的約60種真菌中，其中4種真菌Irpex lacteus T2b，Trametes hirsuta T24、Trametes versicolor F21a和Bjerkandera adusta T1除藻效果較好，而真菌Penicillium sp.F02、Hypocrea koningii F50和Aureobasidium pullulans F11等完全不能抑制藍(lán)藻生長(zhǎng)?！?br>