麒麟菜中溴酚化合物的提取和降血糖活性

安婷婷 李玲娜 王鶴

摘要[目的]從麒麟菜中提取溴酚化合物。[方法]以海洋紅藻類麒麟菜為原料，采用50%甲醇、50%乙醇、50%丙酮超聲提取和95%乙醇、60%乙醇和50%乙醇浸提的方法，最后評價提取物和分離后組分的體外降血糖活性。[結(jié)果]50%乙醇浸提的效率最高，且提取物的降血糖活性高達73%，且氯仿∶甲醇=100∶0組分活性最高，達70%。[結(jié)論]為進一步開發(fā)海南經(jīng)濟藻類及新的降血糖藥物提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞海洋紅藻;麒麟菜;溴酚化合物;降血糖活性

中圖分類號S-3文獻標(biāo)識碼

A文章編號0517-6611（2017）32-0138-02

Extraction and Hypoglycemic Activity of Bromophenols Compounds from Eucheuma muricatum

AN Tingting，LI Lingna，WANG He（Pharmaceutical Institute of Hainan Province，Haikou，Hainan 570311）

Abstract[Objective] The aim was to extract bromine phenolic compounds from Eucheuma muricatum.[Method] The marine red alga Eucheuma was taken as raw materials，and 50% methanol，50% ethanol and 50% acetone ultrasonic extraction and 95% ethanol，60% ethanol and 50% ethanol leaching method were used.Finally，the in vitro hypoglycemic activities of final evaluation extracts and isolated group were evaluated.[Result] The efficiency of ethanol extraction was the highest in 50% ethanol extracts，and the blood glucose activity of the extracts was 73%，and the activity of chloroformmethanol （100∶0） was the highest，reaching 70%.[Conclusion] The results provide theoretical basis for further development of Hainan economic algae and new hypoglycemic agent.

Key wordsRed algae;Eucheuma muricatum;Bromophenols;Hypoglycemic activity

海藻溴酚化合物為海洋生物特有的鹵代化合物，大多具有新穎的化學(xué)結(jié)構(gòu)及獨特的生物活性，是新藥寶貴的化合物來源。國內(nèi)外學(xué)者現(xiàn)已從紅藻門的松節(jié)藻、多管藻等中分離出具有降血糖、抗炎[1]、抗腫瘤[2-4]等活性的溴酚化合物。目前，國內(nèi)外學(xué)者已將海藻溴酚化合物作為治療糖尿病、動脈粥樣硬化、惡性腫瘤等重大疾病的藥物，并已獲得了發(fā)明專利或新藥批件[5-6]。海南省熱帶紅藻資源非常豐富，如紫菜、江蘺、海蘿、鷓鴣菜、海人草、麒麟菜等，很多在民間藥用廣泛。筆者從麒麟菜中提取了具有降血糖作用的溴酚化合物，探究了最佳提取方法，并評價了其體外降血糖活性。

1材料與方法

1.1材料UV-2401PC型紫外分光光度計;SK450HP型超聲微波清洗儀; SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵（河南鄭州江成科工貿(mào)有限公司）;TGL-16MC型臺式高速冷凍離心機;OS-100型軌道式振蕩儀;98-1-C型數(shù)顯控溫電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司）;RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（浙江杭州億捷科技有限公司）;低溫冷卻液循環(huán)泵（浙江杭州億捷科技有限公司）。

1.2方法

1.2.1麒麟菜方法的優(yōu)選。

1.2.1.1浸提法。稱取10.0 g麒麟菜粉末3份，置于250 mL三角錐形瓶中，分別加入100 mL 95%乙醇、 80%乙醇、 50%乙醇，室溫下避光浸提3 d，提取3次。取3次浸提液進行抽濾，將濾液轉(zhuǎn)移至500 mL圓底燒瓶中，加沸石5粒，于65 ℃下減壓濃縮至干，向燒瓶中加入25 mL純化水，超聲30 min使其溶解，將溶液轉(zhuǎn)移至50 mL棕色容量瓶中，加純化水定容，避光密封保存，備用。

1.2.1.2超聲提取法。

稱取10.0 g麒麟菜粉末3份，置于250 mL三角錐形瓶中，分別加入100 mL 50%甲醇、50%乙醇、 50%丙酮，超聲提取30 min，抽濾，濾渣加入100 mL 50%甲醇，超生提取30 min，抽濾，合并濾液于500 mL圓底燒瓶中，加入5粒沸石，75 ℃減壓濃縮至干，加入25 mL純化水，超聲30 min使其溶解，將溶液轉(zhuǎn)移至50 mL棕色容量瓶中，加純化水定容，避光密封保存，備用。

1.2.2不同提取方法中酚類物質(zhì)的含量測定。

1.2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。取數(shù)支50 mL容量瓶，分別加入20 mL純化水，再分別加入0、0.04、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.80 mg/mL間苯三酚標(biāo)準(zhǔn)液1.0 mL，按最佳試驗條件于713 nm波長處測定吸光度。

1.2.2.2樣品的測定。取數(shù)支50 mL容量瓶，分別加入20.0 mL純化水、1.0 mL麒麟菜樣品3份、3.0 mL 飽和Na2CO3溶液、5.0 mL Folin-Denis試劑，顯色70 min，在713 nm波長處測定吸光度。

1.2.3分離前酶活性測定。

取1 mL萃取液于5 mL容量瓶中，N2吹干，加入少量純化水溶解，定容，備用。

反應(yīng)體系參照賢景春等[7]方法，優(yōu)化后如下：0.5 mL 0.1 mmol/L磷酸鉀緩沖液（pH 6.8），再加入

100 μL 10 mg/L α-D葡萄糖吡喃苷、0.5 mL樣品溶液，混勻，37 ℃保持20 min，加入0.5 mL 2.5 mmol/L PNPG，混勻后37 ℃保持20 min，再加入1 mL 0.2 mol/L Na2CO3溶液終止反應(yīng)。于405 nm波長處測定吸光值，重復(fù)3次，取平均值。同時設(shè)空白組和背景組。

1.2.4溴酚化合物的分離。

稱取87 g柱層析用硅膠（200～300目）于500 mL燒杯中，加入250 mL氯仿，攪拌均勻，浸泡10 min，使硅膠充分飽和，將硅膠沿玻璃棒緩緩加入到層析柱中，排氣泡，靜置30 min，打開閥門，放出氯仿。將乙酸乙酯萃取物與在氯仿中增加甲醇梯度洗脫（0～100%）成6個組分，分別標(biāo)記為A1（氯仿∶甲醇=100∶0）、A2（氯仿∶甲醇=60∶40）、A3（氯仿∶甲醇=40∶60）、A4（氯仿∶甲醇=60∶40）、A5（氯仿∶甲醇=20∶80）、A6（氯仿∶甲醇=0∶100）。分別收集各組分洗脫液于錐形瓶中，將洗脫液轉(zhuǎn)移至100 mL雞心瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上30 ℃減壓濃縮至干。向雞心瓶內(nèi)加入少量純化水，超聲溶解，多次洗滌，將洗液轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，定容，低溫避光冷藏，備用。

1.2.5分離后酶活性。以A1～A6為樣品，步驟同“1.2.3”，于405 nm波長處測定吸光度，計算酶活性抑制率。

酶活性抑制率=A空白-（A樣品-A背景）A空白×100%

式中，A空白為不加待測樣品反應(yīng)后的吸光值;A樣品為加入待測樣品反應(yīng)后的吸光值;

A背景為只加待測樣品反應(yīng)后的吸光值。

2結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程為y=1.470 5x-0.003 8，R2=0.999。6組樣品的結(jié)果見表1，50%丙酮超聲提取和50%乙醇超聲提取的提取效率相近，50%乙醇浸提的效率最高，故以50%乙醇浸提作為溴酚化合物的最佳提取方法。

參考文獻

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張宏利，朱鋐達，駱天紅，等.蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因多態(tài)性與2型糖尿病和肥胖的相關(guān)性研究[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志，2006，22（1）：45-48.

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[3] 徐年軍.海藻抗腫瘤抗細(xì)菌生物活性物質(zhì)的研究[J].青島：中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所），2002.

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[6] 史大永，范曉，韓麗君，等.溴酚類化合物在制備治療惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用：CN101283998[P].2008-10-15.

[7] 賢景春，梁政超. 龍眼核提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性體外實驗的研究[J].食品科技，2010，35（7）：225-227.