QuEChERS dSPE EMR—Lipid—LC—MS—MS測(cè)定雞蛋中3種聚醚だ囁骨虺嬉┪鋝辛

臧國(guó)棟 符靖雯 楊欽沾 黃子敬 陳孟君

摘要[目的]利用 Agilent Bond Elut增強(qiáng)型脂質(zhì)去除EMR-Lipid技術(shù)，建立了以QuEChERS dSPE EMR-Lipid 為前處理測(cè)定雞蛋中3種聚醚類藥物殘留的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS-MS）方法。[方法]雞蛋經(jīng)酸化乙腈提取，Bond Elut EMR-Lipid QuEChERS凈化，采用HPLC-MS-MS上機(jī)檢測(cè)。[結(jié)果]3種聚醚類藥物殘留在2.0～100.0 μg/L 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r>0.999），回收率在84.6%～107.0%。[結(jié)論]該方法前處理方便快捷、定量結(jié)果準(zhǔn)確、再現(xiàn)性好，適用于雞蛋中3種聚醚類藥物殘留的測(cè)定。

關(guān)鍵詞QuEChERS;EMR-Lipid;液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜;聚醚類

中圖分類號(hào)S851.34+7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A文章編號(hào)0517-6611（2017）32-0075-02

Determination of Three Kinds of Polyether Drug Residues in Eggs by QuEChERS dSPE EMR-Lipid-LC-MS-MS

ZANG Guodong，F(xiàn)U Jingwen，YANG Qinzhan et al（Huizhou Center for Agricultural Products Quality and Safety Supervision and Testing，Huizhou ，Guangdong 516008 ）

Abstract[Objective]To establish a LCMS-MS method for the determination of three kinds of polyether residues in eggs by QuEChERS dSPE EMRLipid as a pretreatment using Agilent Bond Elut enhanced lipid removal EMRLipid technology.[Method]Egg was extracted by acidified acetonitrile，purified by Bond Elut EMRLipid QuEChERS，and detected by HPLCMSMS.[Resul]There was a good linear relationship between the three kinds of polyether residues in the range of 2.0-100.0 μg/L，r>0.999.The recoveries ranged from 84.6% to 107.0%.[Conclusion]The method is convenient and accurate，and the quantitative results are accurate and reproducible.It is suitable for the determination of three kinds of polyether residues in eggs.

Key wordsQuEChERS;EMRLipid;Liquid phase tandem mass spectrometry;Polyether

聚醚類抗生素藥物是現(xiàn)在使用最廣泛的雞用抗球蟲(chóng)藥，在我國(guó)普遍用于治療雞球蟲(chóng)病。球蟲(chóng)病是由艾美球蟲(chóng)屬原球蟲(chóng)感染所得[1]，可破壞家禽腸道的寄生蟲(chóng)疾病。感染球蟲(chóng)病后將會(huì)嚴(yán)重影響禽類的肉和蛋的產(chǎn)量，感染嚴(yán)重可導(dǎo)致禽類死亡。但過(guò)量添加聚醚類抗生素會(huì)增加動(dòng)物肌肉和蛋中藥物的殘留，食用后會(huì)對(duì)人類身體健康不利，甚至可能會(huì)加重心血管患者的病情。目前報(bào)道的聚醚類抗生素殘留檢測(cè)方法，主要有比色法、微生物法[2]、薄層法、免疫分析法[3]、液相色譜法[4-6] 和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[7-13]。比色法、微生物法、薄層法和免疫學(xué)法只能檢測(cè)單一的藥物殘留，且結(jié)果不夠準(zhǔn)確;液相色譜法需要衍生化，操作繁瑣;而液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法靈敏度高，基質(zhì)效應(yīng)小，是聚醚類抗生素比較理想的檢測(cè)方法。筆者采用 Agilent Bond Elut增強(qiáng)型脂質(zhì)去除EMR-Lipid技術(shù)，建立了以QuEChERS dSPE EMR-Lipid 為前處理測(cè)定雞蛋中3種聚醚類藥物殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，前處理過(guò)程簡(jiǎn)單快速，無(wú)需衍生，無(wú)需固相萃取凈化，檢出限較低，回收率好且再現(xiàn)性高，適用于雞蛋中聚醚類抗生素殘留的檢測(cè)分析。

1材料與方法

1.1材料

Agilent G6460 三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀，美國(guó)Agilent 公司，配電噴霧離子源，配Agilent 1290 超高效液相色譜儀; TGL-16M 高速冷凍離心機(jī)，湘儀離心機(jī)公司;微孔濾膜（0.22 μm），天津津騰公司。莫能菌素、鹽霉素、甲基鹽霉素，純度均大于95.0%，均來(lái)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司;甲醇、乙腈均為色譜純，MERCK公司;甲酸，色譜純，廣州化學(xué)試劑廠;試驗(yàn)用水為Milli-Q 純水儀凈化的超純水，美國(guó)密理博公司。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

標(biāo)物儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取3種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇溶解配制成100 μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-18 ℃保存。

混合工作液：準(zhǔn)確量取上述各儲(chǔ)備液適量，甲醇逐級(jí)稀釋制備成1.0 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，4 ℃保存。

1.3樣品前處理

準(zhǔn)確稱取去殼攪拌均勻的雞蛋樣品2.0 g于50 mL離心管內(nèi)，然后加入10 mL 5%甲酸乙腈提取溶液，渦旋1 min，8 ℃、12 000 r/min離心5 min，取上清液待用。dSPE EMR-Lipid吸附劑先用5 mL水活化，加入5 mL上述待用上清液，渦旋1 min，在8 ℃、12 000 r /min離心5 min，然后取5 mL上清液加入已裝有NaCl和無(wú)水Na2SO4的EMR-Polish管中，充分振動(dòng)鹽析，8 ℃、12 000 r/min離心5 min，取適量上層乙腈過(guò)0.22 μm濾膜，供液質(zhì)分析。

1.4液相色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse PlusC18柱（2.1 mm×50 mm×1.8 μm），Agilent 公司;柱溫30 ℃; 流速0.3 mL/min; 進(jìn)樣量5 μL;流動(dòng)相A為0.1% 甲酸水溶液，B為甲醇; 梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

1.5質(zhì)譜條件

電離方式為電噴霧電離源（ESI），正離子模式掃描，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），離子源溫度為350 ℃;氣體為氮?dú)?干燥氣流速6 L/min;霧化器壓力310 kPa; 鞘氣溫度350 ℃;通過(guò)對(duì)毛細(xì)管電壓、碰撞能等質(zhì)譜參數(shù)的最佳優(yōu)化，最終確定3種聚醚類藥物質(zhì)譜條件見(jiàn)表2。

2結(jié)果與分析

2.1線性關(guān)系及檢出限

配制3種聚醚類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度從2.0～100.0 μg/L進(jìn)行分析，結(jié)果表明：在2.0、5.0、10.0、50.0、100.0 μg/L的濃度范圍內(nèi)，3種藥物都具有良好的線性，線性相關(guān)系數(shù)r大于0.999，記錄各待測(cè)組分色譜峰面積，以各組分的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），各組分的峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸分析，以3倍信噪比（S/N=3） 對(duì)應(yīng)的濃度作為方法檢出限（LOD），檢出限為0.2～0.5 μg/kg，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.2回收率及精密度

在雞蛋空白樣品中添加2.0、5.0 以

3討論

未來(lái)獸藥殘留檢測(cè)的趨勢(shì)是快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確以及高通量[14]。該試驗(yàn)將Agilent公司新產(chǎn)品dSPE EMR-Lipid 去除脂質(zhì)增強(qiáng)型產(chǎn)品結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)QuEChERS方法，應(yīng)用于含脂量高的雞蛋樣品，獲得了理想的除脂凈化效果，相比于GB/T 20364—2006《動(dòng)物源產(chǎn)品中聚醚類殘留量的測(cè)定》[15]，前處理過(guò)程簡(jiǎn)單快速，不需要固相萃取凈化，定量結(jié)果準(zhǔn)確，回收

率高，能夠滿足平時(shí)檢測(cè)或大批量篩查的需要。

參考文獻(xiàn)

[1]

劉賢勇，索勛.雞球蟲(chóng)病及其控制策略[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，2006，8（5）：31-37.

[2] 李娜，孫潔，祁克宗，等.雞肌肉組織中鹽霉素殘留的微生物法檢測(cè)研究[J].飼料工業(yè)，2008，29（3）：45-48.

[3] HAGREN V，PEIPPO P，TUOMOLA M，et al.Rapid timeresolved fluoroimmunoassay for the screening of monensin residues in eggs[J].Anal Chim Acta，2006，557（1/2）：164-168.

[4] 項(xiàng)新華，涂曉明，賈明宏，等.高效液相色譜法檢測(cè)動(dòng)物組織中馬杜霉素殘留[J].中國(guó)公共衛(wèi)生，2002，18（1）：101-102.

[5] 陳明，陳美琴，耿志明，等.雞蛋中聚醚類抗生素殘留檢驗(yàn)方法研究[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2006，6（5）：124-128.

[6] 陳明，耿志明，王冉，等.飼料中聚醚類抗生素的柱后衍生同時(shí)測(cè)定方法研究[J].中國(guó)飼料，2005（20）：27-29.

（上接第76頁(yè)）

[7]

DUBREILCHNEAU E，BESSIRAL M，ROUDAUT B，et al.Validation of a multiresidue liquid chromatographytandem mass spectrometry confirmatory method for 10 anticoccidials in eggs according to Commission Decision 2002/657/EC[J].J Chromatogr A，2009，1216：8149-8157.

[8] RAMSEY E D，REES A T，WEI G，et al.Direct aqueous supercritical fluid extraction coupled online with liquid chromatographytandem mass spectrometry for the analysis of polyether ionophore antibiotics in water[J].J Chromatogr A，2010，1217（20）：3348-3356.

[9] VINCENT U，CHEDIN M，YASAR S，et al.Determination of ionophore coccidiostats in feedingstuffs by liquid chromatographytandem mass spectrometry Part I.Application to targeted feed[J].J Pharm Biomed Anal，2008，47（4/5）：750-757.

[10] 畢言鋒，徐倩，王樹(shù)槐，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中的4種聚醚類抗球蟲(chóng)藥物殘留[J].分析試驗(yàn)室，2009，28（7）：17-21.

[11] 梁春來(lái)，程林麗，沈建忠，等.液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)雞組織中5種聚醚類藥物殘留[J].色譜，2009，27（6）：815-819.

[12] 薄海波，雒麗麗，曹彥忠，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛奶和奶粉中6種聚醚類抗生素殘留量[J].分析化學(xué)，2009，37（8）：1161-1166.

[13] DUBOIS M，PIERRET G，DELAHAUT P.Efficient and sensitive detection of residues of nine coccidiostats in egg and muscle by liquid chromatographyelectrospray tandem mass spectrometry[J].J.Chromatogr B，2004，813（1/2）：181-189.

[14] KINSELLA B，O′MAHONY J，MALONE E，et al.Current trends in sample preparation for growth promoter and veterinary drug residue analysis[J].J Chromatogr A，2009，1216（46）：7977-8015.

[15] 國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)總局.動(dòng)物源產(chǎn)品中聚醚類殘留量的測(cè)定：GB/T 20364—2006[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.