血中mRNA與HBV慢加急肝衰竭預后的相關性研究

馬大鵬+吳鋒+梁恩富

【摘要】 目的 探討乙型肝炎病毒（HBV）慢加急肝衰竭（ACLF）患者血中mRNA表達及意義。方法 選取20例HBV所致ACLF患者作為肝衰竭組， 20例健康體檢者作為對照組， 分析比較兩組臨床相關指標[谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、γ谷氨酰轉移酶（γ-GT）、凝血酶原活動度（PTA）、總膽紅素（TBIL）、肌酐（Cr）、白細胞計數（WBC）]， 并分析HBV-ACLF患者三種微小RNA（mRNA）和臨床指標[ALT、AST、白蛋白（ALB）、乙肝病毒的脫氧核糖核酸（HBV-DNA）、生存時間、PTA、凝血酶原時間的國際標準化比值（INR）、血小板（PLT）、TBIL、直接膽紅素（DBIL）、乙肝核心抗體（HBcAb）]的關系。結果 肝衰竭組患者的ALT、AST、PTA、TBIL、Cr、WBC分別為（156.41±214.08）U/L、（232.59±314.12）U/L、

（21.46±8.97）%、（324.60±164.76）μmol/L、（125.61±101.20）μmol/L、（8.12±5.29）×109/L， 與對照組的（26.67±

30.02）U/L、（24.22±7.60）U/L、（114.00±11.31）%、（12.83±3.25）μmol/L、（61.11±12.84）μmol/L、（5.14±

1.74）×109/L比較， 差異均具有統計學意義（P<0.05）。HBV-ACLF患者mRNA 150-5P與ALT、AST、PLT、TBIL、DBIL中度相關， 與生存時間高度相關；mRNA 146a-5P與ALT高度相關， 與AST、PTA、PLT、TBIL中度相關；mRNA 29a-3P與生存時間、PLT 、TBIL中度相關。結論 肝病病情越重， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P水平越低， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P對HBV-ACLF患者的預后評估有著重要意義， 可以作為肝衰竭新的預后判斷指標。

【關鍵詞】 乙型肝炎病毒；芯片；慢加急性肝衰竭

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.11.031

慢加急性肝衰竭（acute on chronic liver failure， ACLF）具有起病急、并發癥多、預后差的特點， 雖然近幾年提倡的多學科重癥監護治療及人工肝治療均在很大程度上提高了生存率， 但是ACLF的病死率仍然很高， 30%～50%患者會出現肝臟相關并發癥， 大多數患者最終因多器官功能衰竭而死亡， 未經治療的ACLF患者死亡率可達75%。因此對于ACLF的早診斷及早治療是需要解決的難題[1]。mRNA是一類存在于真核生物中， 其大小長約18～25個核苷酸， 具有多種調控功能的非編碼RNA， 越來越多的研究表明mRNA在肝臟的炎癥反應中扮演重要角色[2]。為研究HBV導致的慢加急性肝衰竭外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cells， PBMC）中mRNA的表達情況， 作者利用人類mRNA OneArray芯片找出表達水平明顯改變的mRNA ， 以期探究mRNA在HBV導致的慢加急性肝衰竭中表達情況， 并初步分析其臨床意義及應用價值。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2014年8月～2016年8月大連市第六人民醫院20例HBV所致ACLF患者作為肝衰竭組， 診斷均符合中華醫學會肝病學分會《肝衰竭診治指南（2012年版》[2]診療標準。肝衰竭組中男8例， 女12例， 平均年齡（45.07±8.14）歲。另選20例健康體檢者作為對照組， 男11例， 女9例， 平均年齡（33.30±8.34）歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 實驗方法 以Trizol法（淋巴細胞分離液購自天津灝洋生物科技有限公司， RNAiso Plus 購自TaKaRa公司）提取外周血RNA ， 通過熒光實時定量RT-PCR檢測方法（反轉錄-熒光定量PCR引物由上海卓立技術科技公司合成）[3]， 分別檢測兩組的篩選mRNA定量。美國Beckman全自動生物化學分析儀檢測生物化學指標， 采用STA-revolution（全自動血凝儀）及配套試劑盒檢測凝血功能。分析比較兩組患者的臨床相關指標（ALT、AST、γ-GT、PTA、TBIL、Cr、WBC）， 并分析HBV-ACLF患者三種mRNA和臨床指標（ALT、AST、ALB、HBV-DNA、生存時間、PTA、INR、PLT、TBIL、DBIL、HBcAb）的關系。

1. 3 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。相關性分析采用Pearson分析， Pearson相關系數的絕對值 （|r|）>0.8 為高度相關， |r|>0.5為中度相關， |r|>0.3為低度相關。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 兩組的臨床相關指標比較 肝衰竭組患者的ALT、AST、PTA、TBIL、Cr、WBC水平與對照組比較， 差異均具有統計學意義（P<0.05）；肝衰竭組患者的γ-GT與對照組比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2. 2 HBV-ACLF患者三種mRNA和臨床指標的相關系分析 HBV-ACLF患者mRNA 150-5P與ALT、AST、PLT、TBIL、DBIL中度相關， 與生存時間高度相關；mRNA 146a-5P與ALT高度相關， 與AST、PTA、PLT、TBIL中度相關；mRNA 29a-3P與生存時間、PLT 、TBIL中度相關。見表2。

3 討論

目前臨床治療ACLF仍存在很多阻礙， 雖然多學科重癥監護治療及人工肝治療等方法在治療過程中取得了一定成績， 但治療效果仍有待提高[4]。近年來研究表明mRNA在肝臟的炎癥反應中扮演重要角色， 本次實驗就是探究mRNA是否可以成為HBV導致的ACLF診斷預測新的標志物， 另外mRNA在HBV導致的ACLF是否參與炎癥反應來影響疾病的進展。寧琴等[5]發現miR-146a敲除小鼠因超活化NF-κB會出現的超感染等炎癥狀態， 考慮其機制可能為miR-146a在NF-κB的驅使下是TLR信號通路及維甲酸誘導基因的負調節基因， 在巨噬細胞或者小腸上皮細胞中， miR-146a與其上游的主要組件， 包括IRAK1， IRAK2以及TNFR相關因子靶向結合[6]。本研究發現HBV-ACLF患者血清中mRNA 146a-5P的水平明顯下降， 與 ALT、AST明顯相關， 證明了mRNA 146a-5P確實參與炎癥反應， 與文獻[7]研究結果相符。miR-150則在組織缺氧情況下， 由缺氧誘導因子-1通過負性調節下調miR-150的表達， 其下游靶點血管內皮生長因子A（VEGA）mRNA及蛋白質增加， 促進肝再生。由此說明mRNA能夠調節肝細胞凋亡， 參與肝再生過程， 在肝衰竭進展中起重要作用， 可能作為肝衰竭預后的潛在標志物。黃朝興等[8]發現重型肝炎患者的mRNA 150-5P的表達是下調的， 本次實驗mRNA 150-5P在肝衰竭組的表達較正常下調， 與其他相關報道相符。

綜上所述， 肝病病情越重， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P水平越低， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P對HBV-ACLF患者的預后評估有著重要意義， 可以作為肝衰竭新的預后判斷指標。

參考文獻

[1] 李蘭娟， 段鐘平. 肝衰竭診治指南（2012年版）. 中華肝臟病雜志， 2013， 21（3）：210-216.

[2] 中華醫學會感染學分會肝功能衰竭與人工肝學組. 肝功能衰竭診療指南. 中華傳染病雜志， 2006， 24（6）：422-425.

[3] 鄧天勤， 黃永漢， 甄勁儀， 等. 男性不育伴乙型肝炎病毒感染患者精子DNA完整性的初步研究. 中華男科學雜志， 2013， 19（1）：72-76.

[4] 王曉晶， 寧琴. 乙型肝炎重癥化的研究現狀和展望. 臨床肝膽病雜志， 2012， 28（6）：401-404.

[5] 寧琴， 朱琳， 嚴偉明. 乙型肝炎重癥化的早期預警. 中華肝臟病雜志， 2010， 18（11）：805-807.

[6] 夏海鳴， 吳引偉， 殷國慶. 乙型肝炎病毒在慢性乙型肝炎患者肝細胞染色體上的整合情況. 江蘇醫藥， 2006， 32（3）：201.

[7] 陳莉， 譚德明， 胡志亮， 等. 重型肝炎患者外周血單個核細胞中微小RNA表達的分析. 中華肝臟病雜志， 2011， 19（7）：556-558.

[8] 黃朝興， 呂吟秋， 李凡凡， 等. 乙肝病毒血癥與原發性腎炎患者腎組織內乙肝抗原沉積的相關性研究. 中國中西醫結合腎病雜志， 2001， 2（9）：526-528.

[收稿日期：2017-02-28]