高效液相色譜法測定復方雙花利咽合劑中綠原酸的含量

周穎

摘 要：本文采用高校液相測定了復方雙花利咽合劑中綠原酸的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-乙腈-4%磷酸水（2：10∶88）為流動相，檢測波長為327nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。綠原酸在5～80μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。綠原酸的平均回收率為99.3%，RSD為0.83%（n=6）；此方法簡便、準確、重現性好，可用于復方雙花利咽合劑中綠原酸的含量測定。

關鍵詞：復方雙花利咽合劑；綠原酸；含量

金銀花為復方雙花利咽合劑主要成分之一。金銀花名出自《本草綱目》，由于忍冬花初開為白色，后轉為黃色，因此得名金銀花。金銀花自古被譽為清熱解毒的良藥。金銀花既能宣散風熱，還善清解血毒，用于各種熱性病。《本經逢原》記載：“金銀花，解毒去膿，瀉中有補，癰疽潰后之圣藥。但氣虛膿清，食少便瀉者勿用。痘瘡倒陷不起，用此根長流水煎浴，以痘光壯為效，此即水楊湯變法。”金銀花傷寒桿菌、副傷寒桿菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、百日咳桿菌、霍亂弧菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、腦膜炎球菌等均有抑制作用。金銀花主要包括黃酮類、有機酸類、環烯醚萜類、三萜及三萜皂苷類、揮發油等多種類型成分，綠原酸是其主要有效成分之一。金銀花具有抗菌、抗腫瘤、降脂、抗生育、增強免疫、抗炎、利膽、保肝、抗病毒、止血、抗潰瘍等多種藥理作用。本文采用高校液相測定了復方雙花利咽合劑中綠原酸的含量。

1 儀器與試藥

美國必能信超聲波清洗機（北京星越天成科技有限公司）；EX1600四元低壓梯度液相色譜儀（南京皓而普分析設備有限公司）；Aurora-F1實驗室自動洗瓶機（杭州喜瓶者生物技術有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德創業科技有限公司）；SUPREMA高速大容量離心機（天美（中國）科學儀器有限公司）；HH-601超級恒溫水浴鍋（常州市華怡儀器制造有限公司）；實驗室用高純水制備器（北京科譽興業科技發展有限公司）；美析紫外可見分光光度計（美析（中國）儀器有限公司）。綠原酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（北京亞太龍興化工有限公司）、冰醋酸（青島市金宏鑫化工有限公司）、三乙胺（廣州市西隴化工有限公司）、甲醇（廣州市西隴化工有限公司）、磷酸（北京亞太龍興化工有限公司）、醋酸鈉（北京亞太龍興化工有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件：依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[3-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規格為（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-乙腈-4%磷酸水（2：10∶88）為流動相；檢測波長為327nm。理論板數按綠原酸峰計算應不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取復方雙花利咽合劑，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加人70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）25分鐘，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液20ml蒸至近干，殘渣用50%甲醇溶解，轉移至5ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對照品約5mg，用甲醇溶解并稀釋成每1ml中含20？g的溶液，作為對照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

依照處方除金銀花以外藥材，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結果在綠原酸出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準曲線的制備

制備濃度為5、10、20、40、60、80μg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A（μg）為橫坐標，進樣量為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。試驗表明，綠原酸對照品在5～80μg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗

依照2.4項下制備對照品溶液，精密吸取綠原酸對照品溶液10μL重復進樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.73%。結果表明，本實驗精密度良好。

2.7 重現性試驗

分別稱取同批復方雙花利咽合劑樣品6份，分別依照2.3項下供試品制0.76%，結果表明，此含量測定方法的重現性良好。

2.8 穩定性試驗

依照2.3項下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，10，20，30分鐘精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進樣測定，供試品綠原酸峰面積積分值的RSD為0.67%。結果表明綠原酸至少在30分鐘內穩定。

2.9 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的綠原酸對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為99.3%，RSD為0.83%。

2.10 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定復方雙花利咽合劑三批樣品中綠原酸的含量，含量為7.56mg/g、7.67mg/g、7.92mg/g。

3 討論

分別考察乙腈-水（35：65），甲醇-水（20：80），水-乙腈-三乙胺（82∶18：0.01），甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶1）；甲醇-乙腈-4%磷酸水（2：10∶88），乙腈-1%冰醋酸溶液（20∶80）不同比例的流動相，結果以甲醇-乙腈-4%磷酸水（2：10∶88）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-4%磷酸水（2：10∶88）為流動相。此方法簡便、準確、重現性好，可用于復方雙花利咽合劑中綠原酸的含量測定。復方雙花利咽合劑中綠原酸的含量不少于7.0mg/g。

參考文獻

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