分析HPLC—MS/MS法快速檢測中成藥及保健食品中6種減肥類非法添加化學成分

目的：通過HPLC-MS/MS法快速檢測中成藥及保健食品中6種減肥類非法添加化學成分。方法：將藥品與甲醇混合制備成混合標準溶液與供試品，在工作條件下采用ESI電離源和MRM掃描方式進行測定分析。結果：HPLC-MS/MS法可準確檢測中成藥及保健食品中6種減肥類非法添加化學成分，檢測限為（0.1-1.0）ng。結論：HPLC-MS/MS法靈敏度高、操作簡便、快速，具有良好的適用性和有效性。

近年來，在具有減肥功效的中成藥物和保健品中發現非法添加化學成分的報道屢見不鮮。常見的添加成分有鹽酸西布曲明、鹽酸麻黃堿、鹽酸芬氟拉明、呋塞米、酚酞、咖啡因。這些藥物長期服用會對消費者的健康和生命造成威脅。因此，探索科學合理的檢測方法是十分必要的。本文建立HPLC-MS/MS法對中成藥及保健食品中這6種減肥類非法添加化學成分，取得良好的成果，現報道如下。

儀器與方法

儀器與試藥。研究采用的儀器包括美國Aglient 1200-G6410B三重四極桿液質聯用儀與ESI電離源。采用的藥品均購自中國藥品生物制品檢定所，包括鹽酸西布曲明、鹽酸麻黃堿、鹽酸芬氟拉明、呋塞米、酚酞、咖啡因。研究中所用水為超純水、流動相中所用甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。霧化氣和干燥氣為高純氮氣。流動相分別為甲酸鈉-甲醇、甲酸-甲醇、甲酸-乙腈溶液、乙酸鈉-甲醇、甲酸銨-乙腈溶液、乙酸鈉-乙腈溶液、乙酸-甲醇、乙酸-乙腈。其中銨溶液濃度為（5-20）mmol/L，酸溶液濃度為（0.1-0.5）%。

方法。（1）工作條件：研究對呋塞米采取負離子模式監測，對其余5種對照藥品均采用正離子模式監測，色譜柱溫為30℃、進樣量為10uL、流速為0.5ml/min、毛細管電壓為4.0kV、霧化氣壓力為20psi、干燥氣溫為350℃、干燥氣流量為12L/min。采取最高相對離子豐度的子離子作為檢測離子，采取MRM（多反應監測）模式，范圍為50-400。（2）制備實驗溶液。①混合標準溶液，將6種對照藥品分別取適量，與甲醇溶液進行溶解和稀釋，制成10ug/ml的混合溶液。②供試品溶液：片劑、丸劑。細致研磨粉碎，取一次服用量。膠囊劑。去其內容物，研細，稱取1次口服劑量。口服液。量取1次口服劑量。軟膠囊。稱取軟膠囊總重，采用注射器抽出內容為置于50ml量瓶。將藥品加入30ml甲醇渦旋處理10min，超聲提取10min，冷卻，以甲醇定容至刻度后搖勻，再將其以0.22um有機濾膜過濾，待用。

測定。取供試品，對照品溶液，以1.2.1所述工作條件進行測定分析，確保色譜峰的保留時間、特征碎片離子與混合對照品一致，對供試品溶液進行過多次反映離子監測掃描。計算對照品和樣品的相對離子豐度比（在允許偏差范圍內），則可判定供試品中是否含有非法添加化學成分。

結果分析

相對離子豐度最大容許誤差。相對離子豐度≤10%，最大允許偏差為（±50）%。 相對離子豐度>（10-20）%，最大允許偏差為（±30）%。 相對離子豐度>（20-50）%，最大允許偏差為（±25）%。 相對離子豐度>50%，最大允許偏差為（±20）%。

對照片、樣品離子流圖。筆者對市面上流通的42批減肥類中成藥及保健食品進行，其中有11批檢出非法添加化學成分，添加種類多為咖啡因、酚酞、鹽酸西布曲明，對照品離子流圖如圖1、樣品離子流圖如圖2。

檢測限。研究采取甲醇溶液將對照品進行逐步稀釋，以工作條件進行測定，當S：N（信噪比）為3：1時，化學成分檢出限均<1.5ng。

討論

中成藥及保健食品市場產品質量參差不齊，監督難度較大，不法分子受利益驅使添加化學成分。這些成分主要通過刺激腸壁、降低食欲、興奮中樞神經、刺激新陳代謝的途徑達到快速減肥的目的，長期服用會對消費者的生命健康造成極大的威脅。

現行的檢測體系（多為多個流動相體系檢測法）存在諸多缺陷，方法繁瑣、分離度差、耗時長。研究構建的HPLC-MS/MS法的原理為計算定性離子與定量離子豐度比，進而來確認樣品的陽性結果。采取HPLC-MS/MS法能夠有效的避免日常檢驗中出現假陽性的判定結果，節省了檢驗時間，提高了檢驗的精準度。筆者首先嘗試將流動相比例進行調整，結果發現對1ml/L的甲酸-甲醇溶液進行梯度洗脫能夠在較短時間內分離，提高分離度（≥1.5）。這一比率能夠明顯改善其他體系運行過程中出現的管道易堵塞、基線噪音較大、柱壓較高、峰重疊等問題。其次，考慮到現行文獻中對LC-MS/MS法的測定標準中未討論到相對豐度比。筆者對HPLC-MS/MS法補充如下，對于同等實驗條件下，樣品液與標準液中待測物質的色譜峰相對保留時間≤2.5%，扣除背景色譜，目標物離子與對照品的相對離子豐度在表1的誤差允許范圍內（對均出線），則可判定樣品中存在目標物品。