激光捕獲顯微切割技術結合iTRAQ標記定量蛋白質組在結腸癌篩查中的應用研究

穆儀冰+張桂英

[摘要] 目的 采用激光捕獲顯微切割技術（LCM）結合iTRAQ標記定量蛋白質組技術，篩查結腸癌間質的差異表達蛋白質。 方法 ①選擇12對結腸腺癌標本為觀察組，其配對正常結腸黏膜（與結腸癌標本至少相距10 cm以上）為對照組，采用LCM技術分別純化其間質作為生物樣本；② iTRAQ標記定量蛋白質組技術鑒定兩組間的差異表達蛋白質；③采用Geneontology生物信息學軟件（http：//pantherdb.org/）對差異表達蛋白質進行細胞成分、生物學途徑和分子功能分析。 結果 ①鑒定了70個差異表達蛋白，其中37個蛋白在結腸癌間質中高表達，33個蛋白在結腸癌間質中表達降低；②從生物學途徑、細胞成分、分子功能三個方面對差異表達蛋白質進行分析。 結論 ①首次采用iTRAQ標記定量蛋白質組學和LCM結合的方法篩查結腸癌間質差異表達蛋白質；②GO功能分析顯示了差異表達蛋白質的細胞成分、分子功能以及生物學功能。

[關鍵詞] 結腸癌；間質；激光捕獲顯微切割；iTRAQ標記定量蛋白組學；生物信息學

[中圖分類號] R735 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）03（c）-0026-05

The application of LCM combined with iTRAQ quantitative proteomic technology in colon cancer

MU Yibing1 ZHANG Guiying2

1. Department of Gastroenterology， the fourth hospital of Changsha， Hunan Province， Changsha 410008， China； 2. Department of Gastroenterology， Xiangya Hospital Central South University， Hunan Province， Changsha 410008， China

[Abstract] Objective To search differentially expressed proteins in colon cancer stroma （CS） by laser capture microdissection （LCM） combined with iTRAQ marker quantitative proteomic technique. Methods ①12 CS and adenocarcinoma tissues were selected as observation group， and normal mucosa （>10 cm away from adenocarcinoma） was selected as control group， the tissues were separated by LCM. ②iTRAQ quantitative proteomic technology was used to identified differentially expressed proteins（DEPs）.③ GENEONTOLOGY functional annotation（GO） was used for bioinformatics analysis （Cellular components， biological pathways and molecular functional analysis）. Results ①70 DEPs were identified in CS （37 upregulated and 33 downregulated）. ②The differentially expressed proteins were analyzed from three aspects： biological pathway， cell composition and molecular functio. Conclusion ① For the first time， 70 DEPs in CS by LCM and iTRAQ quantitative proteomic technology are identified. ② GO can be used to analysis the biology function of the 70 DEPs and provided important values to the pathology of colon cancer.

[Key words] Colon cancer； Stromal； Laser capturemicrodissection； iTRAQ-based quantitative proteomics； Bioinformatics analysis

腫瘤微環境在腫瘤發生發展中的作用越來越受到重視，現已成為當今腫瘤研究的一個熱門話題。結腸癌是世界常見的惡性腫瘤，其發病率和死亡率位居歐美發達國家的第三位[1-2]。近年來，由于環境的惡化和飲食結構的調整，我國結腸癌的發病率和死亡率逐年上升，嚴重危害了人民的生命和健康。目前，國內外對于結腸癌的研究多集中在結腸癌的癌細胞本身，但對于結腸癌微環境的研究較少。……