蒙醫施灸赫依三穴對PCPA模型大鼠腦組織IL-1β、IL-6含量的影響△

高玉峰 乎寶力格* 蘇日古嘎

(1.內蒙古民族大學附屬醫院，內蒙古 通遼 028007；2.內蒙古民族大學，內蒙古 通遼 028000)

蒙醫理論認為失眠癥的病因有外因和內因，外因系勞逸失調、思慮太過、驚嚇、失血等，內因系赫依琪素紊亂累及心臟白脈受累，機體在4個發病條件的作用下，赫依希日紊亂累及心臟、腎臟或赫依琪素紊亂累及白脈從而引起失眠，因此大多屬赫依病范疇。蒙醫灸療法則是鎮赫依之邪，抑制赫依病擴散之功效。前期研究已表明，施灸“赫依三穴”對睡眠紊亂模型大鼠有鎮靜作用，可降低中樞神經系統內重要的神經遞質NO與NOS的活性[1,2]。白細胞介素-1β(IL-1β)和白細胞介素-6(IL-6)是具有多種生物學功能的細胞因子，參與睡眠-覺醒，有調控睡眠穩態的作用[3]。筆者在前期研究基礎上觀察施灸赫依三穴對失眠大鼠腦干內IL-1β和IL-6含量的影響，進一步探討其干預失眠的機制，為臨床治療失眠選穴提出實驗依據。

1 材料和方法

1.1 實驗動物：實驗動物選擇健康雄性SD大鼠60只，體重約200±10g，全部大鼠均由沈陽實驗動物中心提供，合格證號：(SXSK(遼)2015-0001)。

1.2 試劑及儀器： AUW120D型島津電子d平購自日本島津公司，Biotek Elx800酶標儀購自美國Bio-Rad公司，對氯苯丙氨酸(PCPA)購自北京環亞太克生物醫學技術有限公司，艾灸貼購自蘇州東方艾絨廠，IL-1β酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒購自廣州瑞博奧生物科技有限公司，IL-6酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒購自廣州瑞博奧生物科技有限公司。

1.3 造模方法：本實驗采用共認得對氯苯丙氨酸造模法[4]。將PCPA用生理鹽水配置成混懸液(45mg/100g),腹腔注射PCPA混懸液(1mg/100g)，1次/d，連續注射2d。大鼠出現活動明顯頻繁、對外界的聲、光等刺激異常敏感，興奮性增高，晝伏夜出節律消失等，表明造模成功。

1.4 分組及處理方法：將60只SD雄性大鼠隨機分為6組，即正常組、模型組、安定組、頂會穴組、赫依穴組、黑白際穴組，每組10只。

正常組：大鼠腹腔注射0.9%氯化鈉溶液(1mL/100g)，1次/d，連續注射2日；與治療組相同的抓取、固定，不做任何治療，連續7d。

模型組：造模成功后同灸療組一樣抓取，固定。

安定組：造模成功后，將安定(地西泮)注射液，0.92mg/Kg，1次/d，連續灌胃7d。

頂會穴組：造模成功后施灸大鼠“頂會穴”，1次/d，連續7d。

赫依穴組：造模成功后施灸大鼠“赫依穴”，1次/d，連續7d。

黑白際穴組：造模成功后施灸大鼠“黑白際穴”，1次/d，連續7d。

1.5 觀察指標及檢測方法[5,6]：將6組大鼠快速斷頭處死，冰上迅速取大腦干稱重，-80℃冰箱保存待測。按100mg組織加入500μL裂解液，冰上裂解30min，每5min振蕩1次，在冰上用高速分散切割機進行破碎組織，冷凍離心機離心13000rpm， 20min，取上清。用ELISA法，按照IL-1β和IL-6試劑盒說明書的步驟，用酶標儀在酶標儀上的540～595nm波長范圍處檢測吸光度，其中562nm波長為最佳測量光密度值，計算出IL-1β及IL-6含量。

1.6 統計學方法：結果均采用±S表示，數據處理用SPSS17.0統計軟件，組間數據比較采用方差分析，以P<0.05為差異有顯著性意義。

2 結果

2.1 各組大鼠腦干中IL-1β含量測定結果：如表1所示，與正常組相比，模型組腦干內IL-1β含量升高，有顯著性差異(P<0.05)；與模型組比較，安定組腦干內IL-1β的含量降低，有顯著性差異(P<0.05)；與模型組相比，赫依穴組、頂會穴組和黑白際穴組均無顯著性差異(P>0.05)，但頂會穴組和黑白際穴組有降低趨勢。

表1 蒙醫灸療法對各組大鼠腦干中IL-1β的影響

注：與正常組比較，◆P<0.05；與模型組比較，●P<0.05，●●P>0.05

2.2 各組大鼠腦干中IL-6含量測定結果：如表2所示，與正常組相比，模型組腦干IL-6含量升高，有顯著性差異(P<0.05)；與模型組比較安定組、赫依穴組、頂會穴組和黑白際穴組腦干IL-6含量降低，有顯著性差異(P<0.05)。

表2 蒙醫灸療法對各組大鼠腦干中IL-6的影響

注：與正常組比較，◆P<0.05；與模型組比較，●P<0.05

3 討論

蒙醫理論認為人體體素相搏導致無法正常入睡稱失眠，屬于赫依病范疇。蒙醫灸療法具有通絡、行氣、活血，抑制赫依病之功效。蒙醫“赫依三穴”[7]是指赫依穴、頂會穴、黑白際穴。赫依穴：位于第七頸椎棘突與第一胸椎棘突間隙窩中；頂會穴：兩耳角直上連線中點，頭頂正中心；黑白際穴：位于兩乳正中對直的心窩處。《甘露四部》中記載[8]“赫依偏盛引起的疾病以頂會穴、赫依穴、黑白際穴灸之…。”

白細胞介素-1(IL-1β)和白細胞介素-6(IL-6)是多功能細胞因子，研究表明夜間睡眠剝奪后第二d血液中IL-6含量增多[9]，Sint等發現IL-6產生總量因睡眠減少而增加，因睡眠狀況好轉而降低[10]。人睡眠剝奪后腦脊液IL-1β含量增加。說明IL-1、IL-6參與睡眠-覺醒周期，通過調節內源性的IL-1β和IL-6釋放，調控睡眠穩態的作用。本研究發現，施灸頂會、赫依、黑白際穴治療7d，與正常組相比，模型組大鼠腦干內IL-1β和IL-6含量升高，有顯著性差異(P<0.05)；與模型組比較，安定組大鼠腦干內IL-1β和IL-6的含量降低，有顯著性差異(P<0.05)；與模型組相比，赫依穴組、頂會穴組和黑白際穴組大鼠腦干內IL-1β含量均無顯著性差異(P>0.05)，但頂會穴組和黑白際穴組有降低趨勢；赫依穴組、頂會穴組和黑白際穴組大鼠腦干內IL-6含量降低，有顯著性差異(P<0.05)。PCPA造模后，SD大鼠IL-1β、IL-6含量升高，明顯高于正常組大鼠，表明IL-1β、IL-6有促進睡眠作用，動物睡眠剝奪后，IL-1β、IL-6含量反饋性升高，施灸“赫依三穴”后SD大鼠睡眠得以改善，治療組大鼠IL-6含量接近正常組水平，而IL-1β水平則頂會穴組、黑白際穴組有降低趨勢，因此實驗說明，施灸“赫依三穴”治療失眠機制可能與影響腦內細胞因子IL-1β、IL-6有關。

[1]高玉峰，乎寶力格. 蒙醫灸療對睡眠紊亂模型大鼠戊巴比妥鈉睡眠時間的影響[J].中國民族醫藥雜志，2015,8(8):61～62.

[2]高玉峰. 施灸赫依三穴對失眠模型大鼠鎮靜催眠作用機理研究[J].中國民族醫藥雜志，2016,12(12):67～68.

[3]Fukada Y,Okano T.Circadian clock system in the Pineal gland[J].MolNeurobiol,2002,25(1):19～30.

[4] 王卓慧,劉婧,郭保君. 針刺補瀉蹺脈對失眠大鼠5-HT , NE及IL-1β含量的影響[J].中華中醫藥雜志,2017,32(3): 1321～1323.

[5]雷箴,賈興元,王國忠.依達拉奉對氧驚厥小鼠腦組織白細胞介素-1β和白細胞介素-10含量的影響[J].中國工業醫學雜志,2015,28(2):118～119.

[6]郭永明,梁憲如. 針刺對局灶性腦缺血大鼠缺血腦組織及血清IL-6的影響[J].天津中醫藥,2010,27(6):469～470.

[7]蒙醫學編輯委員會.中國醫學百科全書(蒙醫學)[M].上海科學技術出版社,1993,12:31.

[8]伊希巴拉珠爾.甘露四部[M].呼和浩特:內蒙古人民出版社,1998,97,192.

[9]代國儀,馬國強,王曉娟.免疫網絡與OSAHS的相關研究進展[J].中國誤診學雜志,2008:8(18):4297-4299.

[10]鄭利星,楊明會.神經遞質在睡眠-覺醒周期中的作用[J].軍醫進修學院學報，2009,30(2):244～246.