苗藥野棉花不同部位多糖含量比較△

李 香 李曉艷 許義紅 孫曉惠 劉 杰 嚴 銳 田 敏

(黔南民族醫學高等專科學校，貴州 都勻 558003)

野棉花為毛茛科銀蓮花屬植物打破碗花花的根(Anemone hupehensis Lem.)或全草，多年生草本植物，苗藥野棉花又稱米花棍。主要含白頭翁素、多糖等成分，由于采集方便、療效顯著，在貴州黔南苗族聚集區被廣泛用于腳氣腫痛、風濕骨痛、跌打損傷、癰疽腫毒、蜈蚣咬傷等癥候的治療[1]，通過查閱相關文獻資料，其多糖具有一定生物活性，不同藥用部位多糖比較未見相關報道。本實驗測其不同部位多糖含量，為其擴大藥用資源研究提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：Cary100型雙光束紫外可見分光光度計(北京安捷倫公司)；AE240型電子天平(瑞士METTLER)；SG-4050C型數顯水浴鍋(上海碩光公司)；100g手搖式高速中藥粉碎機(DTT-100)；HS10260D型超聲清洗機。

1.2 藥材：野棉花采自貴州省都勻市，經黔南民族醫學高等專科學校魏學軍教授鑒定為毛茛科銀蓮花屬植物打破碗花花(Anemone hupehensis Lem.)全草。藥材采集后干燥粉碎過篩，備用。

1.3 試劑與試藥：葡萄糖對照品(天津市化學試劑供銷公司)；濃硫酸(濟南試劑總廠)；苯酚(上海試劑三廠)；所用試劑均為分析純；實驗用水為蒸餾水等。

2 方法與結果

2.1 葡萄糖對照品溶液的制備：精密稱取干燥于1050C至恒重的葡萄糖對照品10.02mg，于105℃干燥至恒重，置50mL容量瓶中，加蒸餾水溶解稀釋定容至刻度，搖勻，得濃度為0.2004mg·mL-1的葡萄糖對照品溶液。

2.2 苯酚試劑的配制[2]：稱取苯酚約200g，加0.2g碳酸氫鈉和0.3g鋁片，進行蒸餾，收集182℃處餾分。稱取蒸餾苯酚10g，加蒸餾水溶解并稀釋至250mL，搖勻置棕色瓶中避光保存。

2.3 供試品溶液的制備[3-6]：精密稱量0.9218g野棉花根粉末置具塞錐形瓶中，精密加入1mol·L-1NaOH溶液50mL，精密稱定，進行超聲45min，取出放冷稱重，加入同濃度NaOH溶液補足損失的重量，搖勻濾過，精密吸取續濾液10mL置50mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋定容至刻度，即得試樣溶液。

2.4 測定波長的選擇： 取0.2004mg·mL-1的葡萄糖對照品溶液0.1 mL，置具塞試管中，加入4%的苯酚溶液1.0mL，5.0mL濃硫酸，搖勻放置40 min。蒸餾水同法操作空白對照，在400-700nm波長范圍內掃描，取樣品液0.2mL，同法操作。樣品與葡萄糖對照品在488nm波長處有最大吸收，因此選取488nm為該實驗多糖含量測定波長。

2.5 標準曲線的繪制： 取已配置好的葡萄糖對照品溶液10 mL置容量瓶中，加蒸餾水稀釋制得0.1mg·mL-1葡萄糖對照品溶液。精密吸取該對照品溶液0.1，0．2，0．3，0．4，0．5，0．6，0．7，0．8mL，分別置具塞試管中，加入4%的苯酚溶液1mL，濃硫酸5mL，加蒸餾水補足至8mL刻度，搖勻，放置40min。取蒸餾水2.0mL同法操作空白對照，測定吸光值，以吸光度A為縱坐標，濃度C為橫坐標(μg·mL-1)，繪制標準曲線。回歸方程：A=0.0745C+0.0109，R=0.9996。表明在濃度1.430～10.00μg·mL-1范圍內濃度與吸光度有良好線性關系。

2.6 精密度實驗：精密量取0.5mL樣品溶液，置具塞試管中，加入4%的苯酚溶液1mL，濃硫酸5mL，加蒸餾水補至8mL刻度，搖勻放置40min后測定吸光值，重復測定6次，RSD=1.01%，結果表明精密度良好。

2.7 重復性實驗：精密稱取干燥至恒重野棉花根樣品6份，每份約0.9g，同2.3項下制備供試液，精密吸取該供試液0.5mL，置具塞試管中，加入4%的苯酚溶液1mL，濃硫酸5mL，加蒸餾水補至8mL刻度，搖勻放置40min，測定吸光值。RSD=1.91%,表明儀器重復性較好。

結果見表1。

表1 重復性實驗(n=6)

2.8 穩定性實驗：精密稱取干燥至恒重的樣品約0.9g，1份，同2.7項操作，在20，40， 60，80，100,120min，分別測定其吸光度。RSD=0. 28%，結果表明供試液顯色后2h內穩定性良好。

2.9 加樣回收率實驗[6]：精密稱定干燥至恒重的樣品約約0.45g，9份，分為3組，依2.3項法制備供試液,分別加入80%，100%，120%葡萄糖對照品溶液，按2.7項操作，依次測定吸光度，計算回收率，結果見表2。

表2 加樣回收率實驗(n=9)

注：回收率%=(測得總量-樣品含量)/加樣量×100%。

實驗結果表明試驗方法可行。

2.10 樣品不同部位多糖含量測定：取干燥至恒重的野棉花不同部位即根、莖、葉約0.9g，每個部位各3份，按“2.3”方法制備供試品溶液，按2.7項操作，依次測定吸光度，結果見表3。

表3 不同部位野棉花多糖的含量測定結果(n=9)

3 結果

野棉花為毛茛科銀蓮花屬植物打破碗花花的根(Anemone hupehensis Lem.)或全草，苗藥亦稱米花棍。主要含白頭翁素、多糖等成分，由于其采集方便、療效顯著，在貴州苗族聚集區被廣泛應用，通過比較不同藥用部位多糖含量，為其下一步藥效學研究及藥用資源擴大應用提供依據。本實驗采用超聲技術提取野棉花多糖，測定野棉花不同藥用部位藥多糖的含量。結果表明野棉花根多糖含量最高，3個不同藥用部位多糖的含量有差異。

[1]邱德文，杜江.中華本草苗藥卷[M].貴陽：貴州科技出版社，2005,12：503-504.

[2] 舒曉燕,劉慧,梁靜,等.川附子粗多糖提取工藝的研究[J].中藥材,2006,29(12): 1349-1352.

[3] 林麗清,黃麗英,鐘添華, 等.金線蓮多糖的分離純化與含量測定[J].中國醫院藥學雜志, 2007,27(8): 1037-1039.

[4] 張玉萌.紫草多糖的研究概況[J].中國新醫藥,2004,3(4):54-55.

[5] 李香，彭小冰，汪云偉.黔產不同產地馬齒莧多糖的含量測定[J].黔南民族醫專學報, 2013,26(1):6-8.

[6] 李香，彭小冰，汪云偉,等.黔產馬齒莧多糖的含量測定[J].貴州科學,2012,30(5):27-29.