DC-CIK生物療法聯合索拉非尼對原發性肝癌患者療效及免疫功能的影響

劉永 闞積香 郭仕峰

·論著·

DC-CIK生物療法聯合索拉非尼對原發性肝癌患者療效及免疫功能的影響

劉永 闞積香 郭仕峰

DC-CIK；索拉非尼；原發性肝癌；免疫功能

原發性肝癌(primarylivercancer，PLC)是我國常見的腫瘤之一，由多種因素引起，具有病程短、起病隱匿等特點，而且患者常伴有不同程度的免疫缺陷，病死率高，嚴重威脅人類的生命安全。原發性肝癌治療主要是手術法，但該法預后差、復發率高，導致治療效果不理想。生物治療是繼手術、放療、化療之后的一種新型腫瘤治療方法，具有殺瘤譜廣、殺瘤活性高等優勢，已成為研究的熱點。目前多采用細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokineinducedkiuer，CIK)、體內回輸突狀細胞(dendriticcell，DC)等生物治療腫瘤。索拉非尼是一種多靶點靶向治療腫瘤的新藥，為VEGF及其受體的多激酶抑制劑，能夠抑制腫瘤的復發和轉移，提高肝癌的遠期治療效果[1,2]。研究發現索拉非尼聯合多種治療手段的綜合治療模式可提高晚期肝癌的療效[3]，但關于DC-CIK生物療法聯合索拉非尼治療原發性肝癌的研究較少。本研究旨在探討DC-CIK生物療法聯合索拉非尼對原發性肝癌患者的治療效果及免疫功能的影響，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月至2016年4月到本院腫瘤科就診的原發性肝癌患者78例，隨機分為對照組和觀察組，每組39例。所有患者經影像學確診為原發性肝癌(參照《原發性肝癌診療規范(2011年版)》)。對照組男27例，女12例；年齡35～76歲，平均年齡(49.6±8.7)歲；合并乙型肝炎后肝硬化28例，合并門靜脈高壓11例；患者肝功能分級均為Child-A級，甲胎蛋白(AFP)<5μg/ml者2例，<400μg/ml者24例，≥400μg/ml者13例。觀察組包括男30例，女9例；年齡31～80歲，平均年齡(51.9±9.6)歲。合并乙型肝炎后肝硬化27例，合并門靜脈高壓12例；患者肝功能分級均為Child-A級，甲胎蛋白(AFP)<5μg/ml者4例，<400μg/ml者25例，≥400μg/ml者10例。2組患者年齡、性別比、病程等一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①診斷為中晚期原發性肝癌；②能持續口服索拉非尼3個月以上；③未使用激素類藥物和免疫抑制劑。

1.2.2 排除標準：①轉移性肝癌；②嚴重功能腎衰竭、糖尿病等。

1.3 方法

1.3.1 CIK細胞的分離培養：根據磁共振顯像結果確定腫瘤的大小，采集患者外周血，抗凝處理后，血細胞分離機(CS3000)分離外周血單個核細胞后，再加入淋巴細胞分層液，梯度離心，PBS緩沖液洗3次，進一步分離純化外周血單個核細胞(純度≥90%，數量1×108～3×108)。血細胞計數后，調整細胞濃度為1×106/ml，接種到含有1 000 U/ml rh-干擾素的無血清培養液中，第2天向培養液中分別加入50 μg/ml CD3單抗、100 U/ml IL-2，每隔2～3 d換1次培養液，培養20 d。每周測2次白細胞增殖率，當陽性細胞達到85%進行細胞治療。

1.3.2 DC細胞的分離培養：將獲得的外周血單核細胞移至培養皿中培養2 h，使其貼壁，后棄去上清，加入無血清的培養基，加入100 ng/ml巨噬細胞集落刺激因子、500 U/ml IL-4，37℃、5%CO2培養，第5天加入500 U/ml rh-干擾素，第7天收集懸浮的DC，無菌檢驗合格后，進行細胞治療。

1.4 治療方法 對照組：采用索拉非尼(德國Bayer Pharma AG，注冊證號H20130137)治療，飯前口服0.4 g/次，2次/d，4周1個療程，連續治療3個療程。觀察組：在對照組基礎上，間隔2周以上回輸CIK細胞和DC細胞，每周2～3次，每次回輸CIK細胞1×1010～1×1012個，DC細胞1×109～1×1010個，4周1個療程，連續治療3個療程。

2 結果

2.1 DC-CIK細胞培養結果 DC-CIK細胞1～3 d增殖較慢，處于潛伏期，4～6 d增殖較快，處于對數生長期，8 d以后細胞數目趨于穩定。DC-CIK細胞比單純CIK細胞的增殖速度更快，培養至第25天時DC-CIK細胞的增殖倍數為1 300，CIK細胞的增殖倍數為150。

2.2 臨床治療效果 觀察組患者治療后腫瘤總緩解率(48.71%)顯著高于對照組(23.08%)，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者病情緩解情況 n=39,例(%)

注: 與對照組比較，*P<0.05

免疫指標治療前對照組觀察組治療后對照組觀察組2組治療后比較t值P值CD+342.13±7.6941.65±7.5244.56±8.2470.96±9.63*#13.0080.000CD+422.87±3.1323.14±3.1125.61±3.7836.58±8.03*#7.7190.000CD+821.25±2.1620.47±2.3623.41±2.3429.23±3.12*#9.3190.000CD+4/CD+81.08±0.121.04±0.151.05±0.131.24±0.16*#5.7560.000CD+165.41±0.395.76±0.456.14±0.7110.24±1.13*#14.5060.000CD+5623.68±2.3424.02±3.2726.10±3.8930.25±5.41*#3.8890.000

注: 與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，#P<0.05

2.4 不良反應 觀察組患者發生低熱5例，發生高熱3例，持續時間3～6h，自行消退，發生皮疹10例，發生惡心、嘔吐4例。對照組患者發生低熱3例，發生高熱2例，自行消退，發生皮疹7例，發生惡心、嘔吐5例，2組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

3 討論

PLC作為一種常見惡性腫瘤，其發病率呈逐年上升趨勢，已成為嚴重危害人體健康的惡性疾病。由于PLC發病較隱匿，患者初期并無任何不適感，且相關癥狀易被忽視，而當患者覺察機體有不適癥狀時，多數已

進入中晚期，中晚期肝癌患者免疫功能受抑制，其免疫調節機制紊亂，并以疼痛、乏力、腹水、食欲不振等為臨床主要表現[5]。同時，免疫應答及啟動應答方面存在一定缺陷，而肝切除等手術治療并不能達到滿意效果，隨著免疫分子與細胞生物學技術的不斷成熟，PLC治療方法也從單一手術或藥物治療逐漸發展為多模式聯合治療，DC與CIK生物療法聯合索拉非尼等抗腫瘤藥物為PLC患者提供了新的腫瘤治療途徑，該療法可通過生物技術與生物反應調節劑，向腫瘤患者體內回輸免疫細胞，增強其自身免疫功能，并最終達到抑制及殺死腫瘤細胞的目的[6]。DC-CIK療法通過向腫瘤患者體內回輸免疫細胞，使機體的免疫力增強，從而達到治療腫瘤的目的。DC是人體內抗原呈遞細胞，通過識別、處理抗原來激活機體的免疫系統。CIK細胞是腫瘤殺傷細胞，主要通過自身細胞毒性及細胞因子來發揮抗腫瘤作用。DC-CIK共同培養時，能增強CIK細胞的增殖能力、殺傷活性以及DK的功能，從而提高治療效果[6]。索拉非尼與傳統治療腫瘤的不同，主要作用是控制藥物生長，可以實現患者的“帶瘤生存”[7]。

綜上所述，采用DC-CIK生物療法聯合索拉非尼治療，能提高FLC患者的免疫功能，療效顯著且不良反應可以控制，但由于本研究所選病例數量及療效觀察時間有限，存在一定不足，對于如何建立更規范有效的DC-CIK生物療法以及與索拉非尼治療相匹配的方案，以降低FLC患者治療費用，進一步保證患者的治療效果并提高生活質量，仍是臨床亟需解決的問題。

1 張惠潔, 郭衛東, 屈振杰.TACE聯合索拉菲尼治療原發性肝癌的療效觀察及血清VEGF、bFGF水平的變化.現代腫瘤醫學,2015,23:3164-3168.

2 秦一卓. 索拉非尼結構類似物1122-37的抗癌活性及機制研究.山東大學學報,2014,49:115-117.

3 夏鋒, 孫振凱,馬寬生,等. 基于索拉非尼的聯合治療對晚期肝癌的療效觀察.臨床腫瘤學雜志,2010,15:365-367.

4LepageC,CapocacciaR,HacklM,etal.Survivalinpatientswithprimarylivercancer,gallbladderandextrahepaticbiliarytractcancerandpancreaticcancerinEurope1999-2007:ResultsofEUROCARE-5..EuropeanJournalofCancer,2015,51:2169-2178.

5 李建旺, 彭大為, 黃春珍,等. 自體CIK細胞及DC細胞聯合索拉非尼治療晚期肝癌的臨床觀察.實用癌癥雜志,2011,26:459-461.

6 艾麗梅, 宋盈盈, 蘇榮英.DC-CIK細胞體外抗白血病K562細胞的免疫效應.中國生物制品學雜志,2011,24:1168-1170.

7 孫恒, 韓文杰. 索拉非尼對原發性肝癌患者療效的研究分析.實用癌癥雜志,2014,29: 442-444.

8LeungT,YamJ,ChanLK,etal.Deletedinlivercancer2suppressescellgrowthviatheregulationoftheRaf-1/ERK1/2/p70S6Ksignallingpathway.LiverInternational,2010,30:1315-1323.

9BeljanskiV,KnaakC,YanZ,etal.Combinedanticancereffectsofsphingosinekinaseinhibitorsandsorafenib.InvestigationalNewDrugs,2011,29:1132-42.

10 覃英容, 林源, 莫顯偉,等. 原發性肝癌患者術后細胞免疫功能狀況與復發的相關性.中國癌癥防治雜志,2013,5:235-238.

11 艾月琴,趙華,江龍委,等. 自體DC-CIK細胞聯合索拉非尼治療晚期腎癌的臨床效果.中國醫藥導報,2015,12:157-160.

12 邱輝,張俊萍,韓亞萍,等.DC-CIK與CIK體外抗腫瘤作用的實驗研究.當代醫學,2013,19:21-23.

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.08.033

276400 山東省沂水縣人民醫院(劉永、闞積香)；山東省沂水中心醫院(郭仕峰)

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1002-7386(2017)08-1234-03

2016-10-29)