肺癌組織環指蛋白RNF38的表達及其臨床意義

李繼軍， 金 淳， 熊 點， 蔣家好， 丁建勇*

1.復旦大學附屬中山醫院胸外科，上海 200032 2.新疆維吾爾自治區喀什第二人民醫院心胸外科，喀什 844000 3.南昌大學第二附屬醫院心胸外科，南昌 330006

·短篇論著·

肺癌組織環指蛋白RNF38的表達及其臨床意義

李繼軍1,2， 金 淳1， 熊 點3， 蔣家好1， 丁建勇1*

1.復旦大學附屬中山醫院胸外科，上海 200032 2.新疆維吾爾自治區喀什第二人民醫院心胸外科，喀什 844000 3.南昌大學第二附屬醫院心胸外科，南昌 330006

目的： 探討肺癌組織環指蛋白RNF38的表達及其與肺癌臨床病理特征及預后的關系。方法： 采用組織芯片檢測208例肺癌組織中RNF38蛋白表達，分析其與肺癌患者臨床病理特征及預后的關系。結果： 肺癌組織RNF38表達高于癌旁正常肺組織。不同腫瘤大小 (P=0.000 2)、不同腫瘤分期(P=0.011)、有無淋巴結轉移(P=0.000 04)及不同腫瘤類型(P=0.030)患者肺癌組織RNF38蛋白表達差異有統計學意義。RNF38高表達預示肺癌患者總生存率低。單因素分析顯示RNF38表達與肺癌患者預后相關。結論： RNF38高表達與肺癌的惡性表型及不良預后相關。

RNF38；肺癌；預后

我國肺癌的發病率和死亡率均呈上升態勢[1-2]。因其起病隱匿，癥狀和其他呼吸道疾病類似，且大部分患者無自覺癥狀者，一般確診已是晚期[3-4]。肺癌的侵襲轉移與復發是患者死亡的主要原因。因此，尋求有效的抗肺癌轉移與復發治療措施，對改善肺癌患者的預后具有重要意義[5]。

研究證實泛素化系統的異常與腫瘤發生、神經退行性疾病、免疫及炎癥反應等緊密相關[6]。作為

E3-泛素連接酶，RNF38通過蛋白-蛋白、蛋白-DNA相互作用，參與調節多種生理功能[7]。其功能異常與腫瘤的發生、細胞信號轉導及凋亡等相關[7]。既往研究[8]表明，抑癌基因p53是RNF38的泛素化底物，RNF38參與了p53的亞細胞定位。因此，本研究擬在肺癌組織中檢測RNF38表達，明確其與肺癌患者臨床病理特征以及預后的相關性，為肺癌的臨床診治提供參考。

1 材料與方法

1.1 組織標本的獲取 選取2005年1月至2005年12月，在復旦大學附屬中山醫院胸外科行肺癌切除術的208例患者的肺癌組織石蠟標本。組織芯片的制作由上海芯超生物科技有限公司完成。肺癌的診斷標準按照世界衛生組織(WHO)標準，所有病例均有完整隨訪資料。隨訪截止至2010年3月。本研究通過醫院倫理委員會審核批準。

1.2 主要試劑 兔抗人RNF38多克隆抗體購自Proteintech公司；SP試劑盒、DAB試劑、二甲苯、3%過氧化氫、中性樹膠、蘇木精溶液、無水乙醇與1%鹽酸乙醇購自上海翊圣生物科技有限公司。

1.3 免疫組化染色及結果判定 組織芯片60℃高溫烤片2 h；二甲苯脫蠟、梯度乙醇后水化及磷酸緩沖液洗片3次；芯片完全浸入pH 6.0的檸檬酸液中，放入高壓鍋抗原修復，磷酸緩沖液洗片3次；3%過氧化氫室溫孵育除去內源性過氧化物酶活性，磷酸緩沖液洗片；室溫BSA封閉30 min；甩去血清，滴加抗RNF38抗體 (1∶200)，4℃冰箱孵育24 h；磷酸緩沖液浸洗，滴加辣根過氧化物酶二抗，室溫孵育60 min，磷酸緩沖液浸洗；滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡觀察，控制顯色時間，自來水浸洗中止顯色，蘇木精復染30 s，水洗返藍20 min；梯度乙醇脫水，二甲苯透明；中性樹膠封片。結果判定標準：RNF38的判定以胞質與核中出現棕黃色顆粒為顯色，使用IPP檢驗來判斷RNF38的高低表達。

1.4 統計學處理 采用SPSS 19.0統計軟件，組間差異比較采用方差檢驗。繪制Kaplan-Meier總體生存曲線，Cox模型分析預后因素。檢驗水準(α)為0.05。

2 結 果

2.1 肺癌組織中RNF38的表達 結果(圖 1)表明：RNF38蛋白陽性染色主要定位于癌細胞胞質與核；肺癌組織RNF38表達高于相應癌旁正常肺組織；208例肺癌組織中RNF38陽性表達占48.8% (102/208)。

2.2 RNF38蛋白表達與肺癌患者臨床病理特征的關系 結果(表 1)表明：不同病理類型(P= 0.030)、不同腫瘤分級(P= 0.011)、有無淋巴結轉移(P= 0.000 04)、不同腫瘤大小 (P= 0.000 2)的肺癌組織RNF38蛋白表達水平差異有統計學意義。不同年齡 (P=0.553)、不同性別 (P= 0.278)、不同吸煙情況 (P=1.000)、不同腫瘤分化(P=0.403)情況下肺癌組織RNF38蛋白表達水平差異無統計學意義。

圖1 H-E及免疫組化染色測定肺癌組織RNF38的表達

變量病例數RNF38表達低表達高表達P年齡0.553 <60歲1025250 ≥60歲1065452性別0.278 男1487375 女603327吸煙情況1.000 有844341 無1246361病理類型0.030 鱗狀細胞癌853451 腺癌1106545 其他1376腫瘤分級0.011 Ⅰ-Ⅱ1448262 Ⅲ-Ⅳ642440淋巴結轉移0.00004 有903159 無1187543腫瘤直徑0.0002 <3cm694821 ≥3cm1395881分化0.403 高中分化1156253 低分化934449

2.3 RNF38水平與肺癌患者預后的關系 208例患者隨訪過程中共有109例死于肺癌的轉移與復發，總體5年生存率為47.6%，RNF38高表達患者(n=102)相比RNF38低表達患者(n=106)總生存率較低(P=0.012，圖 2)。

2.4 Cox模型分析 單因素分析(表2)表明影響肺癌生存預后的因素包括：腫瘤大小(P=9.76×10-6)、淋巴結轉移(P=3.47×10-9)、腫瘤分期(P=4.65×10-8)、腫瘤分化(P=0.050)、RNF38表達(P=0.013)。

多因素分析結果(表2)表明：腫瘤大小(P=0.002)、淋巴結轉移(P=0.002)、腫瘤分期(P=0.046)是影響總生存率的獨立預后因素。

圖2 Kaplan-Meier分析RNF38表達與預后關系

變 量單因素分析HR95%CIP多因素分析HR95%CIP性別(男vs女)0.7890.526-1.1830.251吸煙情況(無vs有)0.7790.543-1.1180.175腫瘤大小(≥3cmvs<3cm)2.7551.758-4.3189.76×10-62.1131.322-3.3770.002淋巴結轉移(有vs無)3.0422.103-4.3993.47×10-92.0611.302-3.2620.002腫瘤分期(Ⅲ-ⅣvsⅠ-Ⅱ)2.7711.922-3.9934.65×10-81.5621.009-2.4180.046腫瘤分化(中/高分化vs低分化)1.4311.000-2.0490.0501.1930.826-1.7220.346RNF38表達(低vs高)1.5791.101-2.2650.0131.0140.692-1.4860.944

3 討 論

目前，肺癌是嚴重威脅人類生命健康[4]。2014年，我國腫瘤登記中心數據顯示，全國男性肺癌的發病率在所有惡性腫瘤中占據第一位；女性肺癌的發病率在所有惡性腫瘤中也位居第二。肺癌防治仍然是目前亟待解決的重大難題[1-2]。肺癌的轉移及復發是根治性切除手術治療失敗的主要原因，然而當前對其轉移及復發的分子機制尚不完全清楚[5]。因此，進一步闡釋肺癌侵襲與轉移的精確分子機制，并為肺癌轉移的早期診斷、患者的預后判斷及有效治療提供新的靶點對提高患者生存率及生活質量具有重要意義。

本研究通過免疫組織化學檢測發現，E3-泛素連接酶RNF38在部分肺癌組織中高表達，且高表達RNF38與肺癌惡性表型正相關；重要的是其高表達患者預后較低表達患者差。盡管，影響肺癌患者預后的因素較多，但結合RNF38高表達與肺癌腫瘤大小、淋巴結轉移與腫瘤分期相關，提示RNF38與肺癌侵襲轉移相關，值得進一步研究。

多種環指蛋白家族參與了腫瘤的發生發展[6,9]。本研究發現RNF38表達于細胞質與核，且在腫瘤中表達明顯高于癌旁正常組織，提示RNF38是肺癌預后潛在的預測指標。

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[本文編輯] 曉 路

Expression of RNF38 in lung cancer and its clinical significance

LI Ji-jun1,2, JIN Chun1, XIONG Dian3, JIANG Jia-hao1, DING Jian-yong1*

1.Department of Chest Surgery, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200032, China 2.Department of Cardiothoracic Surgery, Second People's Hospital of Kashgar, Kashgar 844000, the Xinjiang Uygur Autonomous Region, China 3.Department of Cardiothoracic Surgery, Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi, China

Objective： To investigate the expression of RNF38 in lung cancer, and its correlationship with clinicopathologic feature and prognosis.Methods： Tissue microarray was used to detect the level of RNF38 in 208 lung cancer patients, then its correlationship with clinicopathologic feature and prognosis was analyzed.Results： RNF38 expression was higher in lung cancer tissues compared with the corresponding adjacent normal lung tissues.High level of RNF38 was related significantly to tumor size (P=0.0002), tumor stage (P=0.011), lymph node metastasis (P=0.000 04) and histological type (P=0.030).High level of RNF38 indicates low overall survival rate.Single factor analysis showed that RNF38 expression was related to lung cancer patients’ prognosis.Conclusions： The high level of RNF38 could be a new marker in predicting the prognosis of lung cancer.

RNF38;lung cancer; prognosis

2017-01-19 [接受日期] 2017-02-15

國家自然科學基金(81201834,81502502).Supported by National Natural Science Foundation of China (81201834， 81502502).

李繼軍，碩士，副主任醫師.E-mail: 1256239505@qq.com

*通信作者(Corresponding author).Tel: 021-64041990, E-mail: ding.jianyong@zs-hospital.sh.cn

10.12025/j.issn.1008-6358.2017.20170053

R 734.2

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