幽門螺桿菌糞便檢測法在上消化道出血患者中的應用價值

孫 娟， 成宏偉

蚌埠醫學院附屬泰興市人民醫院消化科，泰興 225400

·論 著·

幽門螺桿菌糞便檢測法在上消化道出血患者中的應用價值

孫 娟， 成宏偉*

蚌埠醫學院附屬泰興市人民醫院消化科，泰興 225400

目的： 探討糞便幽門螺桿菌抗原(Helicobacter pylori stool antigen, HpSA)檢測方法在上消化道出血患者中的臨床應用價值。方法： 選擇2015年4月至2016年5月在蚌埠醫學院附屬泰興市人民醫院就診的因消化道癥狀接受胃鏡檢查的101例患者，對其進行胃黏膜快速尿素酶法(rapid urea testse, RUT)、糞便HpSA及胃黏膜幽門螺桿菌(Hp)PCR檢測。以RUT檢測結果為診斷Hp感染的“金標準”，將HpSA、PCR檢測結果與其進行對比分析。結果： 以RUT作為Hp感染的診斷金標準， HpSA檢測的敏感度為86.67%(52/60)、特異度為95.12%(39/41)、陽性預測值為96.30%(52/54)、陰性預測值為82.98%(39/47)、準確度為90.10%(91/101)；PCR檢測的敏感度為80.00%(48/60)、特異度為97.56%(40/41)、陽性預測值為97.96%(48/49)、陰性預測值為76.92%(40/52)、準確度為87.13%(88/101)。HpSA檢測與RUT一致性比較，Kappa=0.80；PCR與RUT一致性比較，Kappa=0.74。結論： HpSA檢測方法與金標準具有較高的一致性，上消化道出血時檢測結果可靠，是非侵入性診斷Hp感染的可靠方法。

幽門螺桿菌；糞便；上消化道出血

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)是一種革蘭陰性、微需氧的細菌，與胃十二指腸疾病密切相關，是消化性潰瘍、胃癌的重要致病因素。2015年《幽門螺桿菌胃炎京都全球共識》[1]指出，根除Hp可以降低胃癌發生、潰瘍復發的危險。Hp檢查方法較多，其中，糞便幽門螺桿菌抗原(Helicobacter pylori stool antigen, HpSA)檢測方法不需要特殊的設備、無創、操作簡單、快速、準確度高、便宜，能較好地反映患者Hp感染狀況[2-7]，但其應用于上消化道出血的研究較少。本研究旨在探討HpSA在上消化道出血患者中的臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年4月至2016 年5月在蚌埠醫學院附屬泰興市人民醫院就診的上消化道出血且接受胃鏡檢查的患者。采集胃竇區黏膜標本，同時采集糞便標本，分別進行快速尿素酶試驗(rapid urease test, RUT)、糞便HpSA、胃黏膜組織PCR檢測。根據《第四次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告》[6]，以RUT陽性為Hp現癥感染標準。排除嚴重腹瀉、4周內有服用鉍劑、質子泵抑制劑、抗生素等對研究結果有影響者。共納入病例101例，其中男性73例，女性28例；年齡15～91歲，平均(61.99±18.22)歲。患者臨床表現為嘔血或黑便，經內鏡檢查明確診斷胃潰瘍20例，十二指腸潰瘍26例，食管潰瘍3例，殘胃潰瘍3例，復合性潰瘍3例，糜爛性胃炎21例，食管炎3例，食管胃底靜脈曲張破裂出血5例，食管癌2例，胃癌11例，胃間質瘤4例。

1.2 方 法

1.2.1 RUT檢查 胃鏡檢查時，采集胃竇部組織標本，嚴格按照RUT幽門螺桿菌檢測卡(珠海市麗拓發展有限公司)說明書執行。將標本放于圓形反應膜中央，然后蓋上透明塑膠卡，常溫靜置1、3 min時觀察記錄結果：反應膜上胃黏膜組織邊緣靜置1 min內由黃色變為櫻紅色，為強陽性，提示存在Hp感染；反應膜上胃黏膜組織邊緣靜置3 min時才由黃色到櫻紅色，為弱陽性，結果不可靠，需復查；反應膜不變色則判讀為陰性，提示不存在Hp感染。

1.2.2 HpSA檢測 患者于就診第1 d留取糞便，嚴格按照HpSA檢測試劑盒(膠體金法，廣州萬孚生物技術股份有限公司)說明書執行。在新鮮糞便樣本的6個不同部位取樣(5～10 mg)。將附有糞便樣本的取樣棒放入樣本收集管中，擰緊紫色蓋子，反復晃動樣本收集管10次。打開樣本收集管的紫色蓋子，取出取樣棒，用吸管吸取呈液體的糞便樣本，滴2滴于樣本收集管中。取出錫箔袋中的HpSA檢測試劑卡，平放，將已預處理的樣本溶液滴2～3滴于試卡加樣孔內，15 min時判讀結果，30 min后判讀無效。結果判斷：陽性(+)：在檢測區(T)及質控區(C)內出現1條紅色反應線，表示樣本含有Hp抗原；陰性(-)：僅質控區(C)出現1條紅色反應線，表示樣本中不含Hp抗原。

1.2.3 多聚酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)檢測 胃鏡采取胃黏膜組織后，嚴格按照Hp PCR熒光檢測試劑盒說明書(中山大學達安基因股份有限公司)進行PCR檢測。結果判斷：Ct值<28，判樣品中Hp陽性；Ct值≥30，判樣品中Hp陰性；28≤Ct值<30，需復檢。

1.3 統計學處理 采用SPSS 19.0進行統計分析。計數資料以率表示，采用χ2檢驗。檢驗水準(α)為0.05。采用Kappa方法進行一致性檢驗，Kappa>0.75為一致性好，0.75≤Kappa≤0.4為一致性較好，Kappa<0.4為一致性差。

2 結 果

2.1 HpSA與PCR檢測結果 結果(表1)表明：101例患者中，RUT檢出Hp陽性60例。HpSA與RUT一致性好，Kappa=0.80；HpSA與RUT檢測結果差異無統計學意義。PCR檢測與RUT一致性較好，Kappa=0.74；PCR與RUT的檢測結果差異無統計學意義。

表1 HpSA、PCR結果與RUT結果比較

2.2 HpSA診斷價值的受試者工作特征曲線(ROC)分析 以ROC曲線分析HpSA的診斷價值，HpSA的ROC曲線下面積(area under the curve ，AUC)為0.909±0.032(圖1)，診斷價值較高。

3 討 論

Hp的檢測方法主要分為侵入性和非侵入性兩大類。其中，侵入性檢查包括RUT、組織學檢測、細菌培養、PCR等，具有創傷性，增加患者痛苦，人群接受度不高，不適用于兒童、妊娠期婦女及不能耐受胃鏡檢查者。隨著13C/14C尿素呼氣試驗(13C/14C-urea breath test ,13C/14C-UBT)、HpSA檢測等無創性檢查技術水平的提高，第四次馬斯特里赫特(Maastricht)幽門螺桿菌共識會議提出了“Hp檢測與治療”策略，即采用無創性手段檢測消化不良患者胃內是否存在Hp，并對感染Hp的患者進行治療[7]。然而，血清學試驗不能確定Hp現癥感染和觀察根除治療后的療效，而且，13C-UBT價格昂貴，技術、設備要求高，需要專門的技術人員操作；而14C-UBT具有放射性，大規模應用可對環境造成污染，且不宜用于孕婦、兒童及胃出血患者。HpSA檢測為非侵入性檢測方法。由于Hp定居于胃黏膜上皮細胞表面，隨著胃黏膜上皮細胞快速脫落、更新，Hp通過胃腸道從糞便排出。因此，通過糞便檢測Hp，既克服了胃內Hp灶性分布及取材局限帶來的假陰性結果，能反映全胃情況，又避免了胃黏膜活檢造成的創傷。中華醫學會消化病學分會《第四次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告》[6]指出，HpSA單克隆抗體檢測陽性者可視為現癥感染。Schulz等[8]研究發現，在對Hp流行地區進行Hp篩查和Hp感染患者治療監測時，HpSA檢測是最具成本效益的方法。

圖1 HpSA診斷價值的ROC曲線

Zhou等[4]的Meta分析顯示，HpSA的敏感度、特異度、陽性釋然比(LR+)、陰性釋然比(LR-)分別為92.1%、94.1%、17.01、0.085。在Hp根除治療前后，HpSA檢測的準確度均較高[5,9]。Kodama等[10]認為，HpSA檢測的敏感度和UBT相當，在服用質子泵抑制劑期間也可靠。Lee等[11]研究顯示，HpSA和13C-UBT的一致性和Kappa值分別為91.7%和0.78。本研究中，在上消化道出血患者中，HpSA的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值和準確度分別為86.67%、95.12%、96.30%、82.98%、90.10%，均較高，與文獻[2-3,11]報道一致；HpSA與RUT一致性好，Kappa=0.80，適用于臨床廣泛應用。

對于臨床上一部分Hp感染的出血患者，用傳統方法可能不能診斷Hp感染。Kim等[12]報道，在出血性潰瘍住院的患者中，只有不到一半的人接受Hp檢查，少于1/3接受更準確的Hp檢查。出血性潰瘍患者接受Hp檢測，可以改善預后。本研究中以ROC曲線分析HpSA的診斷價值，AUC為0.909±0.032，說明在上消化道出血患者中，HpSA 的診斷價值較高。

HpSA檢測具有診斷結果準確、操作簡單、價廉、人群接受度高等優點，但易受到以下因素的干擾：(1)受試者留取糞便不合格會影響檢測結果；(2)糞便樣本過稀，可能導致假陰性結果；(3)不同觀察者之間可能存在結果判讀差異。因此，我們認為，進行HpSA檢測時，需注意以下幾點：(1)試紙應4℃冷藏，在檢測前于室溫下靜置30 min，接收標本后立刻檢測；若無法立刻檢測，需將標本-20℃冷凍保存。(2)糞便較硬時，應與樣本稀釋液充分混勻，并避免挑取過多糞便，以免影響標本順利滲濾；糞便較稀時，用試劑盒配置的吸管吸取一定量的標本(吸取過少可能導致假陰性結果，吸取過多可能導致結果無效)。(3)避免使用放置時間過長、長菌、發霉或反復凍融的標本，以及腹瀉患者的水樣便。(4)應由經過專業訓練的同一檢測人員進行結果判斷。(5)指導受試者正確留取糞便。

PCR可檢出細菌培養、組織學不能發現的少量細菌，靈敏地檢出Hp數量減少但未根治的患者，Saez等[13]發現，實時PCR在上消化道出血患者中檢測Hp的敏感度(91.5%)高于非出血患者(68.4%)。本研究中Hp PCR診斷的敏感度、特異度、準確度分別為80.00%、97.56%、87.13%，特異度和準確度均較高，但準確度低于HpSA。PCR與RUT一致性比較，Kappa=0.74，雖然一致性較好，但低于HpSA。PCR受取材部位的影響，可導致假陰性，且需要特殊的實驗設備，由專業的技術人員操作，過程復雜，對標本的要求高，故僅適用于科研，而不適用于臨床大規模應用。

綜上所述，HpSA用于臨床診斷Hp感染，具有較高的敏感度、特異度和準確度，與RUT具有較高的一致性，且患者依從性好、費用低、可行性強，可作為Hp現癥感染診斷和根除治療后的療效觀察指標[14]。HpSA檢測在上消化道出血時結果可靠，適用于有上消化道出血但不愿或不能配合胃鏡檢查的患者，特別是兒童、孕婦和老年患者。

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[本文編輯] 姬靜芳

Application value ofHelicobacterpyloristool test in patients with upper gastrointestinal bleeding

SUN Juan, CHENG Hong-wei*

Department of Gastroenterology, Taixing People’s Hospital Affiliated to Bengbu Medical College, Taixing 225400, Jiangsu, China

Objective： To explore the clinical application value ofHelicobacterpyloristool antigen (HpSA) test in patients with upper gastrointestinal bleeding.Methods： A total of 101 patients with gastrointestinal symptoms who underwent gastroscopy at the Taixing People’s Hospital Affiliated to Bengbu Medical College from April 2015 to May 2016 were selected.Gastric mucosa rapid urease test (RUT), HpSA test and gastric mucosa Hp PCR detection were used.The RUT result was used as the "gold standard" for diagnosing Hp infection, and the results of HpSA test and PCR detection were compared with it.Results： With RUT as the gold standard for the diagnosis of Hp infection, the sensitivity of HpSA was 86.67% (52/60), the specificity was 95.12% (39/41), the positive predictive value was 96.30% (52/54), the negative predictive value was 82.98% (39/47), and the accuracy was 90.10% (91/101).The sensitivity of PCR detection was 80% (48/60), the specificity was 97.56% (40/41), the positive predictive value was 97.96% (48/49), the negative predictive value was 76.92% (40/52), and the accuracy was 87.13% (88/101).The consistency of HpSA test and PCR detection with RUT were compared, and the values of Kappa were 0.80 and 0.74, respectively.Conclusions： HpSA test is highly consistency with the gold standard and reliable in detecting the upper gastrointestinal hemorrhage, so it is an ideal method for non-invasive diagnosis of Hp infection.

helicobacter pylori; stool; upper gastrointestinal bleeding

2016-09-02 [接受日期] 2016-10-16

蚌埠醫學院2015年度研究生科研創新計劃資助項目(Byycx1506).Supported by Graduate Students’ Research Program of Bengbu Medical College in 2015 (Byycx1506).

孫 娟, 碩士生，住院醫師.E-mail：sjxf179@163.com

*通信作者(Corresponding author).Tel: 0523-87656001, E-mail: 908713217@qq.com

10.12025/j.issn.1008-6358.2017.20160854

R 573.2

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