經動脈化療栓塞聯合高強度聚焦超聲治療高齡原發性肝癌的臨床研究

譚煒 朱錦德 郭敬強 李卓鍇 姜川

浙江省麗水市中心醫院肝膽胰外科 (浙江 麗水, 323000)

原發性肝癌是臨床上最常見的消化系統惡性腫瘤，其發病率和死亡率有逐年升高的趨勢[1,2]。原發性肝癌起病隱匿、早期癥狀不明顯，不易于臨床診斷；同時肝癌的進展迅速，給臨床診斷和治療帶來較大的難度，不利于患者的預后[3,4]。動脈化療栓塞術是臨床治療肝癌的常用方法，對原發性肝癌患者的臨床治療具有較好的療效。高強度聚焦超聲治療也是臨床上治療惡性腫瘤的常用手段。ERK信號轉導通路是細胞外信號向細胞內轉導的重要通路，也是肝癌等惡性腫瘤發生、發展、轉移及凋亡過程的重要調控通路[5,6]。本研究對經動脈化療栓塞聯合高強度聚焦超聲治療高齡原發性肝癌患者的臨床效果進行研究，為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 200例患者為本院2012年1月至2016年12月期間診治的高齡原發性肝癌患者，均符合衛生部頒布的《原發性肝癌診療規范》(2011年版)中原發性肝癌的診斷標準。200例患者中男111例，女89例，年齡63～75歲，平均(68.5±7.5)歲。以本院同期200例健康體檢者為對照組。排除標準：肝癌介入治療禁忌患者；原發性肝癌終末期患者；已行外科切除術者；嚴重的心腎功能異常者。兩組患者在一般臨床資料方面比較差異無統計學意義。所有患者均知情并簽署知情同意書，研究經院倫理委員會批準。

1.2 分組與治療方法 200例高齡原發性肝癌患者分為兩組：A組(100例)采用動脈化療栓塞術治療，B組(100例)采用動脈化療栓塞聯合高強度聚焦超聲治療。

1.3 觀察指標 觀察兩組患者治療前及治療不同時間段(6個月、12個月、24個月)的Child-Pugh評分與生存率。評分標準為：肝臟功能損害程度輕，肝儲備能力較好：5～6分；肝臟功能損害程度較重，肝儲備能力一般：7～9分；肝臟儲備能力較差：≥10分。并分析患者治療前后血清中ERK通路蛋白表達變化及炎癥因子水平變化。

1.4 試驗試劑 P53檢測試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司；Caspase6、Caspase9檢測試劑盒購自Abcam公司；Laminin5γ2、E-cadherin檢測試劑盒購自R&D公司；β-catenin檢測試劑盒購自Sigma公司；Ras、Raf蛋白檢測試劑盒購自Omega公司；MEK及ERK1/2蛋白檢測試劑盒購自Lab Sciences公司；HIFα和COX2蛋白檢測試劑盒購自Amresco公司；基質金屬蛋白酶MMP2及MMP9蛋白檢測試劑盒購自天根生物工程有限公司；TIMP1及TIMP2蛋白檢測試劑盒購自碧云天生物工程有限公司；C-myc檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。所有操作均按照試劑盒說明書進行。

2 結果

2.1 兩組患者治療前后Child-Pugh評分及生存率情況 見表1。

表1 兩組患者治療前后Child-Pugh評分及生存率情況

與A組同時間點比較，#P<0.05

2.2 兩組患者治療前后細胞凋亡相關蛋白表達情況 見表2。

表2 兩組患者治療前后細胞凋亡相關蛋白表達比較

與本組治療前比較，*P<0.05；與A組治療前后比較，#P<0.05

2.3 兩組患者治療前后Laminin5γ2、E-cadherin及β-catenin蛋白表達情況 見表3。

表3 兩組患者治療前后Laminin5γ2、E-cadherin及β-catenin蛋白表達比較

與本組治療前比較，*P<0.05;與A組治療前后比較，#P<0.05

2.4 兩組患者治療前后Ras及Raf蛋白表達情況 見表4。

表4 兩組患者治療前后Ras及Raf蛋白表達比較

與治療前比較，*P<0.05;與A組治療后比較，#P<0.05

2.5 兩組患者治療前后MEK及ERK1/2蛋白表達情況 見表5。

表5 兩組患者治療前后MEK及ERK1/2蛋白表達比較

與本組治療前比較，*P<0.05

2.6 兩組患者治療前后基質金屬蛋白酶及其抑制劑表達情況 見表6。

表6 兩組患者治療前后基質金屬蛋白酶及其抑制劑表達情況

與本組治療前比較，*P<0.05;與A組治療后比較，#P<0.05

3 討論

原發性肝癌是臨床上消化道系統中的常見惡性腫瘤，且隨著人口老齡化的加劇及飲食習慣的改變，其發病率和死亡率有逐年升高的趨勢。經動脈化療栓塞術是臨床上治療原發性肝癌的首選措施，且已經顯示了較好的優越性。本研究在對經動脈化療栓塞聯合高強度聚焦超聲治療高齡原發性肝癌的臨床效果進行研究時發現，與動脈栓塞治療組患者相比，經動脈化療栓塞聯合高強度聚焦超聲治療高齡原發性肝癌患者后Child-Puge評分明顯降低，且生存率明顯高于動脈栓塞治療組患者(P<0.05)；治療后患者血清中促凋亡蛋白P53、Caspase6、Caspase9、Laminin5γ2、E-cadherin、β-catenin、ERK通路蛋白、HIFα和COX2及基質金屬蛋白酶表達明顯升高，而C-myc表達明顯降低。因此，經動脈化療栓塞聯合高強度聚焦超聲治療高齡原發性肝癌的效果與其抑制患者體內激活的ERK通路有關。

MAPK/ERK信號轉導通路參與了細胞外信號向細胞核轉導的過程，也是惡性腫瘤發生、發展及轉移的主要途徑[7，8]。但是目前尚未見到關于該信號通路在動脈栓塞聯合高強度聚焦超聲治療高齡原發性肝癌的報道。在分析RNAi介導的IGF1R基因沉默對肝癌細胞生長、遷移與侵襲影響的研究中發現,ERK信號轉導通路蛋白表達的被抑制是該手段影響肝癌細胞病理過程的關鍵[9]。在地西他濱聯合丙戊酸鈉促進肝癌細胞凋亡的研究中也證實二者能夠通過抑制ERK通路蛋白Ras、Raf及MEK和ERK1/2蛋白的表達發揮促肝癌細胞凋亡的作用[10]。以往的研究也發現，Ras癌基因能夠誘導肝腫瘤的發生，且此過程中有活性氧的參與[11]，而上皮細胞轉化序列2能夠通過調控細胞內Rho/ERK信號轉導通路促使肝癌早期復發[12]。同時，As2O3聯合AZT對肝癌HepG2細胞遷移和侵襲調節作用也與其抑制細胞內MAPK/ERK通路蛋白有關[13]，且mTOR與ERK是Hep3B細胞cyclin D1表達的協同調控分子[14]。本研究也發現，與A組相比，B組患者MEK及ERK1/2蛋白表達明顯降低，提示激活的ERK通路也與原發性肝癌的發病相關，而B組患者的效果與抑制該通路相關蛋白的過表達相關。

炎癥因子是細胞內最常見的細胞因子，也是腫瘤細胞多種生理和病理學過程的共同通路，且已有的證據顯示頸動脈栓塞治療與調節體內炎癥因子水平有關[15]。在研究肝動脈化療栓塞術聯合射頻消融術治療原發性肝癌的療效時發現栓塞治療的效果與其調控患者血清中炎癥反應因子水平有關[16]，且肝動脈化療栓塞術治療肝癌的療效也主要通過影響血清中炎癥反應因子的水平實現[17]。另外，在分析高強度聚焦超聲治療小鼠皮下瘤效果時發現高強度聚焦超聲的治療效果與其調控血清白細胞介素IL-6和IL-10的表達有關[18]，而益脾養肝方聯合肝動脈化療栓塞術治療原發性肝癌的療效也主要通過影響患者體內炎癥因子水平實現[19]。本研究發現與A組患者相比，B組患者Laminin5γ2、E-cadherin及β-catenin蛋白表達明顯升高，表明動脈化療栓塞聯合高強度聚焦超聲治療高齡原發性肝癌患者的效果也與其調控患者體內炎癥因子水平相關。

因此，經動脈化療栓塞術聯合高強度聚焦超聲治療高齡原發性肝癌患者的效果可能與其抑制患者體內激活的ERK通路有關。

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