兔耳痤瘡角質化模型試驗

盧旭，許光輝，黃亦琦*

（1.福建中醫藥大學 ，福建 福州 360122；2.廈門市醫藥研究所，福建 廈門 361008）

兔耳痤瘡角質化模型試驗

盧旭1,2，許光輝2，黃亦琦2*

（1.福建中醫藥大學 ，福建 福州 360122；2.廈門市醫藥研究所，福建 廈門 361008）

目的采用煤焦油復制兔耳痤瘡模型。方法隨機將9只雄性家兔隨機分為A組、B組、C組。A組耳導管開口處約2cm×2cm范圍涂生理鹽水，B、C組涂煤焦油，連續涂14 d后，判斷模型是否成功。結果A組兔耳薄白，B組、C組的兔耳表面粗糙、增厚，肉眼觀察到不同大小紅斑，局部有小顆粒隆起，毛孔增大，有黑色物質堵塞毛孔。組織切片觀察：A組皮膚組織結構完整，B、C組皮膚組織肥厚、角質化，皮膚組織結構改變。結論煤焦油用玉米油稀釋制備耳痤瘡角質化模型的方法有效。

痤瘡；動物模型；煤焦油；兔耳

痤瘡是好發于毛囊皮脂腺的慢性炎癥性疾病，皮脂分泌過多，堵塞毛孔，促進痤瘡桿菌、金黃葡萄球菌生長，侵害皮膚組織，導致毛囊口角化過度，是本病發病的重要基礎和機制，炎癥、感染是痤瘡的發病因素[1]，自然愈合時間長，嚴重影響患者的生活質量，身心健康。本試驗旨在制備模擬臨床癥狀的痤瘡角質化模型，為后期實驗研究提供基礎。

1 材料與方法

1.1 動 物

新西蘭家兔，普通級，1.8～2.2 kg，雄性，上海斯萊克實驗動物有限責任公司，生產許可證號:SCXK(滬)2012-0002。

1.2 儀器

電子天平ME1002(瑞士梅特勒·托利多公司)；組織脫水機TP1020、顯微鏡DM500、石蠟切片機RM2235、包埋機EG1150H(德國Leica公司)。

1.3 試 劑

煤焦油（Alfa Aesar（China）公司）；玉米油（中國益海嘉里營銷有限公司）；余試劑為分析純。

2 方 法

2.1 實驗分組及造模

隨機將9只雄性家兔隨機分為A組、B組、C組各3只，并編號。A組涂生理鹽水（對照組），B組涂2%煤焦油，C組涂4%煤焦油，用無菌棉簽均勻涂于家兔耳內側面耳導管開口處約2 cm×2 cm 范圍，每天1次，每次0.5 mL，并且用溫水擦拭前次涂藥部位，連續涂14 d，末次涂12 h后，觀察，處死，取材，制作病理切片[2]。

2.2 造模結果評價

表1 煤焦油對兔耳的干預效果（n=6）

圖1 煤焦油對兔耳模型的干預結果

圖2 煤焦油對兔耳皮膚組織影響的病理觀察

使用5 mm打孔器在涂藥部位打孔制備耳片，10%甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色后，每個樣品做連續5個切片，取較完整皮膚結構的切片進行病理組織學觀察分析。

痤瘡模型組織學判定分級標準[3]：按組織學級別為3 級。0級為無痤瘡表現（-）；1級為兔耳表面皮膚發紅，或毛囊漏斗部見少量致密角化物質(+)；2級為毛囊漏斗部見中等致密角化物質，并向皮脂腺延伸(++)；3級為毛囊內有廣泛的角化物質、皮膚凸起、瘢痕(+++)。進行試驗結果評價（表1），B、C組均與A組對照，以觀察痤瘡模型是否復制成功。

3 結 果

涂煤焦油14 d后，A組兔耳柔軟、薄白，毛細血管清晰，兔耳管開口處可見毛孔大小均勻，皮膚組織完整。B組、C組的皮膚表面粗糙、增厚，肉眼觀察到不同大小紅斑，小顆粒隆起，毛孔增大，不同程度角質化，局部有黑色物質堵塞毛孔（圖1）。組織切片觀察：不同程度的顆粒層、棘層肥厚，毛囊口角質化，皮膚組織結構被破壞（圖2）。結果提示兔耳痤瘡角質化模型復制成功，煤焦油用玉米油稀釋制備耳痤瘡角質化模型的方法有效。

4 討 論

雄激素刺激皮脂腺細胞的增生與分泌，雄激素中的睪酮在酶的作用下，與相應受體結合，調控毛囊皮脂腺的活動，使皮脂腺異常角化[4]。皮膚角質化，皮脂分泌過多導致皮脂腺功能異常，局部代謝障礙，細菌滯留、繁殖，產生炎癥。無論是痤瘡毛囊皮脂腺角質形成細胞的過度增生，還是炎性皮損處，皮膚免疫系統都參與[5]。Jugean 等[6]認為痤瘡丙酸桿菌可誘導TLR表達，此機制在痤瘡炎癥反應中可能起到重要作用。昝文華等[7]發現，痤瘡皮損處檢出痤瘡丙酸桿菌，多伴金黃色葡萄球菌。高峰等[8]認為痤瘡是在一定的皮膚環境內多種細菌相互作用的結果。隨著痤瘡實驗研究的深入，該模型的制備也將接近于人類痤瘡發生、發展規律。痤瘡的發病機制、治療手段、藥物開發等方面一直是科研工作熱點，但可提供痤瘡研究的動物模型少，痤瘡模型制備方法也不斷改進。用金黃地鼠的色斑來證實抗雄激素作用；用痤瘡丙酸桿菌液、表皮葡球菌在兔耳、大鼠進行皮下注射，可使動物耳部注射處變厚，但痤瘡丙酸桿菌為厭氧菌，在皮膚組織中存活時間尚未明確；墨西哥狗自發性痤瘡是當前最接近臨床的實驗動物模型，但該模型周期長、成本高，故不利于廣泛開展相關研究。目前最常用的是Kligman模型，該模型的使用已超過半個世紀，1989年美國皮膚病學會已制定了使用規范[9]。

試驗結果證實煤焦油易附著于皮膚，該方法來制備兔耳痤瘡角質化模型有效，時間較短，模型成功率高、經濟，也可用于溶解皮膚角質化相關課題研究。但痤瘡的病機涉及內分泌、菌群感染、飲食習慣、心理素質等方面，都影響痤瘡的發生、發展。該模型僅能模擬痤瘡角質化的皮膚組織學改變：兔耳表皮粗糙、角質化，顆粒層和組織層增厚，毛囊破損，皮膚結構邊緣模糊，但模型的形成時間上有個體差異性，需進一步實驗探索。

[1]蘆源, 田靜, 張慧穎, 等. 消瘡飲對兔耳微痤瘡模型抑制作用及急性毒性實驗研究[J].遼寧中醫藥大學學報, 2014 (01): 28-29.

[2]魯瑾, 曹煜. 姜黃消痤凝膠對兔耳粉刺模型的抗角化作用[J]. 中國皮膚性病學雜志, 2011 (03): 192-195.

[3]趙鴻儒, 趙大華. 中藥消痤霜對兔耳痤瘡實驗模型的干預效果[J]. 中國臨床康復, 2006 (07): 108-109.

[4]張學軍. 皮膚性病學[M]. 5版. 北京:人民衛生出版社, 2002: 144-145.

[5]Kin J. Review of the innate immune response in acne vulgaris: activation of toll-like receptor 2 in acne triggers inflammatory cytokine responses[J]. Dermatology, 2005, 211(3): 193-198.

[6]Jugean S, Teanud I, Knol AC, et al. Induction of tolllike receptors by propionnic bacterium acne [J]. BR J Dermatol, 2005, 153(6): 1105-1113.

[7]昝文華, 孫劍, 李艷紅, 等. 葡萄球菌菌苗治療痤瘡的實驗報告[J]. 中國皮膚性病學雜志, 2000, 14(6): 392-393.

[8]高峰, 胡素泉, 李智華, 等. 176例尋常痤瘡患者馬拉色菌帶菌率的調查分析[J]. 中華皮膚科雜志,2004,37(8): 492.

[9]劉文彬, 梁慶, 王暉, 等. 外用丹參酮乳膏抗痤瘡藥效及機制[J]. 中國實驗方劑學雜志, 2012 (14): 212-216.

Preparation of the Acne Model of Rabbits’ Ear

LU Xu1,2, XU Guanghui2, HUANG Yiqi2*
(1. Fujian University of traditional Chinese medicine in Fuzhou,Fujian Province,360122,China; 2. Medical Research Institute in Xiamen City, Fujian Province,361008,China)

ObjectiveTo reconstruct rabbit ear acne by coal tar.Methods9 male rabbits were randomly divided into group A, group B and group C. A group of ear catheter about 2 cm × 2 cm range of saline, B, C coal tar, continuous coating 14 d, to determine whether the model is successful.ResultsThe rabbit ears were thin and white in group B, group B and group C were rough and thickened. The erythema was observed in the same way. There was a small granule uplift and the pores were enlarged. Tissue biopsy: Group A skin tissue structure integrity, B, C group skin tissue hypertrophy, keratinization, skin tissue structure changes.ConclusionThe method of preparing keratinization model of ear acne with corn oil with corn oil is effective.

Acne; Animal model; the Coal-tar; Rabbits’ Ear

2015年度國家海洋公益性項目（201505032）

盧旭（1990—），男，碩士，主要從事方劑療效客觀化及作用機理研究。

*通訊作者 黃亦琦（1963—），男，主任醫師，主要從事方劑療效客觀化及作用機理研究。