外周血中輔助性T細胞17及相關因子在胃癌患者中的變化及意義

劉愛民

·論著·

外周血中輔助性T細胞17及相關因子在胃癌患者中的變化及意義

劉愛民

目的 觀察外周血中輔助性T細胞17(Th17)及相關因子在胃癌患者中的變化及意義。方法 選擇2015年3月至2016年8月胃癌患者42例(觀察組)，其中早期胃癌(Ⅰ、Ⅱ期)22例，晚期胃癌(Ⅲ、Ⅳ期)20例，并設同期健康體檢者42例(對照組)，應用細胞流式細胞術測定2組血漿Th17細胞，應用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血漿Th17細胞相關因子白細胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-23及IL-17情況，進行組間及觀察組早期胃癌(22例)、晚期胃癌(20例)及黏液癌(12例)、腺癌(24例)、未分化癌(6例)比較。結果 2組IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17水平及Th17細胞表達比較，觀察組高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；早期胃癌患者與晚期胃癌患者IL-1β水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，IL-6、IL-23、IL-17水平及Th17細胞表達比較差異有統計學意義(P<0.05)，晚期胃癌患者高于早期胃癌患者。觀察組黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細胞表達情況比較差異均無統計學意義(P>0.05)。結論Th17及相關因子與胃癌有密切相關性，其檢測結果有助于臨床做出準確判斷。

外周血中輔助性T細胞17；IL-6；IL-23；IL-17；胃癌；臨床應用

胃癌(gastriccancer)是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發病率目前位于第2位，死亡率位于第3位[1,2]，發病率約占全球46.8%[3]，也是我國消化道惡性腫瘤死亡率的首位疾病，全國每年平均死亡率約為16/10萬[4]。胃癌作為全球高發腫瘤，發病率及病死率有逐年上升的趨勢，其發生、發展的機制較為復雜，過程中涉及到多個靶點、多個環節的綜合作用結果[5]。由于胃癌發病的隱匿性和高度轉移性，大多數患者就診時已發展為中晚期[6]。因此，胃癌早期診斷至關重要。本研究為了確定外周血中輔助性T細胞17(Th17)及其相關因子在胃癌發病及不同分期是否有相關性，為臨床治療胃癌提供免疫學依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院腫瘤科2015年3月至2016年8月胃癌患者42例(觀察組)，男20例，女22例；年齡33～66歲，平均年齡(51.23±10.27)歲；臨床分期[7]：早期胃癌(Ⅰ、Ⅱ期)22例，晚期胃癌(Ⅲ、Ⅳ期)20例；黏液癌(印戎細胞癌)12例，腺癌24例，未分化癌6例。排除患有嚴重腎臟、肝臟、心血管、代謝、消化、泌尿、神經或精神系統、自身免疫系統疾病者；經研究者判斷不能進入臨床試驗者；依從性差的患者。并設同期本院體檢中心健康體檢者42例(對照組)，男19例，女23例；年齡32～65歲，平均年齡(50.87±10.13)歲。2組性別比、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 觀察指標及方法

1.2.1 儀器與試劑：CD3PE-Cy5抗體、CD4FITCPE抗體、CD8AFITC抗體、CD25APC抗體、人Treg染色體試劑盒、Foxp3抗體及同型對照IgG2，均購自美國eBioscience公司；佛波酯、離子霉素、布雷菲德菌素A、FIX&PERM試劑盒均購自美國ENZO公司；淋巴細胞分離液(Ficoll-Hypaque)、流式細胞儀分析儀為美國BD公司產品；固定破膜劑購自美國Invitrogen公司；酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒為北京嘉美諾斯生物科技有限公司，酶標儀應用TECANferrdouEvolyzer(瑞士)全自動免疫工作站。

1.2.2 觀察方法：采集觀察組(均為手術治療前者)和對照組清晨空腹狀態下采集外周靜脈血4ml，分為2份，每份2ml，分別加入肝素鈉抗凝管中，其中一份以2 500r/min離心7min，凍存在-80℃低溫冰箱中備檢測。應用ELISA檢測血漿Th17細胞相關因子白細胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-23及IL-17情況。Th17細胞流式細胞術測定：將另外一份2ml靜脈血肝素抗凝分離出單核細胞溶液加入布雷菲得菌素A、離子霉素、佛波酯工作液中，然后將試管放入細胞培養箱中，37℃條件下培養5h，留上層血漿，培養后的培養液分2份，均為100μl，分別置于2個流式管中，即Th17細胞管和同型對照管，并做好標記。在Th17細胞管和同型對照管中均加入推薦量CD3及CD8抗體，室溫避光15min后再采用流式細胞儀進行檢測。

2 結果

2.1 2組IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細胞表達情況比較 2組IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17水平及Th17細胞表達比較差異有統計學意義(P<0.05)，觀察組高于對照組。見表1。

表1 2組IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細胞表達情況比較

組別IL?1β(ng/L)IL?6(ng/L)IL?23(ng/L)IL?17(ng/L)Th17細胞表達(%)觀察組65．9±7．0?188．7±18．7?235．1±17．6?87．1±13．4?3．49±0．41?對照組31．4±6．341．9±10．789．7±8．831．9±8．52．19±0．40

注：與對照組比較，*P<0.05

2.2 觀察組早期胃癌(Ⅰ、Ⅱ期)、晚期胃癌(Ⅲ、Ⅳ期)IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細胞表達情況比較 早期胃癌患者與晚期胃癌患者IL-1β水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，IL-6、IL-23IL-17水平及Th17細胞表達比較差異有統計學意義(P<0.05)，晚期胃癌患者高于早期胃癌患者。見表2。

分期IL?1β(ng/L)IL?6(ng/L)IL?23(ng/L)IL?17(ng/L)Th17細胞表達(%)早期胃癌(n=22)57．1±5．5134．8±17．9?178．7±9．8?58．4±6．9?3．29±0．47?晚期胃癌(n=20)77．9±6．6253．7±15．7286．5±13．8105．7±8．76．41±0．45

注：與對照組比較，*P<0.05

2.3 觀察組黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細胞表達比較 觀察組黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細胞表達情況比較差異均無統計學意義(P>0.05)。見表3。

類別IL?1β(ng/L)IL?6(ng/L)IL?23(ng/L)IL?17(ng/L)Th17細胞表達(%)黏液癌(n=12)68．1±7．6188．7±16．7211．1±11．278．2±7．43．35±0．42腺癌(n=24)70．2±6．8203．4±17．6220．4±12．481．3±9．23．43±0．39未分化癌(n=6)67．7±7．1187．3±16．8208．4±13．077．7±10．33．39±0．43

3 討論

IL-6可促進多種細胞的增殖和分化細胞因子，陳金華等[19]觀察了IL-6在胃癌發生中的作用，結果表明胃癌組織分化程度、淋巴結轉移情況及浸潤深度與IL-6關系密切，有協同趨勢。IL-6是一種自分泌生長因子，與自身靶細胞IL-6R結合，并激活JAK/STAT信號傳導通路?；罨疭tat3，使Survivin表達上調，靶細胞生長甚至過度增殖，凋亡被抑制，從而促進腫瘤形成。

觀察結果表明，Th17細胞在胃癌患者外周血中存在高表達，晚期胃癌患者Th17細胞表達高于早期胃癌患者，均高于健康人群；晚期胃癌患者IL-17水平高于早期胃癌患者，證明了Th17細胞分泌IL-17的主要特征；胃癌患者中黏液癌、腺癌、未分化癌IL-17及Th17細胞表達情況比較差異均無統計學意義(P>0.05)。作為協同誘導Th17細胞的細胞因子IL-1β、IL-6、IL-23，2組IL-1β、IL-6及IL-23比較差異有統計學意義(P<0.05)，觀察組高于對照組；早期胃癌患者與晚期胃癌患者IL-1β水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，IL-6、IL-23比較差異有統計學意義(P<0.05)，晚期胃癌患者高于早期胃癌患者。胃癌患者中黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細胞表達情況比較差異均無統計學意義(P>0.05)。說明Th17及相關因子與胃癌有密切相關性，其檢測結果有助于臨床做出準確判斷，為胃癌免疫治療提供了實驗室依據。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.07.031

056001 河北省邯鄲市中心醫院門診部

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