甲狀腺癌組織中Stat3、Survivin、MMP-13的表達變化及對淋巴結轉移的影響

徐亞東，李華，宋春霞

(1海陽市人民醫院，山東海陽265100;2海陽市婦幼保健計劃生育服務中心)

甲狀腺癌組織中Stat3、Survivin、MMP-13的表達變化及對淋巴結轉移的影響

徐亞東1，李華2，宋春霞1

(1海陽市人民醫院，山東海陽265100;2海陽市婦幼保健計劃生育服務中心)

目的探討信號傳導與轉錄激活因子3(Stat3)、凋亡抑制基因(Survivin)、基質金屬蛋白酶13(MMP-13)在甲狀腺癌患者癌組織中的表達及其對淋巴結轉移的影響。方法選取接受根治術治療的甲狀腺癌患者60例。采集患者甲狀腺癌組織以及癌旁正常組織，以免疫組化法分別檢測Stat3、Survivin、MMP-13的表達，并比較甲狀腺癌有無淋巴結轉移患者Stat3、Survivin、MMP-13表達水平。結果甲狀腺癌組織中Stat3、Survivin 、MMP-13陽性表達率高于癌旁正常組織(P均<0.05)。甲狀腺癌淋巴結轉移患者Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達率均高于無淋巴結轉移者(P均<0.05)。結論甲狀腺癌患者癌組織中Stat3、Survivin、MMP-13表達升高，且可促進淋巴結轉移。

甲狀腺癌；Stat3；Survivin；基質金屬蛋白酶13；淋巴結轉移

甲狀腺癌屬于臨床上最常見的頸部惡性腫瘤[1]。臨床上根據患者分化程度的不同分為乳頭狀癌、濾泡樣癌、鱗癌以及髓樣癌等。其中鱗癌、髓樣癌均屬于高度惡化的癌腫，具有發展迅速、預后差等特點，臨床上常規治療以及放、化療均無顯著效果[2]。有研究報道顯示，甲狀腺癌存在早期侵襲四周組織，以及出現淋巴結轉移等情況的傾向，對患者的預后以及生存期具有不同程度的影響[3]。本文通過研究信號傳導與轉錄激活因子3(Stat3)、凋亡抑制基因(Survivin)、基質金屬蛋白酶13(MMP-13)在經根治術治療的甲狀腺癌患者組織中的表達變化及其對淋巴結轉移的影響，旨在為臨床診治提供新型靶點。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年2月～2017年2月于海陽市人民醫院接受根治術治療的甲狀腺癌患者60例，均經病理檢查確診。納入標準[4]：均經手術病理檢查確診為甲狀腺癌；均行根治術治療；入院前未接受任何抗腫瘤治療；臨床病歷資料完整。其中患者男34例、女26例，年齡22～72(45.4±10.4)歲；病理組織類型：乳頭狀腺癌30例，濾泡狀腺癌18例，髓樣癌7例，鱗癌5例；伴頸部淋巴結轉移38例，無頸部淋巴結轉移22例。術中取患者甲狀腺癌組織60例份，癌旁組織(距癌組織5 cm)60例份。患者均知情并簽署了同意書，且經醫院倫理委員會批準。

1.2 組織Stat3、Survivin、MMP-13表達的檢測 采用免疫組化法。所有組織標本通過10%甲醛固定，予以常規石蠟包埋，而后取4 μm厚連續切片。對組織切片實施常規脫蠟水化，經高溫高壓法給予抗原修復；再滴加一抗置于4 ℃孵育箱內過夜；隨后嚴格按試劑盒內說明書滴加試劑，行DAB顯色；然后行蘇木素復染、脫水、封片，最后在高倍顯微鏡下進行結果評價。將已知陽性標本用于陽性對照，并以PBS代替一抗用于陰性對照。其中兔抗人Stat3多克隆抗體與兔抗人Survivin多克隆抗體均購自武漢博士德公司，兔鼠共用二抗購自北京中山金橋生物技術有限公司。兔抗人MMP-13型多克隆抗體購自北京博奧森生物公司。DAB顯色劑和免疫組化染色有關試劑盒均購自北京中山金橋公司。評價標準[5，6]：切片均選擇雙盲法，并由本院兩名病理科醫師進行獨立閱片。其中Stat3染色陽性信號呈棕黃色或棕色顆粒狀，定位于細胞質與細胞膜；Survivin染色陽性信號棕色或棕褐色顆粒狀，定位于細胞質。MMP-13染色陽性信號呈棕褐色顆粒，定位于細胞質。每張切片隨機選取10個高倍鏡視野，根據染色程度以及陽性細胞占比進行結果判定：其中不著色計為0分，染色強度較差計為1分，染色強度中等計為2分，染色強度較深計為3分；陽性細胞占比<5%計為0分，陽性細胞占比5%～25%計為1分，陽性細胞占比26%～50%計為2分，陽性細胞占比>50%計為3分。兩項得分相乘所得結果即為最終判斷結果。其中0～1分計為陰性，2～3分計為弱陽性，4～6分計為中度陽性，>6分計為強陽性。陽性率=弱陽性占比+中度陽性占比+強陽性占比。

1.3 統計學方法 采用SPSS20.0統計軟件。計數資料以頻次或百分比表示，比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同甲狀腺組織中Stat3、Survivin、MMP-13表達比較 甲狀腺癌組織中Stat3表達陰性、弱陽性、中度陽性、強陽性及陽性表達率分別為13、11、19、17例，78.33%； Survivin表達分別為17、11、21、10例，71.67%；MMP-13表達分別為16、12、20、12例，73.33%；癌旁組織中分別為43、6、7、4例，28.33%；48、6、4、2例，20.00%；54、4、1、1例，10.00%。甲狀腺癌組織中各指標表達陽性率均高于癌旁組織(χ2值分別為30、134、30、303，49.509，P均<0.05。

2.2 甲狀腺癌有無淋巴結轉移患者Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達率比較 甲狀腺癌淋巴轉移患者的Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達率分別為86.84%(33/38)、92.11%(35/38)、89.47%(34/38，無淋巴結轉移患者分別為63.64%(14/22)、36.36%(8/22)、45.45%(10/22)，兩者比較，χ2值分別為4.421、21.321、13.806，P均<0.05。

3 討論

近年，隨著人們生活水平提高以及飲食習慣改變，甲狀腺癌發病率逐年上升。該病具有較高的局部淋巴結轉移率，患者預后較差[7，8]。腫瘤的侵襲轉移通常是多步驟的復雜性過程，可涉及到腫瘤細胞與宿主間的相互作用，常有多種基因及其產物在該過程中起著至關重要作用[9，10]。Stat3信號傳導通路和細胞的增殖、分化與凋亡存在一定相關性，且該通路的持續激活使得細胞異常增殖并向惡性轉化，屬于癌基因之一[11]。Survivin是凋亡抑制基因，具有抑制細胞凋亡以及調節細胞增殖的雙重作用，其不但在細胞凋亡抑制、腫瘤血管形成中發揮著至關重要作用，同時還可在多種腫瘤細胞中表達[12]。MMP-13則是參與細胞外基質Ⅲ型膠原降解的重要酶，其主要是通過破壞腫瘤細胞周邊，從而促進腫瘤細胞浸潤及轉移，與患者的預后密切相關[13，14]。

本研究結果顯示，甲狀腺癌組織中Stat3陽性表達率較癌旁組織高，與張晨蕾等[15，16]的研究報道一致，說明Stat3可能參與了甲狀腺癌的發生、發展過程，可能成為臨床上診斷甲狀腺癌的指標之一。其中激活的Stat3可通過提高部分影響下游生長、凋亡相關基因的表達，進而促進腫瘤的發生、發展；而部分受Stat3調節的下游靶基因可通過與這些相關基因共同調節細胞周期和凋亡。目前，已有學者在胃癌、乳腺癌以及前列腺癌中發現，CyclinD1等蛋白的表達存在異常。筆者認為，通過對Stat3基因表達進行抑制或間接阻斷Stat3的活化，可能有效治療甲狀腺癌，值得臨床進行更深入的研究。此外，甲狀腺癌組織中Survivin陽性表達率也較癌旁組織高，與黃海燕等[17，18]的研究報道一致，表明Survivin在甲狀腺癌的發生、發展過程中可能發揮著重要作用，可能成為臨床上診斷甲狀腺癌的指標之一。另外，甲狀腺癌組織中MMP-13陽性表達率高于癌旁組織，與侯繼院等[19，20]的研究報道相似，提示MMP-13與甲狀腺癌的發生、發展密切相關。本文結果還顯示甲狀腺癌淋巴轉結移患者Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達率均高于無淋巴結轉移患者。提示Stat3、Survivin、MMP-13的表達與甲狀腺癌淋巴結轉移有關，臨床工作中可通過對上述三項指標的表達進行有效抑制，從而達到改善患者預后的目的。

綜上所述，Stat3、Survivin、MMP-13在甲狀腺癌患者癌組織中表達升高，且與淋巴結轉移有關。上述三項指標可能成為甲狀腺癌診斷、治療以及評估預后的新靶點。

[1] Li N, Fu S, Cui MM, Niu Y, et al. Platelet distribution width and serum albumin levels for discrimination of thyroid cancer from benign thyroid nodules[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2017,18(7):1773-1777.

[2] 段睿,劉正人,張浩,等.Survivin siRNA對甲狀腺乳頭狀癌細胞裸鼠移植瘤血管生成的影響[J].海南醫學,2015,26(1):5-6.

[3] 何穎,楊美玉,匡莉,等.超聲檢查聯合基質金屬蛋白酶檢測對甲狀腺癌的診斷價值[J].現代腫瘤醫學,2017,25(2):279-282.

[4] 姚宏,魏正琍,梁曉燕,等.腫瘤轉移抑制基因KISS-1在甲狀腺癌組織中表達和預后的研究[J].中國藥物與臨床,2012,12(11):1408-1411.

[5] 王娟,俞力,范鈺,等.miR-155反義寡核苷酸轉染對甲狀腺癌細胞遷移、侵襲和MMP-13表達的影響[J].江蘇大學學報(醫學版),2013,23(6):526-528.

[6] 汪永旭,蔣偉豐,朱陳宏,等.STAT3和VEGF-C在甲狀腺癌中表達及其與臨床病理特征關系[J].腫瘤學雜志,2013,19(2):118-121.

[7] Jaap K, Campbell R, Dove J, et al. Disparities in the care of differentiated thyroid cancer in the united states: exploring the national cancer database[J]. Am Surg, 2017,83(7):739-746.

[8] 龔龍,許穎,溫颯颯,等.SATB1在甲狀腺癌啟動PI3K/Akt信號通路中的作用研究[J].臨床和實驗醫學雜志,2016,15(14):1352-1355.

[9] 阿布來提·麥麥提艾力,哈德提·別克米托夫,哈力木拉提·木爾提扎,等.甲狀腺乳頭狀癌與基質金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP3)基因啟動子甲基化的關系研究[J].新疆醫科大學學報,2014,22(7):841-845.

[10] 楊傳家,宮建,劉臻,等.乙酰肝素酶及基質金屬蛋白酶-9在甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移中的作用[J].廣東醫學,2014,35(20):3173-3175.

[11] 黃雋,蘇榕.鈣結合蛋白S100A4和信號傳導及轉錄活化因子3在甲狀腺癌及腺瘤組織中表達及其臨床意義[J].中華實驗外科雜志,2015,32(5):1144-1146.

[12] 劉衛國.Survivin、BRAF、Notch1在甲狀腺良惡性腫瘤中的差異表達及其與血清指標的關系[J].海南醫學院學報,2015,21(2):250-252.

[13] 周少飛,苗蕾,毛偉征,等.外周血基質金屬蛋白酶及其抑制劑與甲狀腺癌相關性分析[J].中華腫瘤防治雜志,2013,20(12):942-944.

[14] 劉詠,吳秀葵,黃昕,等.基質金屬蛋白酶-9和骨橋蛋白在甲狀腺癌和腺瘤組織中的表達及其臨床意義[J].中華實驗外科雜志,2015,32(1):151-153.

[15] 張晨蕾,李燕萍,吳靖芳,等.STAT3,pSTAT3與TFF3在甲狀腺乳頭狀癌中的臨床意義[J].現代預防醫學,2016,43(1):182-186.

[16] 王翡,羅大虎,劉雪梅,等.甲狀腺乳頭狀癌組織中STAT3和核因子κB水平增加[J].細胞與分子免疫學雜志,2016,32(10):1386-1389.

[17] 黃海燕,劉細榮,李小虎,等.Survivin蛋白在甲狀腺癌組織中的表達及其臨床意義[J].廣西醫科大學學報,2017,34(5):733-735.

[18] 張丹,馬瑞,林從堯,等.甲狀腺癌組織中Survivin蛋白的表達及其意義的Meta分析[J].醫學綜述,2016,22(10):1973-1977.

[19] 侯繼院,劉興安,單國用,等.S100A4調節MMP-13表達對甲狀腺癌細胞侵襲能力的影響[J].中華腫瘤防治雜志,2015,22(7):514-518.

[20] 蔣福平,陳力,鄒勇德,等.MMP-13在甲狀腺癌中的表達及其臨床意義[J].腫瘤藥學,2013,3(4):271-273.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.45.024

R736.1

B

1002-266X(2017)45-0074-03

山東省優秀中青年科學家科研獎勵基金項目(BS2014SW052)。

2017-09-07)