子宮內膜癌組織中Elf5的表達變化及意義

楊荷，閆洪超

(1徐州醫科大學研究生學院，江蘇徐州221004;2徐州醫科大學附屬醫院)

子宮內膜癌組織中Elf5的表達變化及意義

楊荷1，閆洪超2

(1徐州醫科大學研究生學院，江蘇徐州221004;2徐州醫科大學附屬醫院)

目的探討Elf5在子宮內膜癌組織中的表達情況及其臨床意義。方法選取子宮內膜癌組織84例份、子宮內膜不典型增生組織30例份和正常子宮內膜組織30例份,用免疫組化法檢測Elf5在不同內膜組織中的表達情況，分析其與子宮內膜癌患者各臨床病理指標的相關性；對所有子宮內膜癌患者進行術后隨訪，采用Kaplan-Meier進行生存分析，Cox比例風險回歸模型進行子宮內膜癌多因素分析。結果①子宮內膜癌組織Elf5陽性表達率低于正常子宮內膜組織及不典型增生子宮內膜組織(χ2分別為5.787、1.614，P均<0.05)；②Elf5的表達與FIGO分期、病理分級、病理類型、淋巴結轉移和肌層浸潤深度有關(P均<0.05)；③Kaplan-Meier生存分析顯示，Elf5陰性表達患者的平均生存時間短于陽性表達患者(P<0.05)；④Cox回歸分析顯示FIGO分期、病理分級、肌層浸潤深度、淋巴結轉移及Elf5與子宮內膜癌患者預后有關(P均<0.05)，其中 Elf5是子宮內膜癌患者預后的獨立危險因素(P<0.05)。結論子宮內膜癌組織中 Elf5表達降低，其水平降低與子宮內膜癌發生發展及預后相關。

子宮內膜癌；抑癌基因；Elf5基因

子宮內膜癌是最常見的婦科惡性腫瘤[1]。流行病學調查顯示有1.6%的子宮內膜癌患者年齡在20～34歲，6.1%在35～44歲[1]。雖然早期子宮內膜癌接受手術治療和輔助治療后有較好的預后,但由于缺乏有效的早期診斷方法,許多患者發現時已錯過了最佳治療時機。多種因素影響著子宮內膜癌的治療效果,如臨床因素(手術-病理分期、肌層浸潤深度、輔助治療等)以及生物因素(類固醇受體、生長因子、癌基因、抑癌基因等)[2]。近年來篩查子宮內膜癌的生物學指標及基因治療逐漸成為研究熱點。Elf5又稱ESE2，屬于能調節細胞增殖、分化凋亡的Ets轉錄因子家族，具有上皮特異性，在胎盤、肺支氣管、乳腺中起到重要調節作用[3～5]。Chakrabarti等[6]研究表明，在正常乳腺中，Elf5有潛在的抑癌基因作用。本課題組的前期研究發現,卵巢上皮癌組織中Elf5 mRNA表達降低，其缺失影響卵巢上皮性癌的發生發展[7～9]。然而在與乳腺癌、卵巢癌相類似都存在一定程度激素依賴性的子宮內膜癌中Elf5的作用卻未得到充分揭示，本研究旨在探討Elf5在子宮內膜癌中的表達及臨床意義，為子宮內膜癌的診斷治療及評估預后提供新的靶點和思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 標本均來自2010年1月～2014年12月徐州醫科大學附屬醫院婦科行手術治療的患者在病理科存檔的組織蠟塊。本研究通過醫院倫理委員會批準，均取得患者知情同意。標本中子宮內膜癌組織84例份(內膜癌組),患者年齡38～70歲、平均54.61歲。其中手術-病理分期(FIGO，2009)：Ⅰ期 54例，Ⅱ期10例，Ⅲ+Ⅳ期20例；肌層浸潤深度：≤1/2 52例, >1/2 32例；淋巴結轉移：有 41例，無 26例(共67例行淋巴清掃術)；病理類型：子宮內膜樣腺癌 68例；非子宮內膜樣腺癌16例；子宮內膜腺癌病理分級：G1級50例，G2級8例，G3級10例；月經：有 15例，無 69例。納入標準：子宮內膜癌患者臨床、病理資料完整，均進行術后隨訪，主要包括門診、電話隨訪。患者接受手術的日期為隨訪起點，2017年6月31日為隨訪截止日期。排除標準：除外合并其他系統惡性腫瘤、來自于生殖系統其他器官腫瘤的轉移癌(包括原發性雙癌)及首次治療為化療、放療或內分泌治療。選取同期存檔的因功血行手術治療且經病理證實為不典型增生的子宮內膜組織蠟塊標本30例份(不典型增生組)，患者年齡40～74歲、平均45.93歲。選取同期存檔的因子宮肌瘤行手術治療后經病理證實為正常子宮內膜組織的蠟塊標本30例份(正常組)，患者年齡37～51歲、平均49.73歲。

1.2 組織中Elf5蛋白表達的檢測 按照試驗分組，所有標本經4%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續切片。烤片后浸入二甲苯、梯度乙醇脫蠟至水。3% H2O2室溫孵育10 min，檸檬酸高壓抗原修復。滴加Elf5抗體，4 ℃孵育過夜，加入超敏兔兩分法檢測試劑盒，37 ℃孵育30 min， DAB顯色。復染、常規脫水、透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察染色結果。Elf5抗體(bs-14564R )購自北京博奧森生物技術有限公司，超敏兔兩分法檢測試劑盒(PV-9001)及DAB試劑盒(ZLI9018)購自北京中衫金橋公司。 由2名經驗豐富的副高職稱醫師分別閱片。采用半定量法，隨機選取10個高倍視野，每個高倍視野觀察100個細胞，按每個高倍視野陽性細胞數的百分比計數：陽性細胞<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。胞核按著色強弱計分:無著色0分，淡黃色1分,黃色2分，棕黃色3分。兩種計分方法的乘積作為總評分：0分計為陰性，1～4分計為弱陽性(+)，5～8分計為中等強度陽性(++)，9分以上計為強陽性(+++)。+～+++均計為陽性。總陽性率=(弱陽性+中度強度陽性+強陽性例數)/總例數。

1.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。Elf5在不同子宮內膜組織中的表達及其與臨床病理參數間的關系采用χ2檢驗或Fisher′s確切概率法；應用Kaplan-Meier進行生存分析；應用Log-rank檢驗生存率組間差異性；應用Cox比例風險回歸模型分析進行單因素、多因素分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同子宮內膜組織中Elf5的表達比較 Elf5主要在細胞核中表達，在細胞質也有少量表達，呈棕黃色顆粒。在正常組、不典型增生組、內膜癌組中，Elf5陽性表達率分別為93.33%(28/30)、 83.33%(25/30)、 69.05%(58/84)。內膜癌組Elf5陽性表達率低于正常組及不典型增生組(χ2分別為5.787、1.614，P均<0.05)。

2.2 子宮內膜癌組織中Elf5表達與患者臨床病理參數的關系 Elf5表達與FIGO分期、病理分級、淋巴結轉移、肌層浸潤、病理類型有關(χ2分別為47.757、25.831、25.831、51.414、11.118，P均<0.05)。見表1。

2.3 Elf5表達與子宮內膜癌患者預后的關系 84例子宮內膜癌患者術后進行長期隨訪，隨訪時間6～67個月，失訪18例，死亡11例，隨訪率78.57%。Elf5陰性表達患者平均生存期 66.766個月，Elf5陽性表達患者平均生存期42.842個月。Elf5陽性表達患者總生存期長(χ2=8.508，P=0.004)，見圖1。

表1 子宮內膜癌組織中Elf5表達與臨床病理參數的關系

注：*84例子宮內膜癌患者中共67例行淋巴結活檢或清掃術;*68例子宮內膜腺癌患者行病理分級。

圖1 Elf5陽性和陰性子宮內膜癌患者生存曲線

2.4 子宮內膜癌患者預后相關因素 Cox單因素分析顯示：年齡(χ2=0.190，P=0.663)、病理類型(χ2=0.870，P=0.351)、月經有無(χ2=0.001，P=0.975)與預后無關，而FIGO分期(χ2=6.619，P=0.010)、肌層浸潤深度(χ2=4.337，P=0.037)、淋巴結轉移(χ2=4.788，P=0.029)、病理分級(χ2=4.225，P=0.040)、Elf5(χ2=6.706，P=0.010)與預后相關。Cox多因素分析顯示：將FIGO分期、肌層浸潤深度、淋巴結轉移、病理分級及Elf5納入Cox模型進行多因素分析，最終篩選結果顯示Elf5是影響子宮內膜癌患者預后的獨立因素(χ2=4.424，P=0.035，HR=0.226，95%CI：0.056～0.904)。

3 討論

Elf5是Ets轉錄家族成員之一，Ets家族在細胞的發育、分化、增殖及凋亡等活動中起到非常重要的調節作用。Elf5位于人11號染色體短臂13～15區，具有上皮特異性，在胎盤、肺支氣管、乳腺、腎等器官中均有表達[3]。Lee等[3]在人類乳腺癌組織和細胞系中觀察到Elf5表達缺失。Yan等[7]研究表明，Elf5 mRNA在卵巢上皮性癌及交界性卵巢上皮性腫瘤中的表達均明顯低于良性卵巢上皮性腫瘤及正常卵巢組織,從而推測其可能為一個潛在的抑癌基因。本研究發現，子宮內膜癌組織與正常子宮內膜組織中Elf5陽性表達率的差異有統計學意義。提示Elf5表達減少或缺失有可能促進了子宮內膜癌的發生,子宮內膜癌中Elf5可能發揮抑癌作用。

本實驗發現，子宮內膜癌組織Elf5陽性表達率隨著FIGO分期、病理分級、肌層浸潤深度增加以及淋巴結轉移進展呈下降趨勢，而與年齡、是否絕經無關。由此表明Elf5表達的變化可能與腫瘤發展相關。Colas等[10]研究表明，子宮內膜癌發生肌層浸潤的前提是上皮性腫瘤細胞經歷不同程度的上皮間質轉化(EMT)。EMT能通過改變上皮細胞向間充質/干細胞轉化的狀態從而影響細胞黏附、細胞極性和細胞遷移。Zhou等[11]的研究表明，在腫瘤細胞中EMT及其逆向程序被激活，使腫瘤細胞能夠獲得更高級別的侵襲性以及復發有關的細胞特征。本課題組前期研究發現，Elf5可能通過抑制MMP-2和MMP-9的表達來抑制卵巢癌細胞生長、侵襲及轉移[8]。Elf5在子宮內膜癌中可能具有相同的作用，但具體機制仍需要進一步研究。

Elf5表達與激素有密切關系。在乳腺中催乳素和孕酮能夠促進Elf5表達，在懷孕期間促進胚前體細胞發育成雌激素受體α和孕激素受體，從而減少乳汁分泌。Ⅰ型內膜癌即雌激素依賴型內膜癌，均為子宮內膜樣腺癌，其發生與無孕激素對抗的條件下雌激素長期作用有關。多數研究報告顯示雌激素受體α從正常子宮內膜組織到G1～G3級表達逐漸減少，雌激素受體β(ERβ)在絕經后子宮內膜和G3級的內膜癌的胞質中顯著表達，ERβ可能參與雌激素的非基因組效應。本研究結果顯示，在子宮內膜樣腺癌中Elf5陽性表達率高于其他病理類型(如漿液性癌、鱗狀細胞癌等)。

子宮內膜癌患者預后相關的影響因素較多，無一致結論。張英蘭等[12]采用單因素生存分析顯示，年齡、絕經、陰道出血、病理類型、組織學分級、手術病理分期、肌層浸潤程度、淋巴結轉移、腹腔細胞學陽性及術后輔助治療對子宮內膜癌的預后有影響。本研究結果顯示,手術病理分期、病理分級、肌層浸潤深度、淋巴結轉移、Elf5是子宮內膜癌預后的影響因素，Elf5為影響子宮內膜癌的獨立因素。提示Elf5可能可作為一種理想的判斷子宮內膜癌預后的生物學指標。

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閆洪超(E-mail:1015058194@qq.com)

2017-09-19)