HNP 1-3在新生兒敗血癥診斷中的價(jià)值

朱銀燕 方妍彤 王曉芳 華春珍

HNP 1-3在新生兒敗血癥診斷中的價(jià)值

朱銀燕 方妍彤 王曉芳 華春珍

目的 探討人中性粒細(xì)胞多肽1-3（HNP 1-3）在新生兒敗血癥診斷中的價(jià)值。方法 新生兒敗血癥患兒105例，在入院初期（急性期）及恢復(fù)期（有效抗生素治療10d左右）行外周血血漿HNP 1-3和超敏C-反應(yīng)蛋白（hs-CRP）測(cè)定，取同期出生的新生兒30例作為對(duì)照組，一次性采血測(cè)定HNP 1-3和hs-CRP。結(jié)果 新生兒敗血癥急性期組血漿HNP1-3、hs-CRP水平顯著高于恢復(fù)期組和對(duì)照組（P＜0.01），新生兒敗血癥急性期組血漿HNP1-3水平與hs-CRP水平呈中度正相關(guān)關(guān)系（r=0.450，P＜0.05）。結(jié)論 新生兒敗血癥患兒外周血漿HNP 1-3水平明顯高于健康新生兒，與hs-CRP呈正相關(guān)，HNP 1-3對(duì)新生兒敗血癥早期診斷有一定的臨床價(jià)值。

新生兒 敗血癥 HNP 1-3 hs-CRP

新生兒敗血癥是新生兒期最常見(jiàn)的疾病之一，尤其以早產(chǎn)兒、低體重兒和早期新生兒更為常見(jiàn)。新生兒敗血癥發(fā)病隱匿，以及臨床癥狀不典型性，早期診治是有效治療的前提。血培養(yǎng)是新生兒敗血癥診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但陽(yáng)性率低、培養(yǎng)費(fèi)時(shí)又滯后，不利于早期診斷。人中性粒細(xì)胞多肽1-3（HNP 1-3）是中性粒細(xì)胞內(nèi)嗜天青顆粒中的主要成分，起直接殺菌作用，而生理情況血漿中濃度較低，但當(dāng)急性感染時(shí)可以向細(xì)胞外分泌量大幅度提高［1］。本文通過(guò)觀察新生兒敗血癥HNP 1-3的變化，并與超敏C-反應(yīng)蛋白（hs-CRP）進(jìn)行比較分析，為臨床早期診斷新生兒敗血癥提供依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2013年6月至2014年9月在杭州師范大學(xué)附屬醫(yī)院因敗血癥入院治療的患兒105例。其中男55例，女50例；胎齡37～42周；體重2250～4000g，入院時(shí)日齡2～11d。根據(jù)患兒血培養(yǎng)結(jié)果和臨床表現(xiàn)診斷新生兒敗血癥［2］，入選者均排除自身免疫性疾病和血液系統(tǒng)疾病，所有入選者入院前均未接受抗感染治療。另選擇同期在本院婦產(chǎn)科出生的健康新生兒30例作為對(duì)照組，其中男18例，女12例；胎齡37～42周；體重2250～4000g，入院時(shí)日齡2～11d。各組新生兒性別、胎齡、體重、日齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 材料和試劑 HNP1-3試劑盒由荷蘭HycultBiotch公司提供；酶標(biāo)儀為美國(guó)Molecular Devices公司產(chǎn)品；hs-CRP檢測(cè)采用美國(guó)BECKMAN公司的全自動(dòng)免疫分析儀及配套試劑。

1.3 檢測(cè)方法 新生兒敗血癥患兒在入院初及恢復(fù)期抽取全血標(biāo)本各1ml，以EDTA抗凝，靜置15min后4℃低溫低速離心，分離血漿200μl并分裝2管，置-80℃冰箱保存待用。將-80℃保存的血漿標(biāo)本室溫復(fù)融并混勻，以ELISA法測(cè)定HNP1-3；以免疫比濁法測(cè)定hs-CRP，在抗生素有效治療第10天左右的恢復(fù)期，再次同上測(cè)定血漿HNP1-3和hs-CRP。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件。對(duì)不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，采用非參數(shù)檢驗(yàn)，以中位數(shù)與四分位數(shù)M（P25，P75）表示。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，變量間的相關(guān)關(guān)系采用Pearson法作相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 新生兒敗血癥急性期組與對(duì)照組及恢復(fù)期組血漿HNP1-3、hs-CRP比較 見(jiàn)表1。

表1 各組HNP1-3和hs-CRP水平比較［M（P25，P75）］

2.2 急性期組外周血血漿HNP1-3水平與hs-CRP水平相關(guān)關(guān)系 急性期外周血血漿HNP1-3水平與hs-CRP水平呈中度正相關(guān)關(guān)系（r=0.450，P＜0.05）。

3 討論

人HNP 1-3主要存在于中性粒細(xì)胞的嗜天青顆粒中，細(xì)胞內(nèi)的HNP 1-3是人體天然免疫的重要組分，直接發(fā)揮抗多種細(xì)菌、病毒、真菌等病原體感染，其抗感染作用強(qiáng)弱與胞內(nèi)HNP 1-3濃度正相關(guān)［3］。機(jī)體在正常情況下血漿中HNP 1-3含量甚微，但當(dāng)急性感染時(shí)其含量大幅度增加，并可導(dǎo)致機(jī)體組織、細(xì)胞損傷。HNP 1-3作為一類抗菌肽，可殺傷多種病原微生物，大部分為細(xì)菌感染［4-5］。由于HNP 1-3主要從中性粒細(xì)胞中釋放，標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)分離血漿和白細(xì)胞，如果操作不當(dāng)，導(dǎo)致白細(xì)胞破壞，都有可能導(dǎo)致血漿HNP 1-3水平明顯升高，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此采集標(biāo)本后經(jīng)EDTA抗凝，應(yīng)及時(shí)冰浴靜置和低溫離心，減少破壞白細(xì)胞的目的。國(guó)外研究報(bào)道顯示細(xì)菌性腦膜炎和新生兒敗血癥患者血漿HNP 1-3水平明顯高于健康對(duì)照組［1］，Ihi等學(xué)者研究也發(fā)現(xiàn)感染性疾病患者的血漿HNP 1-3水平明顯高于健康對(duì)照組［6］。本資料結(jié)果顯示，新生兒敗血癥急性期組血漿HNP 1-3水平明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明HNP 1-3與新生兒敗血癥有一定關(guān)系，提示HNP 1-3參與了機(jī)體的抗感染作用。有研究報(bào)道顯示HNP 1-3可通過(guò)與抗原結(jié)合，抑制病原菌在黏膜上皮細(xì)胞粘附增值，增強(qiáng)病原抗原的免疫原性，促進(jìn)抗原遞呈細(xì)胞的遞呈加工而發(fā)揮抗感染作用。本資料中新生兒敗血癥恢復(fù)期組HNP 1-3水平較急性期組明顯下降，但仍稍高于對(duì)照組，表明隨著病情的穩(wěn)定好轉(zhuǎn)，新生兒敗血癥HNP 1-3水平表達(dá)顯著下降，但降至正常仍需一段時(shí)間。

hs-CRP作為CRP超敏感的檢測(cè)方法，對(duì)血液中低濃度時(shí)的CRP比較敏感。本資料結(jié)果顯示新生兒敗血癥急性期外周血血漿HNP 1-3水平與hc-CRP水平呈中度正相關(guān)關(guān)系，顯示HNP 1-3可作為診斷新生兒敗血癥患兒的輔助指標(biāo)。

綜上所述，HNP 1-3可為新生兒敗血癥患兒早期診斷提供依據(jù)，有較高的臨床價(jià)值。本研究還存在一定的局限性，收集的病例數(shù)尚少，結(jié)論僅有一定的參考價(jià)值，希望對(duì)臨床有所幫助。

［1］ Panyutich AV,panyutich EA,Krapivin VA,et al. Plasma defensing concentration are elevated in patients with septicemia or bacterial meningitis.J Lab Clin Med,1993,122(2):202-207.

［2］ 中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)新生兒學(xué)組、中華醫(yī)學(xué)會(huì)《中華兒科雜志》編輯委員會(huì).新生兒敗血癥診療方案.中華兒科雜志,2003,41(12):897-899.

［3］ 邱建迪,朱銀燕,華春珍.人中性粒細(xì)胞多肽1-3研究進(jìn)展.中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2013,14(8):632-635.

［4］ Doss M,White MR,TecleT,et al. Human defensins and LL-37 in mucosal immunity.J Leukoc Biol,2010,87(1):79-92.

［5］ Habets MG,Rozen DE,Brockhurst MA.Variation in Streptococcus pneumoniae susceptibility to human antimicrobial peptides may mediate intraspecific competitional.ProcBicl Sci,2012, 279(1743): 3803-3811.

［6］ Ihi T,Nakazato M,Mukae H,et al. Elevated concentrations of human neutrophil peptides in plasma,blood,and body fluids from patients with infections Clin Infect Dis,1997,25(5):1134-1140.

Objective To explore the neutrophil peptide 1-3（HNP 1-3）value in the diagnosis of neonatal sepsis. Methods Neonatal sepsis in children with 105 cases，in the early admission（acute phase）and recovery（effective antibiotics around 10 d）line of peripheral blood plasma HNP 1-3 and allergic C-reactive protein（hs-CRP），30 cases of newborns in the same period wereas control group，blood smaple were collected once for the determination of blood HNP 1-3 and hs-CRP. Results During acute phase, plasma HNP 1-3，hs-CRP level in neonataleonatal sepsis group acute phase plasma HNP 1-3，hs-CRP level is significantly higher than treatment group and control group（P＜0.01），neonatal sepsis，acute phase plasma HNP of 1-3 and hs-CRP levels in moderate positive correlation（r=0.450，P＜0.05）.Conclusions Neonat-alsepsis in children with peripheral blood plasma HNP 1-3 level is significantly higher than that of healthy newborn，positively correlated with hs-CRP，HNP 1-3 of neonatal sepsis in early diagnosis has certain clinical value.

Neonatal Sepsis Human neutrophil peptides C-reactive protein

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技項(xiàng)目（2012KYA155）；杭州市衛(wèi)生科技項(xiàng)目（H201201）

310012 杭州師范大學(xué)附屬醫(yī)院（朱銀燕 方妍彤 王

曉芳）

310006 浙江大學(xué)附屬兒童醫(yī)院（華春珍）