ERG和鼠雙微體2蛋白在前列腺癌組織中的表達及意義

劉家趙 孛茹婷 楊文君 劉玲玲 姬廣海 鄭 義 李 鵬 蔡 磊 陳志強

(寧夏醫科大學總醫院放射科，寧夏 銀川 750004)

ERG和鼠雙微體2蛋白在前列腺癌組織中的表達及意義

劉家趙1孛茹婷 楊文君2劉玲玲 姬廣海 鄭 義 李 鵬 蔡 磊 陳志強

(寧夏醫科大學總醫院放射科，寧夏 銀川 750004)

目的 檢測ERG蛋白和鼠雙微體(MDM2)蛋白在前列腺癌組織中的表達情況，并探討其相關性。方法 收集經病理學確診為前列腺癌標本48例，良性前列腺增生10例，采用免疫組織化學二步法或SP法檢測組織標本的ERG蛋白和MDM2蛋白的表達情況，采用χ2檢驗及Spearman等級相關分析ERG和MDM2表達與前列腺癌分級的關系。結果 前列腺癌組織中ERG和MDM2蛋白陽性表達率分別為33.3%和47.9%，在良性前列腺增生組未見表達，差異有統計學意義(P<0.05)。ERG和MDM2蛋白表達與前列腺癌Gleason評分分級不相關(P>0.05)；但ERG與MDM2蛋白在前列腺癌組織中的表達呈正相關(r=0.831，P=0.001)。結論 ERG和MDM2蛋白在前列腺癌組織中的高表達，與前列腺癌的發生、發展密切相關。前列腺癌中ERG蛋白表達與MDM2蛋白的異常表達密切相關說明這兩個蛋白可能存在協同作用。

前列腺腫瘤；ERG；鼠雙微體2

前列腺癌在歐美國家其發病率和死亡率分別居第二位和第六位〔1〕，在我國前列腺癌的發病率呈逐年上升趨勢〔2〕，其病因機制的探究依然是相關研究人員關注的焦點。ERG為癌基因，是E26轉錄因子(ETS)的同源基因，ERG蛋白在血管的發生中起著重要作用，已有報道顯示ERG蛋白在前列腺癌中高表達〔3〕，近年其與腫瘤的關系越來越受到關注。鼠雙微體(MDM)2基因亦是一種原癌基因，是p53信號通路中的關鍵成員，在調控p53基因中發揮重要作用。MDM2在前列腺癌等多種腫瘤組織中都高表達〔4〕。那么，ERG與MDM2是否在信號通路中存在某種聯系，明確二者在前列腺癌組織中的表達及其相互關系，將有助于揭示二者生物學功能機制和前列腺癌的發生、發展與轉歸機制。本研究采用免疫組化方法檢測前列腺癌及良性前列腺增生標本的ERG和MDM2蛋白表達情況，探討二者在前列腺癌中的表達情況及其相互關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 58例標本均來自我院病理科，2011年11月1日至2013年5月31日行超聲引導下前列腺穿刺術或前列腺切除術后的前列腺組織蠟塊。其中前列腺癌48例為病例組，平均年齡(72.17±6.82)歲；良性前列腺增生10例為對照組，平均年齡(65.20±7.77)歲。所有病例組中有吸煙史14例，飲酒史7例；所有對照組中有吸煙史4例，飲酒史2例。按2004年修訂的Gleason評分系統進行病理分級：高分化組Gleason評分<7分14例，中分化組Gleason評分=7分23例，低分化組Gleason評分>7分11例。所有入選病例臨床資料完整，術前均未進行放療、化療及內分泌治療等，所有病例均排除泌尿系統其他疾病、內分泌系統疾病、冠心病和其他惡性腫瘤等。

1.2 主要實驗試劑 兔抗人ERG、鼠抗人MDM2單克隆抗體及PV-6001二步法免疫組化檢測試劑均為北京中杉金橋生物技術有限公司產品，SP系列試劑盒為ZYMED公司產品，HRP-DAB底物顯色試劑盒為北京天根生化科技公司產品。

1.3 免疫組織化學染色 免疫組化方法分別用二步法(ERG抗體即用型)和SP法(MDM2抗體即用型)檢測上述標本。石蠟標本常規切片(4 μm)；常規脫蠟至水，根據抗體要求，對抗原進行相應高壓熱修復；3%H2O2去離子水孵育10 min，消除內源性過氧化物酶活性，PBS沖洗；根據抗體要求，ERG抗體直接滴加一抗，37℃孵育2 h，PBS沖洗；滴加檢測試劑(山羊抗兔IgG抗體-HRP多聚體)，37℃孵育30 min，PBS沖洗；DAB顯色，自來水沖洗，蘇木精復染、脫水、透明、中性樹膠封片；MDM2抗體滴加試劑A，室溫孵育20 min，棄去；滴加一抗，37℃孵育2 h，PBS沖洗；滴加試劑B，37℃孵育15 min，PBS沖洗；滴加試劑C，37℃孵育15 min，PBS沖洗；DAB顯色，自來水沖洗，蘇木精復染、脫水、透明、中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。用已知陽性標本切片作陽性對照，PBS取代一抗作空白對照。

1.4 免疫組化結果判讀標準 由兩位經驗豐富的病理科醫師按照獨立、雙盲的原則閱片。ERG和MDM2以細胞核著黃色、棕黃色或棕褐色為表達陽性細胞。采用二次計分法對染色結果進行半定量判斷。在400倍視野范圍內隨機選擇3個不重復的視野，每個視野下計數100個腫瘤細胞，將各視野的平均陽性率作為該切片的陽性率。陽性細胞數≤10%計0分，11%～25%計1分，26%～50%計2分，陽性細胞數>50%計3分。染色強度陰性為0分細胞核無著色，弱陽性計1分為細胞核著黃色，中度陽性計2分為細胞核著棕黃色，強陽性計3分為細胞核著棕褐色。兩者計分相乘：0分為陰性(-)，1～3分為弱陽性(+)，4～6分為陽性()，≥7分為強陽性()。定義陰性表達為(-)，陽性表達為(+～)。

1.5 統計學方法 采用SPSS20.0統計軟件進行χ2檢驗及Spearman等級相關分析。

2 結 果

2.1 ERG蛋白在前列腺組織中的表達 前列腺癌組織中，ERG蛋白的陽性染色部位均位于細胞核，為黃色、棕黃色或棕褐色顆粒；ERG蛋白在病例組中的陽性表達率為33.3%(16/48)，且多為中度陽性或者強陽性。見圖1。在對照組中未見表達，兩者差異有統計學意義(P<0.05)。按Gleason評分分級，ERG蛋白在高分化組、中分化組和低分化組中的陽性表達率分別為21.4%，34.8%和45.5%，三組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 MDM2蛋白在前列腺組織中的表達 前列腺癌組織中，MDM2蛋白陽性部位定位于細胞核，為黃色、棕黃色或棕褐色顆粒，見圖1，其在病例組的陽性表達率為47.9%(23/48)，在對照組未見表達，二者差異有統計學意義(P<0.05)。MDM2蛋白在高、中和低分化組中的陽性表達率分別為50.0%、47.8%和45.5%，三組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

圖1 ERG及MDM2在前列腺癌組織中的陽性表達(DAB，×400)

2.3 ERG蛋白與MDM2蛋白在前列腺癌組織中表達的相互關系 前列腺癌組織中16例ERG蛋白陽性表達者中8例MDM2蛋白表達陽性，32例ERG陰性表達者中15例MDM2蛋白表達陽性。Spearman等級相關檢驗表明：ERG蛋白與MDM2蛋白在前列腺癌組織中的表達呈正相關(r=0.831，P=0.001)。

3 討 論

ERG〔5〕在參與細胞的增殖、分化、血管生成以及細胞間的相互作用過程中發揮重要作用。ERG蛋白不僅在正常的血管上皮細胞表達〔4〕，而且還在多種腫瘤細胞中高表達〔6，7〕，如急性髓性白血病，尤文氏瘤、前列腺癌等。本研究檢測出有33.3%(16/48)的前列腺癌病例ERG蛋白高表達與前列腺癌不同病理分級無關，這與相關研究〔3，8〕結果一致。前列腺癌為實體腫瘤，其生長依賴腫瘤的血管生成，內皮細胞的凋亡貫穿新生血管的發生和重塑〔9〕，而ERG蛋白參與調控內皮特異性基因在血管形成、退化過程中的表達，對新生血管具有重要影響，此外ERG基因還可能影響細胞的表觀遺傳學狀態〔10〕，進而影響腫瘤的發生。

許多腫瘤中都有MDM2蛋白的表達，如肺癌、乳腺癌、消化道惡性腫瘤和前列腺癌等〔11～13〕。本研究中MDM2蛋白在前列腺癌中高表達，但在不同病理分級中，MDM2蛋白表達無顯著差異。MDM2蛋白主要功能是與p53蛋白結合，通過特異性泛素蛋白連接酶(E3)促使p53蛋白降解，進而抑制p53對細胞周期的阻滯和凋亡。MDM2在諸多人類腫瘤中高表達與腫瘤的侵襲和轉移及預后有關〔12〕。一般來說，腫瘤的惡性程度高與MDM2高表達提示腫瘤更容易轉移和預后不良。本研究結果提示ERG和MDM2在前列腺癌的發生和發展中可能具有某些相互作用，在其信號通路上也可能存在某些聯系，但具體機制還需要進一步研究。

1 Jemal A，Bray F，Center MM，etal.Global cancer statistics〔J〕.CA Cancer J Clin，2011；61(2)：69-90.

2 韓蘇軍，張思維，陳萬青，等.中國前列腺癌發病現狀和流行趨勢分析〔J〕.臨床腫瘤學雜志，2013；18(4)：330-4.

3 Tomlins SA，Rhodes DR，Perner S，etal.Recurrent fusion of TMPRSS2 and ETS transcription factor genes in prostate cancer〔J〕.Science，2005；310(5748)：644-8.

4 Lelievre E，Lionneton F，Mattot V，etal.Ets-1 regulates fli-1 expression in endothelial cells.Identification of ETS binding sites in the fli-1 gene promoter〔J〕.J Biol Chem，2002；277(28)：25143-51.

5 Shaikhibrahim Z，Ochsenfahrt J，Fuchs K，etal.ERG is specifically associated with ETS-2 and ETV-4，but not with ETS-1，in prostate cancer〔J〕.Int J Mol Med，2012；30(5)：1029-33.

6 Salek-Ardakani S，Smooha G，de Boer J，etal.ERG is a megakaryocytic oncogene〔J〕.Cancer Res，2009；69(11)：4665-73.

7 Zhu B，Kyprianou N.Transforming growth factor beta and prostate cancer〔J〕.Cancer Treat Res，2005；126(10)：157-73.

8 Xue L，Mao X，Ren G，etal.Chinese and western prostate cancers show alternate pathogenetic pathways in association with ERG status〔J〕.Am J Cancer Res，2012；2(6)：736-44.

9 Lelievre E，Lionneton F，Soncin F.Role of the ETS transcription factors in the control of endothelial-specific gene expression and in angiogenesis〔J〕.Bull Cancer，2001；88(2)：137-42.

10 Iljin K，Wolf M，Edgren H，etal.TMPRSS2 fusions with oncogenic ETS factors in prostate cancer involve unbalanced genomic rearrangements and are associated with HDAC1 and epigenetic reprogramming〔J〕.Cancer Res，2006；66(21)：10242-6.

11 李玉梅，吳 窮，秦叔逵.MDM2在惡性腫瘤中的研究進展〔J〕.臨床腫瘤學雜志，2012；17(3)：277-81.

12 Chen H，Xie L，Liu B.Clinical significance of MDM2 as a tumor biomarker〔J〕.Chin German J Clin Oncol，2012；11(6)：356-60.

13 Chen T，Yi SH，Liu XY，etal.Meta-analysis of associations between the MDM2-T309G polymorphism and prostate cancer risk〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2012；13(9)：4327-30.

〔2015-11-23修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

寧夏自然科學基金資助項目(NZ13280；NZ1234)

陳志強(1971-),男,碩士,主任醫師，碩士生導師，主要從事泌尿系統腫瘤的臨床、影像、基礎研究。 楊文君(1973-)，女，博士，教授，碩士生導師，主要從事腫瘤遺傳研究。

劉家趙(1985-),男,在讀碩士,主要從事前列腺腫瘤與病理研究。

R737.25

A

1005-9202(2017)05-1061-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.009

1 天津市海河醫院超聲科

2 寧夏醫科大學生殖與遺傳重點實驗室