載脂蛋白H基因多態性與卒中后抑郁的相關性研究

李 靜 劉 杰 王 靜 宋景貴

新鄉醫學院第三附屬醫院 1)神經內科 2)CCU 新鄉 453003 3)新鄉醫學院第一附屬醫院神經內科 衛輝 453100

載脂蛋白H基因多態性與卒中后抑郁的相關性研究

李 靜1)劉 杰1)王 靜2)宋景貴3)△

新鄉醫學院第三附屬醫院 1)神經內科 2)CCU 新鄉 453003 3)新鄉醫學院第一附屬醫院神經內科 衛輝 453100

目的 探討載脂蛋白H(ApoH)外顯子3基因多態性與卒中后患者發生抑郁(PSD)的相關性。方法 應用PCR-單鏈構象多態性分析技術方法進行檢測160例腦卒中患者(40例卒中后抑郁患者和120例單純卒中患者)和100名健康對照者的ApoH基因3號外顯子G341A(Ser88Asn)位點的SNP。結果 卒中后抑郁組事件相關電位(ERP)測定N2及P3波潛伏期較卒中組和對照組延長(FN2=152.516，P=0.000；FP3=51.186，P=0.000)。P3波幅降低(FP3波幅=40.633，P=0.000)。PSD組血清ApoH水平高于對照組和非抑郁組，差異有統計學意義(P均<0.05)。腦卒中組ApoH基因第3外顯子基因多態性與對照組比較差異有統計學意義(P均<0.05)，但PSD組與非抑郁組比較差異無統計學意義(P>0.05)。結論 G341A(Ser88Asn)多態性可作為卒中危險因素參考指標，但與PSD發生無明顯關系。

載脂蛋白H；多態性；卒中后抑郁

腦卒中后抑郁(post-stroke depression，PSD)是腦卒中的常見并發癥之一，30%～50%腦卒中患者出現PSD，嚴重的影響了患者的生活質量[1]，目前對于PSD的診斷必須同時具備腦卒中且符合抑郁癥的診斷。研究結果證實，血脂代謝的異常是導致腦卒中和抑郁癥的重要因素，而ApoH與血脂代謝及腦血管性疾病相關，是動脈粥樣硬化、高血壓的危險因素[2]，因此，我們推測ApoH影響PSD的發生。關于PSD和ApoH的相關研究國內外尚未報道。本研究旨在研究卒中后患者ApoH基因多態性是否可以影響PSD的發生，期望為PSD的臨床診療提供新的客觀依據。

1 資料與方法

1．1 研究對象 (1)腦卒中組：2009-01-2016-05我院神經內科住院的160例患者，男74例，女86例，年齡34～78歲，平均63.45歲。均經頭部CT和(或)MRI證實，診斷均符合1995年全國第4次腦血管疾病學術會議修訂的診斷標準。其中PSD的診斷采用24項漢密爾頓抑郁量表(HAMD)分為卒中后抑郁組(PSD組)40例，年齡43～76歲，平均64.28歲；卒中為單個病灶者21例，病灶≥2個者19例；文化程度：大學 7例，中學 19例，小學 14例。單純腦卒中組120例，年齡43～78歲，平均64.57歲；卒中為單個病灶者52例，病灶≥2個者68例；文化程度：大學18 例，中學56例，小學46例。(2)正常對照組：對照組100例，年齡42～78歲，平均57.30歲；文化程度：大學20例，中學49例，小學31例。既往無高血壓史、心血管病史及糖尿病史。對照組與各病例組間性別、年齡、體質量和文化程度等差異均無統計學意義(P均>0.05)，具有可比性。

1．2 ApoH基因多態性的檢測 取晨起空腹靜脈血4 mL，用肝素抗凝，采用低滲溶解法提取基因組DNA。

1．3 ApoH基因型檢測 擴增ApoH基因第3外顯子的引物，PCR引物序列為上游：5′GAAATTTACCTGTTTATCTTT3′，下游引物：5′GTGCTCAGT-CTGTTAACTG3′。反應實驗機器為PE4800型PCR儀器，實驗條件為94 ℃預變性5 min，94 ℃ 45 s，52 ℃ 30 s，延伸72 ℃1 min，共29個循環后，72 ℃延伸10 min。單鏈構象多態(single strand conformation polymorphism，SSCP)分析：取5 μL PCR產物經6%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測產物，如特異性好，則將PCR產物加等量2倍變性載樣液，混合后，于99 ℃變性10 min，然后立即置冰上5 min，取10 μL 上樣于含5%甘油的8% 29∶1的中性聚丙烯酰胺凝膠中，180 V電壓4 ℃電泳16 h，電泳結束后采用銀染法染色并拍照。選取中性聚丙烯酰胺凝膠電泳中有異常泳帶的陽性樣本進行正反向測序。

1．4 血清ApoH蛋白水平測定 采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清載脂蛋白H水平。將血清標本按ApoH酶聯免疫分析試劑盒說明書操作步驟測定，應用酶聯儀依序測量各孔的光密度(OD值)。

2 結果

2．1 3組各事件相關電位的特點 見表1。事件相關電位(ERP)測定PSD組N2及P3波潛伏期較單純卒中組和正常對照組延長，差異均有統計學意義(P均<0.01)，P3波幅降低，差異有統計學意義(P<0.01)。而ERP測定N1、P2波潛伏期各組間差異均無統計學意義(P均>0.05)。

表1 3組ERP各波潛伏期(PL)及P3波幅(Amp)比較 (±s)

注：與單純卒中組比較，*P<0.01；與正常組比較，*P<0.01；與單純卒中組比較，**P<0.05；與正常組比較，**P<0.01

2．2 3組ApoH水平的特點 見表2。PSD組和單純卒中組血清ApoH、TG、TC均水平高于正常對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。而PSD組和單純卒中組ApoH水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。

表2 3組血清ApoH及血脂水平比較 (±s)

注：與對照組比較，*P<0.01

2．3 3組ApoH基因3號外顯子G341(Sev88Asn)多態性分布情況 單純卒中組與正常對照組ApoH基因第3外顯子基因多態性比較差異有統計學意義(P<0.05)，但PSD組與非抑郁組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 腦卒中組ApoH基因3號外顯子G341(Sev88Asn)

注：與正常對照組比較，*P<0.01；與單純卒中組比較，△P>0.05

3 討論

腦卒中后抑郁是腦卒中后情緒障礙的主要表現形式，影響患者認知功能和神經功能恢復[3]，嚴重時有自殺傾向，增加病死率和卒中復發風險[4]，降低患者回歸社會的比例。PSD是臨床上較常見但診斷又存在一些問題的病癥。因此，關于PSD的相關研究越來越受到人們關注。已有研究表明，PSD患者存在血脂代謝異常，而ApoH是血漿脂蛋白組成之一，可與富含甘油三酯的脂蛋白共同沉淀，其表型將影響TG的水平[5]。ApoH第3外顯子的88位點核苷酸存在G-A變化，異使絲氨酸Ser變為天冬氨酸Asn[6]。目前，該位點變化可能引起的疾病包括與脂代謝異常相關的腦卒中和高血壓等疾病[7]，所以，ApoH是否通過影響脂代謝進而影響到PSD的發生值得探討。

血漿脂蛋白的代謝受與其所結合的載脂蛋白的影響，不同的載脂蛋白對腦血管病均有影響[8]。國外研究發現，載脂蛋白H與抗磷脂抗體、高血壓、血脂代謝紊亂及凝血機制異常等腦卒中危險因素密切相關，ApoH基因具有遺傳多態性。PSD患者ApoH基因表達量不同[9]，女性中ApoH等位基因和甘油三酯水平之間有特殊的關系，ApoH外顯子等位基因可顯著提高女性血漿TG水平。脂蛋白中ApoH分布的不同可能導致脂質代謝紊亂動脈粥樣硬化患者的血漿LDL升高。近年研究還發現，ApoH可能通過擾亂脂質代謝，促使腦動脈粥樣硬化，在此基礎上，通過與磷脂結合后活化，引起局部血栓形成而導致腦梗死[10]。我們的研究顯示，PSD組及單純卒中組患者的血清TG及LDL均高于正常對照組，相應的ApoH也較正常對照組高，提示卒中及卒中后抑郁可能與ApoH有一定聯系。

研究發現，美國2型糖尿病患者的ApoH多態性與高血壓的關系發現，表型為H2/3和H3/3的糖尿病患者高血壓發病率高于表型為H2/2者，而H2/1表型未發現此相關性。國內研究[8-11]顯示，G341A(Ser88Asn)多態A等位基因可能是高血壓的遺傳危險因素，ApoH基因多態性與高血壓腦出血之間存在相關性，在腦梗死組未發現A等位基因與高血壓的相關性。

我們的研究顯示，PSD組和單純卒中組A等位基因頻率確實較對照組有差異，PSD組和單純卒中組比較ApoH基因多態性無明顯差異，所以，ApoH基因多態性并不能作為卒中后抑郁發生的危險因素。

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[2] Mehdi H，Aston CE，Sanghera DK，et al．Genetic variation in the apolipoprotein H gene affects plasma apolipopro-tein H(beta2-glycoprotein Ⅰ) concentrations[J]．Hum Genet，1999，105(1/2)：63-71．

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[4] 吳盛各，劉秀峰，李鋪，等．卒中后抑郁與抑郁癥患者血清細胞因子及超敏C反應蛋白水平的對照研究[J]．中華行為醫學與腦科學雜志，2014，23(6)：497-499．

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[9] 李靜，鄭根雨，宋景貴，等．腦卒中后抑郁患者載脂蛋白H水平檢測[J]．中國實用神經疾病雜志，2013，16(6)：23-25．

[10] 郭新玲，閆春華，關麗娥．載脂蛋白H與缺血性腦血管病相關性研究[J]．醫學綜述，2012，18(4)：513-515．

[11] 吳紅赤，陸紅，劉睿嬋，等．載脂蛋白H基因多態性與高血壓腎損害及腎實質性高血壓[J]．中國血液凈化，2004，3(3)：136-138．

(收稿2016-11-16)

Relationship between Apolipoprotein H(ApoH)and post-stroke Depression

LiJing﹡，LiuJie，WangJing，SongJinggui

﹡DepartmentofNeurology，theThirdPeople’sHospitalofXinxiangMedicalCollege，Xinxiang453003，China

Objective To investigate the relationship between apolipoprotein H(ApoH) polymorphism in exon3 and post-stroke depression．Methods G341A(Ser88Asn) polymorphism in ApoH gene was determined by PCR-single strand conformation plymorphism analysis and DNA sequencing in 100 healthy controls，160 patients with stroke (40 patients with post stroke depression and 120 cases of patients without depression)．Results Compared with brain stroke group and control group，latency in ERP including N2 and P3 of PSD group has prolonged(FN2=152.516，P=0.000；FP3=51.186，P=0.000)，the amplitude of P3 in PSD was lower (FP3=40.633，P=0.000)．ApoH level in PSD group was higher than the control group and the group without depression，the difference was statistically significant (P<0.05)．Statistically significant differences in exon3 polymorphism were found between the controls and stroke patients．But no statistically significant difference (P>0.05) were found between the PSD group and the non-depression group (P>0.05)．Conclusion G341A (Ser88Asn) polymorphism polymorphism can be used as a risk factors in stroke．But there is no close relation between polymorphism of the apolipoprotein H exon3 and PSD．

Apolipoprotein H；Polymorphism；Post-stroke depression

河南省衛生廳醫學科技攻關項目(200803083)

R749.1+3

A

1673-5110(2017)07-0012-04

△通訊作者：宋景貴，男，醫學博士，神經病學教授，主任醫師；研究方向：腦血管疾病的診治；E-mail：songjg62@126.com