黃芪對急性腎損傷大鼠EGF、IL—18的影響實驗研究

程新　向少偉　賴申昌

摘要：目的 探討黃芪對急性腎損傷大鼠EGF、IL-18的影響。方法 雄性Wistar大鼠40只，除對照組10只外，其余用采用慶大霉素注射液100mg/（kg·d）腹腔注射，連續(xù)7 d，建立急性腎損傷動物模型，隨機分為模型組，黃芪提取液高劑量組、低劑量組。分次在灌胃前，第7和14 d通過大鼠內(nèi)眥靜脈取血，測定血清肌酐、血清尿素氮，表皮生長因子（EGF），白細胞介素質(zhì)-18（IL-18），第14 d取血后處死大鼠。結(jié)果 藥物灌胃第7 d，各治療組所測EGF均較治療前上升，IL-18均較治療前下降，均高于對照組，但高劑量組更明顯，第14 d，各治療組EGF較第7 d進一步上升，而IL-18進一步下降，高劑量組更明顯。高劑量組腎功能及形態(tài)學損傷與模型組相比有較明顯減輕。結(jié)論 黃芪對損傷大鼠腎臟有較明顯的保護作用。

關鍵詞：急性腎損傷；黃芪；炎癥因子；中藥

急性腎損傷（acute kidney injury）是由各種原因引起的腎功能在短期內(nèi)突然下降而出現(xiàn)的氮質(zhì)廢物滯留、體液潴留及電解質(zhì)酸堿平衡紊亂等為主要表現(xiàn)的臨床綜合癥。而據(jù)相關資料報告示急性腎損傷的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，急性腎小管壞死（acute tubular necrosis，ATN）是最常見的腎實質(zhì)性急性腎損傷，本實驗擬通過觀察黃芪對急性腎小管壞死大鼠EGF、IL-18的影響，探討黃芪對急性腎小管壞死大鼠腎臟的保護作用機制。

1 材料與方法

1.1動物 健康純系雄性Wistar 大鼠，體重（160±20）g，由廣西中醫(yī)學院動物實驗中心提供。試劑：IL-18試劑盒購自生工生物工程（上海）股份有限公司，EGF試劑盒美國 Sigma 公司，檢測采用放免分析法。

1.2實驗 40只Wistar大鼠，適應性飼養(yǎng)7 d后，隨機取10只為正常對照組外，其余用采用慶大霉素注射液100mg/（kg·d） 腹腔注射，連續(xù)7 d，建立急性腎小管壞死動物模型。造模成功后隨機分為三組：①模型組10只；②黃芪低劑量組10只；③黃芪高劑理組10只。黃芪低劑量組，以15 g/100 g/d灌胃，黃芪高劑量組，以60 g/100 g/d灌胃，灌胃1 次/d；正常對照組自由飲水。正常組及各實驗組大鼠治療14 d后處死大鼠，檢測指標于灌胃前、第7 d、第14 d內(nèi)眥靜脈采血1.5～2/L，第14 d禁食12 h后，大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉（1 ml/kg）麻醉，腹主動脈采血4～5 L，測定血清、血清肌酐、血清尿素氮，并留取大鼠腎臟組織，觀察腎臟病理變化情況。

1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS 15.0軟件進行分析，計量資料以（x±s）表示，組間比較用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1藥物灌胃前，模型組及治療組與對照組比較EGF明顯下降，而IL-18明顯升高，比較有統(tǒng)計學意義（P<0.05），藥物灌胃第7 d，治療組與模型組比較，EGF明顯升高，而IL-18明顯下降，比較有統(tǒng)計學意義（P<0.05），高劑量組比低劑量組比較EGF上升高更明顯，而IL-18下降更明顯（P>0.05），灌胃第14 d與灌胃第7 d比較，EGF有進一步升高，IL-18進一步下降，肌酐及尿素氮有更明顯下降比較有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1、表2。

2.2病理標本檢查 對照組大鼠腎臟病理未見異常。 模型組第7 d腎臟病理改變見于皮髓交界處， 可見皮髓交界處約95%近曲小管上皮細胞壞死脫落， 胞漿與基底膜分離，小管腔內(nèi)見大量蛋白管型及崩解的胞漿組織；第14 d可見近曲小管上皮細胞有灶狀修復。治療組第 7 d病理改變與 模型組第7 d病變類似，皮髓交界處廣泛腎小管上皮細胞壞死脫落，僅存基膜； 第 14 d可見大部分再生修復的腎小管上皮細胞。

3 討論

目前國內(nèi)外治療急性腎損傷主要是對癥支持治療及通過腎臟替代治療，使受損的腎小管得以自行修復，而對于急性腎小管壞死病情的發(fā)展及慢性化仍沒有效的藥物可以用來阻止其病情的發(fā)展，尋求有效的能阻止急性腎損傷病情發(fā)展及慢性化的藥物成為迫切的需要。

在多年的研究中發(fā)現(xiàn)中藥黃芪具有益氣健脾，利水消腫作用，有研究證實黃芪可使糖尿病腎病患者血肌酐、尿素氮及尿蛋白降低，改善早期糖尿病腎病高濾過、高灌注狀態(tài)；藥理研究證實，黃芪具有調(diào)整體液免疫和細胞免疫，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，促進水鈉排泄，改善高凝狀態(tài)，促進蛋白質(zhì)合成的作用，對急性腎損傷及抗慢性纖維化均有明顯作用[1-4]。

近年來對表皮生長因子（epithelial growth factor，EGF）、白細胞介素質(zhì)-18的研究成為急性腎損傷的研究熱點，表皮生長因子是大小約6KD的單鏈多肽，其與細胞表面的EGF受體（EGF-R）結(jié)合，引起EGF-R二聚體形成、酪氨酸激酶迅速激活及酪氨酸自動磷酸化，并導致信號傳導途徑中作為第二信使的特異性基質(zhì)蛋白磷酸化，由此調(diào)節(jié)有絲分裂及其他細胞活動，現(xiàn)已證實其在急性腎小管壞死時起修復腎小管上皮細胞的作用[5]。而白細胞介素質(zhì)-18（IL-18）是一個多效前炎性細胞因子，具有強烈的促炎癥作用，主要參與Thl細胞的激活及反應，具有強大的誘生IFN-γ及TNF-α的能力，能促進Fas-FasL系統(tǒng)介導細胞毒作用，是多種自身免疫性疾病及具復雜免疫過程的慢性炎癥性疾病的重要發(fā)病因子，其對早期腎臟病的診斷也有重要意義[6]。

從實驗研究的結(jié)果可知，黃芪提取液灌胃第7 d，各治療組所測EGF均較治療前上升，IL-18均較治療前下降，均高于對照組，但高劑量組更明顯，第14 d，各治療組EGF較第7 d進一步上升，而IL-18進一步下降，高劑量組更明顯，高劑量組腎功能及形態(tài)學損傷與模型組相比有較明顯減輕，這說明黃芪對急性腎小管壞死大鼠腎臟有明顯保護作用，其保護作隨藥物劑量的加大有所增強，從而提示了黃芪對急性腎損傷大鼠的保護作用的機制之一是通過升高表皮生長因子促進腎小管的修復，及降低白細胞介素質(zhì)-18抑制炎癥反應來實現(xiàn)的，這為臨床黃芪用于治療急性腎損傷提供了實驗依據(jù)，但黃芪提取液又是通過怎樣的信號通路途徑來影響EGF及IL-18的表達，有待進一步深入的研究探討。

參考文獻：

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編輯/成森