大補陰丸對去卵巢所致骨質疏松癥大鼠骨組織形態計量學指標的影響

汪文來，劉梅潔，于 崢，李 艷，王少君，劉 紅，潘靜華，王 震，趙紅霞

(中國中醫科學院中醫基礎理論研究所，北京 100700)

大補陰丸對去卵巢所致骨質疏松癥大鼠骨組織形態計量學指標的影響

汪文來，劉梅潔，于 崢，李 艷，王少君，劉 紅，潘靜華，王 震，趙紅霞△

(中國中醫科學院中醫基礎理論研究所，北京 100700)

目的:觀察大補陰丸對去卵巢所致骨質疏松癥大鼠脛骨骨組織形態計量學指標的影響，以探討其對骨質疏松癥的作用。方法:將88只雌性Wistar大鼠按隨機數字表法分為空白對照組、假手術組、模型組、己烯雌酚組和大補陰丸高、中、低劑量組7組。采用摘除卵巢的方法制作骨質疏松癥動物模型，在灌胃給藥3個月后，運用骨組織形態計量學方法對大鼠脛骨不脫鈣骨切片進行形態計量。結果:與模型組比較，大補陰丸高、中劑量組TBV%顯著增高，TRS%、TFS%、MAR、mAR顯著降低。結論:大補陰丸對去卵巢所致的大鼠骨質疏松癥具有一定的治療作用。

大補陰丸;骨質疏松癥;骨組織形態計量學

中醫理論認為，骨質疏松癥的發生，腎虛是其根本原因，大補陰丸由熟地黃、炙龜板、黃柏、知母、豬脊髓組成，具有滋陰降火、大補真陰之功效。據此，本實驗以卵巢切除大鼠為動物模型，采用骨組織形態計量學方法，探討該方對骨質疏松癥的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 選用雌性SPF級Wistar大鼠88只，體質量200～220 g，由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供(許可證號 SCXK-(軍) 2002-001)。大鼠飼養和實驗均在中國中醫科學院中醫基礎理論研究所清潔級實驗動物室內進行(實驗動物室許可證號SYXK(京)2010-0032)。

1.1.2 藥物 熟地黃、鹽知母、鹽黃柏、醋龜甲購自北京燕京飲片廠，豬脊髓購自北京市昌平區回龍觀農貿市場。經中國中醫科學院中藥研究所生藥室胡世林研究員鑒定均符合2010年版《中華人民共和國藥典》項下規定。藥材加水煎煮，藥液濃縮至1 g生藥 /1 ml的濃度。鹽酸四環素，欣惠澤奧科技有限公司，己烯雌酚為合肥久聯制藥有限公司生產。

1.1.3 主要儀器 Reicheit-Jung切片機、CTR6000顯微鏡、QwinV3圖像分析儀系統均為德國Leica公司。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及處理 先將88只大鼠按隨機數字表法分為3組，其中空白對照組12只，假手術組12只，造模組64只。造模組大鼠用戊巴比妥鈉麻醉后摘除雙側卵巢［1］，假手術組只摘取卵巢周圍的少許脂肪組織。術后15 d，再將造模組大鼠以體質量按隨機數字表法分為5組，其中模型組12只，己烯雌酚組13只，大補陰丸高劑量組13只，大補陰丸中劑量組13只，大補陰丸低劑量組13只。開始灌胃給藥，大補陰丸高劑量組7.6 g生藥/kg體質量，大補陰丸中劑量組3.8 g生藥/kg體質量，大補陰丸低劑量組1.9 g生藥/kg體質量，陽性對照組灌胃給予藥液濃度為0.008 mg/ml的己烯雌酚5.6 ml/kg體質量。以上給藥，每日1次，連續6 d，休息1 d后再連續灌服6 d，如此給藥3個月，空白對照組、假手術組、模型組按上法灌服等體積的純凈水。分別在大鼠處死前15 d和前3 d腹腔注射鹽酸四環素30 mg/kg體質量，以對骨進行熒光標記。給藥結束后，將大鼠以45 mg/kg劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，將各組大鼠迅速脫頸椎處死。取右側脛骨，用4% 多聚甲醛溶液固定，制作不脫鈣骨切片，用于骨組織形態計量學檢測。

1.2.2 指標的檢測方法 骨組織形態計量學指標的測定:不脫鈣骨切片的制作及染色方法參見文獻［2］。采用Leica Qwin圖像分析系統，按照章明放等方法［2］對不脫鈣骨切片進行形態計量。(1)骨小梁組織形態計量:骨小梁體積百分比(TBV%) :骨小梁體積占被測骨髓腔總體積的百分比是衡量骨量水平的主要標志;骨小梁吸收表面百分比(TRS%):不規則、凹凸不平的骨小梁表面占骨小梁表面的百分比可判斷破骨細胞(OC)的活性;骨小梁形成表面百分比(TFS%):有成骨細胞(OB)被覆的類骨質表面占骨小梁表面的百分比，可判斷OB的活性;骨小梁礦化率(MAR):骨小梁表面熒光雙標記帶的平均距離除以2次標記相隔的天數; (2)皮質內表面形態計量:類骨質平均寬度(OSW) :皮質內表面有OB被覆的類骨質的平均寬度;骨皮質礦化率(mAR):皮質內表面雙標記帶的平均距離除以2次標記相隔的天數。

2 結果

2.1 大補陰丸對去卵巢大鼠脛骨TBV% 影響

表1顯示，模型組及各給藥組大鼠脛骨TBV%較假手術組顯著降低。與模型組比較，大補陰丸高、中劑量組TBV%顯著升高，與低劑量組比較差異無統計學意義。陽性對照組的TBV%顯著高于模型組，與假手術組比較差異無統計學意義。

表1 各組大鼠脛骨TBV%的變化比較

2.2 大補陰丸對去卵巢大鼠脛骨 TRS%和 TFS%的影響

表2顯示，模型組及各給藥組大鼠脛骨TRS%和TFS%較假手術組顯著升高。與模型組比較，陽性對照組、大補陰丸高、中劑量組TRS%和TFS%顯著降低，與低劑量組比較差異無統計學意義。

表2 各組大鼠脛骨TRS%和TFS%的變化比較

2.3 大補陰丸對去卵巢大鼠脛骨OSW、MAR和mAR的影響

表3顯示，與假手術組比較，模型組大鼠脛骨OSW明顯增高(P＜0.05)，與其他組比較差異無統計學意義。與模型組比較，陽性對照組差異有統計學意義(P＜0.05)。與假手術組比較，模型組MAR和mAR均顯著升高(P＜0.01)，與模型組比較，陽性對照組、大補陰丸高、中劑量組MAR和mAR均顯著降低(P＜0.05)。

表3 各組大鼠脛骨OSW、MAR和mAR變化比較

3 討論

實驗結果表明，大鼠灌服大補陰丸水煎液3個月后與模型組比較，大補陰丸組大鼠脛骨TBV%顯著增加，而 TRS%、TFS%、MAR、mAR明顯降低，OSW比較差異無統計學意義。提示大補陰丸對于卵巢切除造成的骨吸收大于骨形成的高轉換型大鼠骨質疏松癥模型具有一定的治療作用，為拓展其臨床應用提供了參考。

［1］鞠大宏，張春英，王安民，等，溫補腎陽方對去卵巢所致骨質疏松癥大鼠IL-1和IL-6活性的影響［J］．中國中醫基礎醫學雜志，2000，6(4):29-32．

［2］章明放，張乃鑫，譚郁彬．運動對雌性大鼠去勢后骨質疏松癥的作用［J］．中華骨科雜志，1994，14(6):365-369．

The Effect of DaBuYinWan on the Bone Histomorphology of Ovariectomized Rats Pilon

WANG Wen-lia，YU Zheng，LI Yan，WANG Shao-jun，LIN Hong，Pan Jin-hua，WANG Zhen，ZHAO Hong-xia△
(Basic Theory Institute of TCM，CACMS，Beijing 100700，China)

Objective:Observe the influence of DaBuYinWan on the bone histomorphology of ovariectomized rats pilon，in order to investigate the effect of DaBuYinWan on Osteoporosis．Methods:The 88 female rats were randomly divided into 7 groups，concluding normal group，sham operation group，model group，positive group and Dabuyinwan(high，middle，low-dose)group．Establish a rat osteoporosis model with removing the ovaries．After three months administration，measure the undecalcified sections in bone by bone histomorphometry．Results:Compared with the model group，TBV%in positive group and Dabuyinwan(high，middle-dose)group increased obviously，TRS%，TFS%，MAR and mAR decreased obviously．

Dabuyinwan;Osteoporosis;Bone histomorphometry

R285．5

B

1006-3250(2017)01-0078-02

2016-06-22

△

趙紅霞(1970-)，女，北京人，副研究員，醫學碩士，從事中醫婦科、內科等臨床與理論研究，Tel: 136936788283，E-mail:zhaohongxia7000@163．com。