福建省EV71流行與遺傳變異特點(diǎn)分析

何文祥，張擁軍，陳光敏，朱 穎，陳 煒，翁育偉

福建省EV71流行與遺傳變異特點(diǎn)分析

何文祥，張擁軍，陳光敏，朱 穎，陳 煒，翁育偉

目的 分析2010-2015年福建省腸道病毒71型(EV71)流行概況及病毒VP1基因特征，為今后EV71疫苗在福建省的應(yīng)用提供參考。方法 基于手足口病監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，對(duì)福建省2010-2015年間EV71流行情況進(jìn)行描述性流行病學(xué)分析。隨機(jī)選取72株病毒分離株，擴(kuò)增病毒VP1區(qū)并與疫苗株作序列進(jìn)化分析。比較兩者核苷酸及氨基酸序列差異性，分析分離株在VP1蛋白4個(gè)免疫表位的氨基酸變異情況。結(jié)果 2010-2015年，EV71總體感染率呈下降趨勢(shì)，在每年的5-7月均出現(xiàn)一次流行高峰；發(fā)病地區(qū)主要集中在廈門、福州、南平、泉州；主要感染1-3歲年齡段兒童，男性比例高于女性，職業(yè)分布以散居兒童為主。重癥病例中EV71比例高于在總病例中的比例(χ2= 732.064 5，P<0.000 1)。福建地區(qū)流行的EV71病毒均屬于C4a亞型，與疫苗株的核苷酸差異性隨時(shí)間距離增加而逐漸增大，氨基酸差異性未有明顯變化；在4個(gè)免疫表位上的氨基酸變異未發(fā)現(xiàn)年度上的規(guī)律和同HMFD中EV71構(gòu)成分布相符的變化。結(jié)論 2010年至2015年，福建地區(qū)流行的EV71具有明顯的時(shí)間、地點(diǎn)、人群分布特征，72株病毒株均屬于C4a基因亞型，與疫苗株相比，VP1區(qū)未出現(xiàn)顯著的抗原漂移及變異。應(yīng)繼續(xù)保持對(duì)EV71流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和遺傳特征的分析，為今后疫苗的應(yīng)用提供更為詳盡的資料。

腸道病毒71型；流行病學(xué)；遺傳特征；疫苗；預(yù)防

EV71病毒屬于小RNA病毒科腸道病毒屬成員，主要感染兒童。上世紀(jì)70-80年代，EV71主要在歐美、澳大利亞等地流行，除局部暴發(fā)外，多為低水平流行[1]。進(jìn)入90年代亞洲成為EV71的主要流行地區(qū)，包括新加坡，馬來西亞，臺(tái)灣地區(qū)[2-4]。EV71是兒童手足口病的主要病原體，是引起手足口病(Hand, Foot and Mouth Disease ,HMFD)重癥及死亡的重要危險(xiǎn)因素[5-7]。根據(jù)VP1區(qū)的核苷酸差異性，EV71可分為A，B，C三個(gè)基因型，A 基因型只有一個(gè)成員(Brcr),B基因型和C基因型則分為B1-5、C1-5各5種基因亞型，其中C4又分為C4a和C4b[1]。在中國大陸地區(qū)，2004年以來流行的EV71均屬于C4基因亞型[8-9]。由于目前尚無特效藥物可用于EV71治療，因而我國EV71滅活疫苗的研制和上市[10]對(duì)于EV71感染的防治具有積極的意義。

由于小RNA病毒具有高度變異性和重組性，可能導(dǎo)致產(chǎn)生新的致病株[11]，因此EV71的流行病學(xué)和病原學(xué)監(jiān)測(cè)對(duì)防控EV71流行意義重大并且能在一定程度上指導(dǎo)EV71疫苗接種。為了了解既往福建省流行概況及病毒遺傳特征，本文基于手足口病監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，對(duì)2010-2015年間福建省的EV71流行概況進(jìn)行描述性流行病學(xué)分析，并對(duì)其VP1基因特征進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 資料及毒株來源：HMFD病例資料和人口數(shù)據(jù)來源于中國疾病預(yù)防控制信息系統(tǒng)，其中EV71感染者為發(fā)病日期在2010至2015年間且實(shí)驗(yàn)室結(jié)果為EV71的HMFD病例。將2010年至2015年全省手足口監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院采集上送的HMFD核酸陽性標(biāo)本通過病毒培養(yǎng)、分離、鑒定獲得毒株(具體方法參照文獻(xiàn)[12])。福建省周邊6個(gè)省份(廣東、江西、浙江、安徽、江蘇、山東)EV71及疫苗株(H07株)VP1序列信息來源于公共數(shù)據(jù)庫(GeneBank)。

1.2 方法

1.2.1 描述性分析 將收集的EV71感染者數(shù)據(jù)資料采用描述性統(tǒng)計(jì)分析的方法，按照時(shí)間、地區(qū)、人群、在HMFD中比例分布情況進(jìn)行分組，分析福建省EV71的流行特征。

1.2.2 EV71 VP1區(qū)的擴(kuò)增 從每個(gè)年度(2010-2015)分離到的毒株中各隨機(jī)挑取12株(共72株)EV71病毒分離株。用QIAamp viral RNA Mini Kit試劑盒(QIAGEN公司，德國)提取病毒RNA。用PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2 試劑盒(TAKARA公司,日本)進(jìn)行VP1擴(kuò)增(VP1 Primer F：5′-CAGGAAACAGCTATGACGCAGCCCAAAAGAACTTCAC-3′，VP1 Primer R：5′-AGTCACGACGTTGTAAAGTCGCGAGAGCTG-TCTTC-3′)。按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.3 EV71 VP1區(qū)全長序列的測(cè)定分析 用QIAquick Gel Extraction kit試劑盒(QIAGEN公司，德國)進(jìn)行膠回收純化，實(shí)驗(yàn)步驟參照說明書。將純化產(chǎn)物用BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequence kit試劑盒(Applied Biosystems公司,美國)進(jìn)行雙向測(cè)序反應(yīng)(引物：M1：5′-CAGGAAACAGCTATGAC-3′，RV：5′-AGTCACGACGTTGTA-3′)。測(cè)序反應(yīng)產(chǎn)物用乙醇純化后，在ABI 3500序列測(cè)定分析儀上進(jìn)行測(cè)定。測(cè)序結(jié)果的比對(duì)及核苷酸和氨基酸的差異性比較使用DNASTAR軟件(DNASTAR 公司，美國)。從GenBank上下載福建省周邊省份6年來(2010-2015)全部的EV71毒株VP1序列，并從其中隨機(jī)挑取共20株毒株序列，與EV71分離株、EV71各個(gè)亞型的代表株、以及EV71 疫苗株(H07株，GenBank序列號(hào)HQ328793)的VP1區(qū)全長序列做多序列排列。用MEGA6.0以鄰接法(Neighbor-joining)構(gòu)建進(jìn)化樹。

2 結(jié) 果

2.1 流行概況 2010年至2015年福建省實(shí)驗(yàn)室確診EV71感染人數(shù)分別為2 668例、673例、2 070例、851例、999例和1 306例；感染率分別為7.36/10萬、1.82/10萬、5.56/10萬、2.27/10萬、2.65/10萬和3.43/10萬，年平均感染率為3.85/10萬。EV71人群感染率總體呈遞減趨勢(shì)(Z=23.75，P<0.000 1)，平均遞減速度為14.15%。

2.2 流行特征

2.2.1 時(shí)間分布 從2010-2015年，每年的5～7月份均出現(xiàn)一次流行高峰，期間感染人數(shù)占全年感染人數(shù)比例分別為：54.69%，52.90%，58.16%，51.59%，43.04%，52.76%。2010、2012及2015年度高峰期(5-7月)的感染率明顯高于2011、2013和2014年。EV71感染總體呈現(xiàn)夏季高發(fā)的態(tài)勢(shì)，2011年和2014年在10-11月份疫情出現(xiàn)微小幅度的反彈。見圖1。

2.2.2 地區(qū)分布 各個(gè)年度中，全省9個(gè)地市(平潭綜合實(shí)驗(yàn)區(qū)本研究中暫將其歸入福州市)EV71感染人數(shù)比例分布情況如圖2所示。EV71感染人群主要集中在廈門、福州、南平、泉州4個(gè)地區(qū)。廈門地區(qū)6年平均EV71感染率最高，為7.77/10萬、其次是福州為4.38/10萬、然后是南平為4.02/10萬，泉州3.22/10萬。

2.2.2 人群分布 2010-2015福建省EV71感染

圖1 2010-2015年福建省EV71感染月份分布Fig.1 Distribution of EV71 infection in Fujian, 2010-2015

圖2 2010-2015年各地區(qū)EV71比例分布情況Fig.2 Distribution of proportion of EV71 in each region, 2010-2015

人群主要集中在1-3歲年齡段的低齡兒童，該年齡段感染人數(shù)占全年感染人數(shù)比例分別為72.94%、76.08%、74.88%、74.38%、76.58%、72.36%，重癥及死亡病例年齡組構(gòu)成也同樣以1～3歲組為主，占總的重癥及死亡人群比例依次為79.00%、75.94%、70.86%、77.54%、81.43%、75.84%；人群中男女感染比例分別為1.81∶1、2.1∶1、1.97∶1、1.81∶1、1.80∶1、1.86∶1；病例以散居兒童為主，基本上呈現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)，所占比例分別為69.00%(1 841/2 668)、79.05%(532/673)、79.86%(1 653/2 070)、80.85%(688/851)、81.88%(818/999)、80.17%(1 047/1 306)，幼托兒童次之，幼托兒童占感染人數(shù)比例在2010年最高，達(dá)到28.56%(762/2 668)，之后大致呈現(xiàn)逐年下降的趨勢(shì)。

2.2.3 比例分布 2010至2015年HMFD中EV71構(gòu)成比例按月份分布如圖3所示，年度平均構(gòu)成比例依次為76.19%、45.08%、50.80%、24.11%、27.07%、35.31%，均值為42.86%(8 567/19 990)；HMFD重癥病例中EV71構(gòu)成比例從2010年至2015年依次為92.96%、90.99%、66.61%、61.61%、56.00%、67.42%，均值為73.94%(1 535/2 076)。重癥中EV71比例高于總病例中EV71比例(χ2=732.064 5，P<0.000 1)。

圖3 2010-2015年HMFD中EV71構(gòu)成比例分布情況Fig.3 Distribution of EV71 proportion in HMFD, 2010-2015

2.3 VP1區(qū)擴(kuò)增及系統(tǒng)進(jìn)化分析 應(yīng)用VP1 primer F/R 引物，擴(kuò)增得到的全長VP1產(chǎn)物約為1 000 bp。遺傳樹圖顯示(如圖 4)，福建株(2010-2015)與周邊省代表株、疫苗株均落在C4a亞型的分枝上(bootstrap 值=100)。在C4a分枝中福建株在年度和地區(qū)分布上交錯(cuò)分布，無明顯聚集性，輕癥、重癥和死亡病例的毒株未在進(jìn)化樹上呈現(xiàn)規(guī)律分布。

●為2010-2015年福建省EV71分離株

●Indicate EV71 strains isolated in Fujian Province from 2010 to 2015; “(M)” indicate strains from mild cases, “(S)” indicate from severe cases and”(F)” indicate from fatal cases

圖4 EV71病毒株VP1區(qū) 進(jìn)化樹分析

Fig.4 Phylogenetic tree of VP1 regions of EV71 strains

2.5 核苷酸及氨基酸差異性分析 將福建株和H07疫苗株進(jìn)行VP1區(qū)差異性比較(如表1),福建株與疫苗株的核苷酸差異隨時(shí)間距離增大基本上呈現(xiàn)增大趨勢(shì)，而相對(duì)應(yīng)的氨基酸差異性無明顯變化。與疫苗株相比，在VP1區(qū)SP31-SP33(91-111aa)、SP55(163-177aa)、SP70(208-222aa)、145-159aa 4個(gè)免疫表位的氨基酸變異情況如表2所示，4個(gè)免疫表位中除個(gè)別氨基酸位點(diǎn)出現(xiàn)變異，并未出現(xiàn)年度間規(guī)律性的氨基酸改變。

表1 2010-2015年度福建省EV71病毒VP1區(qū)核苷酸及氨基酸差異性比較
Tab.1 Divergence of nucleotide and amino acid sequences of VP1 of the EV71 isolates in Fujian, 2010-2015 compared with H07 strain

百分比差異PercentDivergence201020112012201320142015核苷酸nucleotide(%)1.0-2.41.4-2.51.4-2.62.2-3.22.4-4.12.6-3.5氨基酸aminoacid(%)0.0-1.40.0-0.70.0-1.40.0-1.00.0-0.70.0-1.4

表2 2010-2015年病毒株與疫苗株相比在四個(gè)免疫表位發(fā)生氨基酸變異情況
Tab.2 Amino acid substitution in immune epitope of EV71 from 2010-2015 compared with vaccine strain

aa.91-111aa.145-159aa.163-177aa.208-2229398101104145146148158159164212217218EV71/H07IETNEVPPGDGEK2010/K1,G1A1/A1I2L1S1//R1G1E12011////Q1,G1I1///////2012/////I1///N1//R12013/////I3//A1E1///2014/////I3///////2015V1//E1,K1/////E1///

*“/”indicated no substitution in the site compared with H07 strain, the front of “”was amino acid and the back was strains' numbers

3 討 論

本研究顯示，2010-2015年，每隔1～2年EV71感染率出現(xiàn)1次升高，但升高的幅度逐漸減弱(2010:7.36/10萬、2012:5.56/10萬、2015:3.43/10萬)，2010年感染率最高，2011年的感染率最低。這或與感染后人群中和抗體水平升高，易感人群基數(shù)減少有關(guān)。研究表明[13]，自然感染EV71(B或C基因型)的血清對(duì)B和C流行株均有較高抗體滴度(≥1∶512)。姚昕等[14]對(duì)HMFD血清流行病學(xué)的調(diào)查資料結(jié)果顯示感染后產(chǎn)生的EV71中和抗體可有效預(yù)防EV71再次感染。每年的5-7月出現(xiàn)流行高峰，或因較為濕熱的氣候條件腸道病毒更容易生存，復(fù)制且傳播[15]。2011年和2014年在10-11月出現(xiàn)的小幅度反彈可能與福建省秋季氣候仍然較高有關(guān)。地區(qū)分布上，感染人群主要集中在廈門、福州、南平、和泉州4個(gè)地區(qū)，其中，廈門的發(fā)病率最高，年平均為7.77/10萬。廈門2010年發(fā)病率為32.70/10萬，遠(yuǎn)高于其他地市，將2010年全省數(shù)據(jù)剔除后南平地區(qū)以年平均4.47/10萬的發(fā)病率居首位，且2013-2015年連續(xù)3年發(fā)病率居全省首位，需要加強(qiáng)關(guān)注。人群中，感染主要集中在1到3歲低齡兒童，以男童為主，與陸璐等[16]對(duì)寧波地區(qū)的研究結(jié)果一致。研究表明[17]，EV71母?jìng)骺贵w雖可對(duì)嬰幼兒產(chǎn)生免疫保護(hù)效果，但下降迅速，2月齡時(shí)抗體陽性率為50%，6～7月齡母?jìng)骺贵w基本消失。而低齡兒童自身的免疫系統(tǒng)又尚未發(fā)育完善，造成該部分人群EV71感染的高發(fā)。職業(yè)分布以散居兒童為主，大致呈逐年上升的趨勢(shì)，其次為幼托兒童基本呈現(xiàn)逐年下降，與陳小英等[18]對(duì)手足口病在這兩種職業(yè)發(fā)病趨勢(shì)的描述相反。EV71感染和HMFD在在這兩類人群中流行趨勢(shì)是否存在差異尚需進(jìn)一步研究。從HMFD中EV71構(gòu)成比例分布來看(如圖3),EV71平均占比為42.86%，重癥中EV71占比更是高達(dá)73.94%(χ2=732.0645，P<0.0001)，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，EV71的預(yù)防對(duì)減少HMFD重癥顯得尤為重要。

VP1基因序列的進(jìn)化分析顯示，輕癥，重癥以及死亡病例在進(jìn)化樹上無規(guī)律散在分布，提示EV71引起的臨床差異可能與VP1區(qū)的基因序列無關(guān)。目前國內(nèi)外的研究對(duì)臨床表現(xiàn)為普通手足口病和具有神經(jīng)毒性的EV71的VP1區(qū)基因序列有無差異尚未有統(tǒng)一定論[19]。福建株在進(jìn)化樹上與周邊省份毒株及疫苗株位于同一個(gè)分枝上(如圖4)，均為C4a亞型。bootstrap 值為100，表明分群結(jié)果可靠。楊秀惠[20]，陳煒[21]等研究均表明福建省流行的EV71屬于C4a亞型。事實(shí)上，2004年以來，中國大陸報(bào)道的EV71流行株均為C4亞型，并未發(fā)現(xiàn)其它亞型，EV71在大陸地區(qū)的傳播流行或許存在時(shí)間和空間上的限制[22]。滅活疫苗的免疫效果更多地取決于流行株和疫苗株的抗原相關(guān)性，往往對(duì)同型病毒感染有效，對(duì)異型病毒感染效果較差[23], 近幾年福建地區(qū)流行的EV71與疫苗株屬于同一個(gè)基因亞型為疫苗的應(yīng)用提供了基礎(chǔ)。福建株與疫苗株(H07)差異性比較中可以發(fā)現(xiàn)，2010年至2015年，福建株核苷酸差異逐年增大，而氨基酸差異未有明顯變化趨勢(shì)，表明隨時(shí)間距離的增加，核苷酸變異也相應(yīng)增多，氨基酸差異基本保持穩(wěn)定，但有出現(xiàn)抗原漂移的可能，因而需要對(duì)VP1區(qū)的關(guān)鍵免疫位點(diǎn)加以關(guān)注。VP1是EV71病毒的主要保護(hù)性中和位點(diǎn)區(qū)域，李建強(qiáng)等[11]在對(duì)EV71的抗原表位預(yù)測(cè)中得出抗原表位可能分布于90-120,150-170,200-240，及230-250氨基酸之間。另有研究認(rèn)為，VP1區(qū)SP55(163-177)和SP70(208-222)為具有中和效果多肽，SP31-SP33(91-111)為病毒特異性多肽，145-159為驗(yàn)證過的CD4+T細(xì)胞表位[24]。本研究以疫苗株為參照，將福建株在SP31-SP33、 SP55 、SP70、145-159 4個(gè)免疫表位的氨基酸序列作了分析(如表2)，發(fā)現(xiàn)僅個(gè)別氨基酸發(fā)生突變，且變異在年度上未發(fā)現(xiàn)規(guī)律性。HMFD中EV71構(gòu)成比例分布的變化(見圖3)與VP1區(qū)的4個(gè)免疫表位間的氨基酸變異未發(fā)現(xiàn)關(guān)聯(lián)。

2010至2015年，EV71在大多數(shù)年份，仍是HMFD流行高峰期的優(yōu)勢(shì)血清型別，是導(dǎo)致HMFD重癥死亡的主要腸道病毒，但EV71尚能夠引起腦炎、無菌性腦膜炎、皰疹性咽峽炎等一系列臨床癥狀，盡管HMFD的發(fā)病人數(shù)巨大，但本研究中數(shù)據(jù)仍不能夠全面反映EV71感染情況，需要進(jìn)一步的完善。

[1] Weng YW, Yan YS. Research progress on enterovirus 71[J].Chin J Zoonoses,2014,30(1):79-84. DOI:10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.01.017(in Chinese)

翁育偉，嚴(yán)延生.腸道病毒71型研究進(jìn)展[J]．中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2014，30(1)：79-84.

[2] Chan KP, Goh KT, Chong CY, et al. Epidemic hand, foot and mouth disease caused by human enterovirus 71, Singapore [J]. Emerg Infect Dis, 2003, 9(1):78-85. DOI:10.3201/eid1301.020112

[3] Herrero LJ, Lee CS, Hurrelbrink RJ, et al. Molecular epidemiology of enterovirus 71 in peninsular Malaysia, 1997-2000[J]. Arch Virol, 2003, 148(7): 1369-1385. DOI:10.1007/s00705-003-0100-2

[4] Ho M, Chen ER, Hsu KH, et al. An epidemic of enterovirus 71 infection in Taiwan. Taiwan Enterovirus Epidemic Working Group[J]. N Engl J Med, 1999, 341(13): 929-935. DOI:10.1056/NEJM199909233411301

[5] Yang F, Ren L, Xiong ZH, et al. Enterovirus 71 outbreak in the People's Republic of China in 2008[J]. Clin Microbiol, 2009, 47(7): 2351-2352. DOI:10.1128/JCM.00563-09

[6] Wang Y, Feng Z, Yang Y, et al. Hand, foot, and mouth disease in China: patterns of spread and transmissibility[J]. Epidemiology, 2011, 22(6): 781-792. DOI:10.1097/EDE.0b013e318231d67a

[7] Xing W, Liao Q, Viboud C, et al. Hand, foot, and mouth disease in China, 2008-12: an epidemiological study[J]. Lancet Infect Dis, 2014, 14(4): 308-318. DOI:10.1016/S1473-3099(13)70342-6

[8] Zhang Y, Tan X, Cui A, et al. Complete genome analysis of the C4 subgenotype strains of enterovirus 71: predominant recombination C4 viruses persistently circulating in China for 14 years[J]. PLoS One, 2013, 8(2): e56341. DOI:10.1371/journal.pone.0056341

[9] Zhang Y, Zhu Z, Yang W, et al. An emerging recombinant human enterovirus 71 responsible for the 2008 outbreak of hand foot and mouth disease in Fuyang city of China[J]. Virol J, 2010, 7(8): 94. DOI:10.1186/1743-442X-7-94

[10] Zhu FC, Meng FY, Li JX, et al. Efficacy, safety, and immunology of an inactivated alum-adjuvant enterovirus 71 vaccine in children in China: a multicentre, randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial[J]. Lancet, 2013, 381(9882): 2024-2032. DOI:10.1016/SO140-6736(13)61049-1

[11] Zhang JN, Shi NM, Luo FJ, et al. Advances in research on cross protection of enterovirus 71 vaccine[J].Chin J Biologicals,2015,28(6):648-653. DOI:10.13200/J.cnki.cjb.00941(in Chinese)

張軍楠，時(shí)念民，羅風(fēng)基，等.腸道病毒71型疫苗交叉保護(hù)能力的研究進(jìn)展[J]．中國生物制品學(xué)雜志，2015,28(6)：648-653.

[12] National laboratory for poliomyelitis and measles.Hand foot and mouth disease laboratory manual[R].4thedition.Beijing:Chinese Center For Disease Control And Prevention,2010:20-26.

國家脊髓灰質(zhì)炎和國家麻疹實(shí)驗(yàn)室.手足口病實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)[R].4版.北京:中國疾病控制預(yù)防中心,2010:20-26.

[13] Kung SH, Wang SF, Huang CW, et al. Genetic and antigenic analyses of enterovirus 71 isolates in Taiwan during 1998-2005 [J].Clin Microbiol Infect, 2007,13 (8):782-787. DOI:10.1111/i.1469-0691.2007.01745.x

[14] Yao X, Mao QY，Liang ZL. Progress in research on enterovirus 71 vaccine[J].Chin J Biologicals,2011,24(2):233-236. DOI:10.13200/J.cjb.2011.02.115.yaox.021(in Chinese)

姚昕，毛群穎，梁爭(zhēng)論.腸道病毒71型疫苗的研發(fā)現(xiàn)狀及進(jìn)展[J]．中國生物制品學(xué)雜志，2011,24(2):233-236.

[15] Lin XY, Zhao SY, Qi ZH, et al. Current characteristics of hand-foot-mouth disease and relationship with meteorological factorsin Hangzhou in 2014[J].Chin Gen Pract,2016,14(7):1153-1158. DOI:10.16766/j.cnki.issn,1674-4152.2016.07.030(in Chinese)

林先耀，趙仕勇，祁正紅，等.2014年杭州地區(qū)手足口流行病學(xué)特點(diǎn)及與氣象的相關(guān)性研究[J]．中華全科醫(yī)學(xué)，2016,14(7):1153-1158.

[16] Lu L, Zhang LJ, Rong JR.Analysis of epidemiological and etiological features of HMFD in Jiangdong district during 2012-2014[J].Chin J Health Lab Tec,2016,26(8):1180-1181(in Chinese)

陸璐，張立軍，戎江瑞.2012-2014年江東區(qū)手足口病流行和病原學(xué)特征分析[J]．中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2016,26(8)：1180-1181.

[17] Luo ST, Chiang PS, Chao AS, et al. Enterovirus 71 maternal antibodies in infants, Taiwan[J]. Emerg Infect Dis, 2009, 15(4): 581-584. DOI: 10.3201/eid1504.081550

[18] Chen XY, Zhang Y, Liu F, et al. Epidemiology of hand-foot-mouth disease during 2010-2014 and incidence prediction in 2015 in Baoji,Shanxi[J].Dis surveillance,2016,31(4):298-302(in Chinese)

陳小英，張義，劉峰，等.2010-2014年陜西省寶雞市手足口病流行特征分析及2015發(fā)病趨勢(shì)預(yù)測(cè)[J].疾病監(jiān)測(cè)，2016,31(4):298-302.

[19] Zhang Y, Tan XJ, Wang HY, et al. An outbreak of hand, foot, and mouth disease associated with subgenotype C4 of human enterovirus 71 in Shangdong, China[J]. J Clin Virol, 2009, 44(4): 262-267. DOI: 10.1016/j.jcv.2009.02.002.

[20] Yang XH, He JX, Yan YS, et al. Etiological diagnosis and analysis of an outbreak of hand-foot-mouth disease[J]. Chin J Zoonoses,2007,23(4):323-326(in Chinese)

楊秀惠,何家鑫,嚴(yán)延生,等.一起手足口病暴發(fā)的病原學(xué)診斷與分析[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào),2007,23(4):323-326.

[21] Chen W, Zhou CHH, Zhang YJ, et al. Genetic characterization of the VP1 region of enterovirus 71 strains isolated during 2010 to 2011 in Fujian,China [J]. Chin Viral Dis,2013,3(1):32-36(in Chinese)

陳煒,周朝輝,張擁軍,等.福建省2010—2011年腸道病毒71型VP1區(qū)基因特征分析[J].中國病毒病雜志,2013,3(1):32-36.

[22] Li YY, Zhu RN, Qian Y, et al. Comparing enterovirus 71 with coxsackievirus A16 by analyzing nucleotide sequences and antigenicity of recombinant protein of VP1s and VP4s[J]. BMC Microbiol, 2011, 11(1): 1-10. DOI:10.1186/1471-2180-11-246

[23] Li M,Yin Y, Li JT. An overview of the evolution of Ev71 vaccine[J].J Biomedical Eng, 2010,27(4):933-936(in Chinese)

李明，尹怡.EV71疫苗的研究進(jìn)展[J].生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志，2010,27(4):933-936.

[24] Liu G, Yao X, Li FX. Progress of research on vaccine of Enterovirus[J].J Pharm Anal, 2009,29(11):1973-1975. DOI:10.16155/j.0254-1793.2009.11.026(in Chinese)

劉剛，姚昕，李鳳祥.EV71疫苗研究進(jìn)展[J].藥物分析雜志，2009,29(11):1973-1975.

Epidemiology and genetic characteristics of EV71 in Fujian Province,China

HE Wen-xiang, ZHANG Yong-jun, CHEN Guang-min, ZHU Ying, CHEN Wei, WENG Yu-wei

(PriorityLaboratoryforZoonosesResearchofFujian，F(xiàn)ujianCenterforDiseaseControlandPrevention,Fuzhou350001,China)

For investigating the epidemiology and genetic characteristics of enterovirus 71(EV71) in Fujian from 2010 to 2015, we analyzed the surveillance data of EV71 and sequenced VP1 genes of 72 EV71 strains randomly picked from the past 6 years. The overall infection rate was gradually down and one incidence peak (from May to July) was observed each year. Major infectious population were focused on Xiamen,Fuzhou,Nanping and Quanzhou, the ages ranged from one to three years old. Scattered children were the most infected ones. The proportion of EV71 in the severe case was higher than in the HMFD(χ2=732.064 5，P<0.000 1).EV71 circulated from 2010 to 2015 in Fujian Province was belonged to subgenotype C4a in consistent with vaccine strain (H07). Compared with the VP1 of vaccine strains, the divergence of complete VP1 nucleotide sequence was gradually expanding as time distance increased, but the sequence of amino acid was not found obvious difference. Variations in 4 key immune epitopes of amino acid had not appeared a regular pattern in year and not consistent with the trend of proportion of EV71 in HMFD. As a result, we considered the epidemiology characteristics of EV71 in Fujian was obvious, 72 strains still belonged to C4a subgenotype and had no outstanding antigenic drift or mutation. Extensive epidemiology surveillance and genetic characteristic are needed for the application of EV71 vaccine.

enterovirus 71; epidemiology; genetic characteristics; vaccine; prevention

Weng Yu-wei;Email:wengywfjcdc@aliyun.com

10.3969/j.issn.1002-2694.2017.02.009

國家級(jí)科技發(fā)展研究計(jì)劃(2011AA02A114)資助

翁育偉，Email:wengywfjcdc@aliyun.com

福建省人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建省疾病控制預(yù)防中心，福州 350001

R373

A

1002-2694(2017)02-0136-07

2016-09-30 編輯：李友松

Supported by the National Science and Technology Development Program of China(No.2011AA02A114)