DN不同中醫證型NF-κB信號通路相關細胞因子的檢測及意義*

薛雄燕，朱嫦琳，潘練華，黃少珍，李煒煊

(廣東省佛山市第一人民醫院檢驗科 528000)

DN不同中醫證型NF-κB信號通路相關細胞因子的檢測及意義*

薛雄燕，朱嫦琳，潘練華，黃少珍，李煒煊△

(廣東省佛山市第一人民醫院檢驗科 528000)

目的 探討糖尿病腎病(DN)不同中醫證型核因子-κB(NF-κB)通路相關細胞因子的表達差異及其臨床意義。方法 選取該院146例DN患者，按中醫辨證進行分型，檢測血清中腫瘤壞死因子α(TNF-α)及白細胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8水平，并與62例健康體檢者(對照組)比較。結果 不同中醫證型DN各組的TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平比較，均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。各個證型DN患者中TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。隨著DN病程進展，各細胞因子水平均呈逐步升高的趨勢，且DN不同證型升高的幅度與時間不一致。結論 NF-κB通路相關細胞因子TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8與DN不同中醫證型具有相關性，可能在DN不同證型的發生、發展中起一定的作用。

糖尿病腎病；NF-κB；細胞信號通路；細胞因子類；中醫證型

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是終末期腎病最常見的致病原因和糖尿病致死的主要原因之一[1]。研究發現，DN患者的外周血單個核細胞的核因子-κB(NF-κB)與無并發癥的糖尿病患者及健康人之間有明顯差異[2]，提示NF-κB在DN的發生、發展中有重要作用。由于直接檢測NF-κB不易在臨床中開展，本研究通過檢測不同中醫證型DN患者NF-κB信號通路相關細胞因子的水平及其在不同病程的變化，進一步闡明NF-κB在DN發生、發展中的作用，為DN證型實質的研究提供實驗依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年3月至2015年3月在本院就診并確診為DN Ⅲ～Ⅴ期的患者共146例(觀察組)，其中男83例，女63例；年齡42～73歲，平均(56.13±8.74)歲；糖尿病病程10～24年，平均(13.47±6.88)年；DN病程0.25～8.00年，平均(2.18±0.95)年；納入病例均符合《腎臟病學》診斷標準[3]，其中Ⅲ期82例，Ⅳ期43例，Ⅴ期21例。排除合并原發性腎臟疾病、嚴重心血管疾病、嚴重肝臟疾病、孕婦及哺乳期婦女和腫瘤患者。選擇同期本院健康體檢者62例作為對照組，其中男36例，女26例；年齡44～71歲，平均(55.87±7.96)歲。兩組對象性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 中醫辨證分型標準 參照中華中醫藥學會腎病分會2007年的試行方案[4]，綜合各種證型及臨床表現，DN最常見類型可歸納為氣陰兩虛血瘀型(48/146，32.88%)、陰陽兩虛血瘀型(52/146，35.62%)、脾腎陽虛濕濁瘀阻型(18/146，12.33%)及其他證型(28/146，19.18%)4型。

1.2.2 檢測方法 采集兩組對象靜脈血3 mL，3 000 r/min離心15 min，分離上層血清，置于-80 ℃保存待測。腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白細胞介素(interleukin，IL)-6和IL-8的測定采用德國西門子公司的全自動免疫分析儀(型號：Immune 1000)及配套試劑；IL-1的測定采用的酶聯免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)，試劑盒購自美國Abcam公司(型號：AB2202)；酶標儀購自美國BioTek公司(型號：ELX-800)。以上檢測均嚴格按照說明書操作。

2 結 果

2.1 DN患者的病程分期情況 146例DN患者的病程分期情況，見表1。

2.2 不同中醫證型DN中NF-κB通路相關細胞因子的表達比較 DN不同證型的TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。陰陽兩虛血瘀型的各個細胞因子水平明顯高于其他3種證型(P<0.05)；氣陰兩虛血瘀型的TNF-α、IL-6和IL-8明顯高于脾腎陽虛濕濁瘀阻型和其他證型(P<0.05)，見表2。

表1 DN患者的病程分期情況[n(%)]

表2 不同中醫證型DN中NF-κB通路相關細胞因子的表達比較

a：P<0.05，與對照組比較；b：P<0.05，與陰陽兩虛血淤型比較；c：P<0.05，與氣陰兩虛血瘀型比較。

2.3 NF-κB通路相關細胞因子在DN不同階段的水平 隨著DN病程進展，各細胞因子水平均呈逐步升高的趨勢。DN Ⅲ期時，陰陽兩虛血瘀型TNF-α及IL-1水平顯著高于其他各組；至DN Ⅴ期時，氣陰兩虛血瘀型TNF-α水平快速升高，與陰陽兩虛血瘀型基本一致，其余兩型升高不明顯。而各型IL-1及IL-6均穩步上升。IL-8水平在DN Ⅲ期時各證型比較，差異無統計學意義(P>0.05)；至Ⅴ期時，陰陽兩虛血瘀型升高最明顯，其次為氣陰兩虛血瘀型，其余兩型升高不明顯，見圖1。

圖1 NF-κB通路相關細胞因子在DN不同階段的變化

3 討 論

DN是終末期腎病最常見的致病原因，也是糖尿病致死的主要原因之一，在我國，約有30%的糖尿病患者最終進展為DN[5]。由于DN可造成患者慢性腎衰竭，需要進行血液透析與腎移植，給患者家庭帶來巨大的經濟和心理負擔。DN在中醫學中屬下消、腎消范疇，目前現代醫學尚未發現滿意的治療方法，中醫是DN診治良好的補充手段。從長期的臨床工作中發現，DN最常見類型可歸納為氣陰兩虛血瘀、陰陽兩虛血瘀、脾腎陽虛濕濁瘀阻及其他證型，而氣陰兩虛血瘀型最為常見。有研究指出，DN的病理分子機制與NF-κB信號通路密切相關，NF-κB及其相關基因作為一種轉錄因子調節眾多基因表達，參與DN的發生、發展[6]。Wang等[7]研究發現，臨床期DN患者、無并發癥的糖尿病患者和健康人之間NF-κB通路相關細胞因子TGF-β水平有顯著差異，提示NF-κB活性異常在DN發生、發展中可能起著重要作用。此外，臨床相關分析表明，NF-κB活性與糖化血紅蛋白水平及血漿脂質的超氧化物標志物呈正相關[8]，提示NF-κB與DN的嚴重程度密切相關，因此，本研究選取NF-κB通路相關細胞因子進行測定，進一步明確NF-κB在DN發生、發展中的作用。

NF-κB通路相關細胞因子包括TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8等。NF-κB活化可增強TNF-α和IL-1的基因轉錄，使二者產生和釋放增多，此外，NF-κB活化后還可使IL-6和IL-8產生和釋放增多，導致炎癥信號進一步放大[9]，因此，TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平的變化可反映NF-κB信號通路的激活情況。本研究結果顯示，所有證型的DN患者血清中TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平均明顯高于對照組，提示DN患者體內NF-κB通路被激活，導致通路相關細胞因子分泌增加。其中，陰陽兩虛血瘀型的患者TNF-α、IL-1及IL-8水平均明顯高于其他3種證型，IL-6水平與氣陰兩虛血瘀型患者相當，明顯高于脾腎陽虛濕濁瘀阻型和其他證型，提示NF-κB與DN的發生及DN中醫證型具有一定的相關性。

Dabhi等[10]研究顯示，TNF-α可刺激腎小球系膜細胞產生氧自由基，可激活IL-1、IL-6等細胞因子，促進腎小球細胞釋放膠原酶，促進DN發病。本研究也發現隨著DN病程進展，各細胞因子水平均呈逐步升高的趨勢，與文獻[11-12]報道一致，DN不同病程分期中，陰陽兩虛血瘀型TNF-α水平升高最為明顯，各組IL-1及IL-6均穩步上升，其發生機制可能與TNF-α和IL-6可通過促進系膜細胞和血管內皮細胞增生而導致腎小球硬化有關。IL-1是重要的炎性因子之一，也是熱原質成分，具有致熱和介導炎癥的作用，可受各種刺激因子誘導，與DN的病理過程密切相關[13]。IL-6是一種炎性反應啟動因子，同時具有促炎和抗炎的作用，在DN各個證型患者血清中水平顯著升高。但與氣陰兩虛血瘀型患者TNF-α水平至DN Ⅴ期時才快速升高的變化不一致的是，IL-6在氣陰兩虛血瘀型DN中升高程度與陰陽兩虛血瘀型基本一致，不可作為鑒別這兩種證型的指標，同時也提示IL-6升高可能比TNF-α發生更早。IL-8主要由單核巨噬細胞產生，具有中性粒細胞趨化、脫粒、釋放溶酶、加強炎癥防護等作用。有研究表明，IL-8在DN早期開始增高，并隨著DN的發展逐漸升高[12]。本研究結果發現，IL-8在DN各個證型中均明顯升高，在DN Ⅲ期時各型無明顯差異，至Ⅴ期時，陰陽兩虛血瘀型升高最明顯，其次為氣陰兩虛血瘀型，其余兩型升高不明顯，與TNF-α變化規律基本一致，可作為DN不同中醫證型的鑒別指標，用于指導治療。

綜上所述，NF-κB通路相關細胞因子與DN不同中醫證型具有相關性，在DN不同證型的發生、發展起一定作用，可作為DN不同中醫證型的鑒別指標。然而，由于DN的中醫辨證分型缺乏統一性，本研究中醫分型參考DN患者虛證與實證情況并結合長期的臨床工作經驗，將納入研究的DN病例進行分型，未包括DN所有中醫證型，因此，仍需加大樣本量進行研究，進一步探討NF-κB在DN發生、發展過程中的確切機制。

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Detection and significance of cytokines related to NF-κB signaling pathway in patients with different TCM syndrome types of diabetic nephropathy*

XueXiongyan,ZhuChanglin,PanLianhua,HuangShaozhen,LiWeixuan△

(DepartmentofClinicalLaboratory,FoshanMunicipalFirstPeople′sHospital,Foshan,Guangdong528000,China)

Objective To explore the expression difference of cytokines related to nuclear factor kappa B (NF-κB) signaling pathway among different traditional Chinese medicine (TCM) syndromes in the patients with diabetic nephropathy (DN).Methods Serum tumor necrosis factor-α (TNF-α),interleukin-1 (IL-1),interleukin-6 (IL-6) and interleukin-8 (IL-8) in 146 patients with DN and 62 individuals undergoing healthy physical examination in the control group were measured.Results The levels of serum TNF-α,IL-1,IL-6 and IL-8 in various DN groups were significantly higher than those in the control group (P<0.05).The levels of serum TNF-α,IL-1,IL-6 and IL-8 were significantly different among groups of different TCM syndromes (P<0.05).With the progression of DN,all cytokines levels showed a gradually increasing trend,moreover the increased extents and time were different in different TCM syndrome types of DN.Conclusion The levels of serum TNF-α,IL-1,IL-6 and IL-8 related to NF-κB signaling pathway are correlated with different TCM syndromes types and may play a role in the occurrence and progression of different TCM syndrome types of DN.

diabetic nephropathy;NF-kappa B;cell signaling pathway;cytokines;traditional Chinese Medicine syndrome

??·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.07.011

佛山市醫學類科技攻關項目(2014AB00287)。 作者簡介：薛雄燕(1977-)，副主任技師，本科，主要從事醫學臨床檢驗及細胞因子研究。△

，E-mail:lwx21cn@163.com。

R446.1

A

1671-8348(2017)07-0898-03

2016-07-19

2016-11-17)