熟地黃多糖誘導肝癌細胞凋亡及對STAT3信號通路的影響

董 靜， 孫 陽， 吳勃巖， 王 雪

熟地黃為生地黃的炮制品，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具有滋陰補血、填精益髓的功效。臨床上主要用于治療肝腎陰虛、腰膝酸軟、血虛萎黃等病癥，并對免疫功能損傷有較好的療效。熟地黃多糖(rehmannia glutinosa polysaccharide, RGP)作為熟地黃的有效成分之一，具有多方面藥理作用，包括增強機體的造血功能、降血壓、降血糖、抗氧化等，并且具有保護肝、腎等主要臟器的作用[1]。Huang等發(fā)現(xiàn)，RGP能有效促進淋巴結(jié)中抗原的暴露，達到誘導保護和長期免疫的作用[2]。Xu等證實，RGP可促進自然殺傷細胞(natural killer cell, NK)活化并抑制小鼠體內(nèi)腫瘤[3]。本課題組前期基礎(chǔ)工作發(fā)現(xiàn)，RGP可調(diào)節(jié)腫瘤細胞中bcl-2，cyt-c及caspase-3的表達，從而促進細胞凋亡[4]。本研究以H22荷瘤小鼠作為體內(nèi)抗腫瘤的實驗模型，探究RGP對細胞凋亡關(guān)鍵因子[信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄活化因子(signal transducers and activators of transcription, STAT3)]和凋亡抑制基因生存素(Survivin)的影響，為RGP的臨床應用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1動物 ICR種小鼠50只，雌雄各半，清潔級，體質(zhì)量18～22 g(許可證號：SCXK黑2013004，由黑龍江中醫(yī)藥大學GLP中心提供)。

1.1.2瘤株與主要試劑 H22肝癌腹水型瘤株(北京腫瘤研究所)，由ICR小鼠腹水傳代。熟地黃(河南同仁堂公司)；RGP(黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院提取)；環(huán)磷酰胺(cytoxan，CY)(批號：131011，上海如吉生物科技發(fā)展有限公司)；Survivin試劑盒(批號：BA1420-1)、STAT3試劑盒(批號：BA0621)、TUNEL試劑盒(批號：MK1023)及BCA蛋白定量試劑盒(批號：AR0146)(武漢博士德生物工程有限公司)；STAT3(批號：TA347058)及Survivin(批號：TA301427)多克隆抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。

1.1.3儀器 顯微鏡(日本尼康公司)；石蠟切片機(HM355s，美國Thermo公司)；透射電鏡(Tecnai-G2，荷蘭Philips公司)；圖像采集系統(tǒng)顯微鏡(BH2-RFCA，日本Olympus公司)。

1.2方法

1.2.1RGP的制備 利用水提醇沉法提取，沉淀經(jīng)無水乙醇、丙酮、無水乙醚依次洗滌后，再經(jīng)過三氯乙酸溶液脫蛋白后進行烘干，制備RGP。用純凈水分別配制不同質(zhì)量濃度(1 000，500，250 mg/mL)的RGP溶液，置于4 ℃冰箱保存，用時混勻。

1.2.2實體瘤造模 無菌環(huán)境下，將小鼠肝癌H22瘤株接種于小鼠腹腔，待7 d后小鼠腹部豐潤時處死，消毒后抽取腹水，生理鹽水1∶1混勻，臺盼藍染色后計算活細胞數(shù)>95%，制備密度為1×107mL-1的細胞懸液，每只0.2 mL皮下接種于小鼠右側(cè)腋窩[5]。

1.2.3RGP對小鼠移植型腫瘤生長的抑制作用 將50只造模小鼠隨機均分為5組，稱體質(zhì)量，分為模型組、CY組及高、中、低劑量RGP組。接種24 h后首次給藥，模型組以90 mg/kg生理鹽水灌胃；CY組采用40 mg/kg的CY隔日腹腔注射，共3次；高、中、低劑量RGP組分別以1 000，500，250 mg/kg的RGP灌胃。連續(xù)給藥10 d，末次給藥后于小鼠腹部注射6%淀粉溶液1 mL,24 h后注射新鮮配制的1%雞紅細胞懸液2 mL,30 min后以PBS溶液2 mL腹腔注射，輕揉腹部2 min，斷髓法處死小鼠，稱體質(zhì)量，剝離瘤組織、胸腺及脾臟。瘤組織固定，酒精消毒后抽取腹腔液涂于載玻片上，固定晾干后經(jīng)Giemsa染色，油鏡下觀察巨噬細胞吞噬雞紅細胞的情況。

1.2.4計算抑瘤率、胸腺(脾臟)指數(shù)、吞噬指數(shù)及吞噬百分率 各指標按以下公式計算：

抑瘤率(%)=[(模型組平均瘤質(zhì)量-用藥組平均瘤質(zhì)量)/模型組平均瘤質(zhì)量]×100%

胸腺(脾臟)指數(shù)=胸腺(脾臟)質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)×100%

吞噬百分率(%)=吞噬紅細胞的巨噬細胞數(shù)/觀察記錄的吞噬細胞總數(shù)×100%

吞噬指數(shù)=被吞噬的紅細胞總數(shù)/觀察記錄的吞噬細胞總數(shù)×100%

1.2.5對凋亡指數(shù)的影響 腫瘤組織常規(guī)石蠟切片并行H-E染色，采用經(jīng)典原位末端標記法進行測定，具體方法參照試劑盒說明書進行。經(jīng)試劑盒處理后，測定凋亡指數(shù)(apoptosis index, AI)，每張切片分別選取5個陽性細胞密度高的高倍鏡視野，記錄凋亡(陽性)細胞數(shù)和總細胞數(shù)，二者的比值即為AI。陽性表達的細胞以細胞核出現(xiàn)棕黃(褐)色細微顆粒為標志。

1.2.6對STAT3及Survivin表達的影響 采用PV二步免疫組織化學法將經(jīng)甲醛固定的標本常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片，PBS沖洗3次；3% H2O2孵育10 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗；滴加一抗，4 ℃孵育過夜，PBS沖洗3次；滴加二抗，37 ℃孵育30 min，PBS沖洗；DAB室溫顯色，蒸餾水清洗；蘇木精復染，脫水，二甲苯透明封片，光學顯微鏡下觀察，測定STAT3及Survivin的表達情況(按試劑盒說明書操作進行)。STAT3表達的陽性信號是以胞質(zhì)出現(xiàn)棕褐(黃)色細顆粒為標志；Survivin表達的陽性信號是以細胞質(zhì)或細胞核出現(xiàn)棕黃色細顆粒為標志。應用Image-proplus 6.0分析軟件測定各組中的STAT3及Survivin陽性細胞，統(tǒng)計分析陽性表達的積分吸光度。所有免疫組織化學切片均采用雙盲法、由2名病理科教師獨立觀察，細胞計數(shù)測定時均不顯示組別等資料。

1.2.7Western-blot法檢測STAT3及Survivin蛋白表達 連續(xù)給藥10 d，末次給藥24 h后斷髓法將小鼠處死，立即剝離瘤組織，稱體質(zhì)量，細胞裂解液提取蛋白，BCA法測定蛋白濃度。模型組、CY組及中劑量RGP組各取樣品20 μg上樣，SDS-聚丙烯酰胺電泳分離蛋白并轉(zhuǎn)至PVDF膜上，封閉液室溫密封10 min，再用抗體反應液處理后的一抗4 ℃孵育過夜，洗膜。經(jīng)洗滌3次，進行ECL發(fā)光顯影液顯影，應用軟件Image J進行分析處理。采用STAT3和Survivin的條帶灰度值與β-actin條帶灰度值的比值(相對灰度值)表示腫瘤組織中STAT3和Survivin的表達水平。

2 結(jié) 果

2.1藥物對H22荷瘤小鼠抑瘤率、免疫器官指數(shù)及巨噬細胞功能的影響

2.1.1對H22荷瘤小鼠抑瘤率的影響 高、中、低劑量RGP組均能抑制H22荷瘤小鼠腫瘤細胞的生長，以中劑量組的抑瘤效果最明顯，抑瘤率為45.69%，而CY組的抑瘤率為58.12%，高于RGP各劑量組(表1)。

2.1.2對H22荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)的影響 各劑量RGP組小鼠的胸腺指數(shù)與模型組比較，差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；CY組小鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)與模型組比較均降低，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；中劑量RGP組小鼠脾臟指數(shù)與模型組比較明顯升高，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但低、高劑量RGP組脾臟指數(shù)與模型組比較，差別無統(tǒng)計學意義(表1)。

2.1.3對H22荷瘤小鼠巨噬細胞功能的影響 與模型組比較，各劑量RGP組均可提升小鼠的腹腔吞噬指數(shù)和吞噬百分率，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而CY組小鼠的腹腔吞噬指數(shù)和吞噬百分率則明顯降低(P<0.01，表1)。

表1 藥物對H22荷瘤小鼠抑瘤率、免疫器官指數(shù)及巨噬細胞功能的影響

n=10. RGP：熟地黃多糖. 與模型組比較，☆：P<0.05，☆☆：P<0.01.

2.2對瘤體內(nèi)細胞形態(tài)及凋亡指數(shù)的影響 瘤組織經(jīng)H-E染色后，光學顯微鏡觀察顯示，模型組腫瘤中血管豐富，核分裂像較多；CY組及RGP組腫瘤中血管數(shù)量少，細胞排列疏松。高、中、低劑量RGP組的凋亡指數(shù)分別為(11.2±0.95)，(12.9±0.74)及(9.80±1.03)，與模型組比較，均顯著升高(P<0.01，表2，圖1)，以中劑量組最高。

RGP： 熟地黃多糖. A：模型組；B：環(huán)磷酰胺組；C：高劑量RGP組；D：中劑量RGP組；E：低劑量RGP組.圖1 模型組、環(huán)磷酰胺組及RGP各組腫瘤組織中凋亡指數(shù)的變化(H-E ×200)Fig 1 Changes of apoptosis index in tumor tissue of model group、cytoxan group and RGP group(H-E ×200)

2.3RGP對H22荷瘤小鼠瘤體內(nèi)STAT3和Survivin表達水平的影響

2.3.1對瘤體內(nèi)STAT3表達的影響 STAT3蛋白的表達主要是在細胞質(zhì)出現(xiàn)棕褐(黃)色細顆粒(圖2)。積分光密度值(integrated optical density，IOD)結(jié)果比較顯示，高、中、低劑量RGP組的STAT3的IOD分別為(17 241±2 024)，(16 094±2 297)及(18 066±1 214)，表現(xiàn)為中劑量RGP組對STAT3蛋白表達的抑制作用最強，與模型組比較，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；高、低劑量RGP組的STAT3的IOD均比模型組低，差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，表2)。

2.3.2對瘤體內(nèi)Survivin表達的影響 Survivin蛋白的表達主要表現(xiàn)為在細胞質(zhì)或細胞核出現(xiàn)棕黃色細顆粒(圖3)。比較IOD結(jié)果顯示，高、中、低劑量RGP組的Survivin的IOD分別(20 619±3 158)，(18 531±2 652)及(20 555±4 263)，與模型組比較，差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，表2)。

2.3.3Western-blot法檢測STAT3及Survivin蛋白表達量 各組均有STAT3或Survivin蛋白表達(圖4)，CY組和中劑量RGP組明顯低于模型組，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01，表3)。

RGP： 熟地黃多糖. A：模型組；B：環(huán)磷酰胺組；C：高劑量RGP組；D：中劑量RGP組；E：低劑量RGP組.圖2 模型組、環(huán)磷酰胺組及RGP各組瘤體內(nèi)STAT3表達水平( ×200)Fig 2 Expression of STAT3 in the model group、cytoxan group and RGP group( ×200)

分 組給藥量/(mg·kg-1)STAT3/IOD Survivin/IOD AI/%模型組-21184±317126129±42184.20±1.48環(huán)磷酰胺組4016785±873.4☆☆18229±628.8☆☆14.9±0.99☆☆RGP組100017241±2024☆20619±3158☆11.2±0.95☆☆50016094±2297☆☆18531±2652☆☆12.9±0.74☆☆25018066±1214☆20555±4263☆9.80±1.03☆☆

n=10. RGP：熟地黃多糖； STAT3：信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄活化因子； Survivin：生存素； AI：凋亡指數(shù)； IOD：積分光密度. 與模型組比較，☆：P<0.05，☆☆：P<0.01.

RGP： 熟地黃多糖. A：模型組；B：環(huán)磷酰胺組；C：高劑量RGP組；D：中劑量RGP組；E：低劑量RGP組.圖3 模型組、環(huán)磷酰胺組及RGP各組瘤體內(nèi)Survivin表達水平( ×200)Fig 3 Expression of Survivin in the model group, cytoxan group and RGP group( ×200)

CY:環(huán)磷酰胺； RGP： 熟地黃多糖.圖4 RGP對腫瘤組織中STAT3及Survivin蛋白表達量的影響Fig 4 Effect of RGP on STAT3 and Survivin protein expression in tumor tissue

Tab3Expression of STAT3 protein and Survivin protein in tumor tissue of each group

分 組STAT3相對灰度值Survivin相對灰度值模型組0.27±0.030.28±0.22環(huán)磷酰胺組0.10±0.04☆0.11±0.02☆熟地黃多糖組0.21±0.04☆0.21±0.02☆

與模型組比較，☆：P<0.01.

3 討 論

熟地黃被稱為“壯水之主，補血之君”，是優(yōu)良的補益延壽中藥?，F(xiàn)代藥理學研究也表明，熟地黃具有提高免疫、造血、抗腫瘤等諸多作用，其主要成分RGP可升高荷瘤小鼠的免疫器官指數(shù)(胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù))，從而發(fā)揮免疫功能。胸腺和脾臟屬于外周免疫系統(tǒng)，是產(chǎn)生抗體的重要器官，二者功能和結(jié)構(gòu)的異常將直接影響機體的免疫能力。胸腺是T淋巴細胞分化和成熟的場所，成熟的T細胞亞群再經(jīng)由血液及淋巴到達各外周免疫器官，發(fā)揮免疫作用。脾臟作為體內(nèi)最大的淋巴器官，不僅具有造血、過濾等功能，還具有接受免疫應激、產(chǎn)生免疫應答的作用，是細胞免疫和體液免疫中心。因此胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)是衡量人體免疫功能的重要指征。巨噬細胞是機體重要的免疫細胞，在抗腫瘤免疫中起著關(guān)鍵作用。張芮琪等發(fā)現(xiàn)，植物多糖可激活巨噬細胞，提高吞噬功能，提高非特異性細胞免疫，促進淋巴細胞轉(zhuǎn)化[6]。本實驗研究了RGP對荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)和巨噬細胞功能的影響，推測RGP可能通過激活巨噬細胞而加強吞噬活動、刺激T淋巴細胞發(fā)揮免疫功能，從而提高小鼠的免疫能力。Huang等發(fā)現(xiàn)，RGP不僅具有免疫刺激作用，還可增強樹突細胞的功能，具有成為疫苗佐劑的潛力，RGP在免疫方面的研究前景可觀[7]。

凋亡細胞的形態(tài)學改變是最直接、最可靠的指標。原位末端標記法作為一種敏感性高、特異性強的細胞凋亡檢測技術(shù)，能夠在組織切片上對凋亡細胞進行精準定位，從形態(tài)上更直觀地顯示細胞的凋亡情況[8]。光學顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，RGP可使腫瘤組織中血管數(shù)量減少，腫瘤細胞排列疏松，促進細胞凋亡。

細胞凋亡涉及一系列基因的激活、表達及調(diào)控。線粒體作為主要的場所在細胞凋亡過程中發(fā)揮著重要的作用，當收到凋亡信號指示時，線粒體會釋放多種死亡促進因子，如cyt-c，caspase-3級聯(lián)反應，導致細胞結(jié)構(gòu)蛋白被切割而凋亡。Survivin是抑制細胞凋亡蛋白家族的成員，經(jīng)常在腫瘤組織中過量表達，在正常分化組織中少見，因此Survivin被認為是腫瘤治療中的一個重要靶點[9-10]。Survivin可與細胞凋亡通路中的caspase特異性結(jié)合，抑制其活性，而caspase級聯(lián)反應作為凋亡推進的核心環(huán)節(jié)，被抑制后將阻礙細胞凋亡[11-13]。Mita等證實，Survivin不僅可抑制細胞凋亡，還可調(diào)節(jié)細胞周期，參與有絲分裂中紡錘體微管的形成，還與腫瘤干細胞相關(guān)，推測Survivin是抑制腫瘤干細胞增殖的潛在靶點[14-15]。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組Survivin的表達明顯升高，RGP組Survivin的表達下降，推測RGP可能具有通過抑制Survivin的表達而起到促進細胞凋亡的作用。

STAT3是STAT信號通路的重要成員，可參與JAK/STAT信號通路，與各種配體結(jié)合并激活白細胞介素6、腫瘤壞死因子和血管內(nèi)皮生長因子等，參與細胞凋亡、腫瘤細胞增殖、分化、血管形成及轉(zhuǎn)移侵襲等相關(guān)基因的表達，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[16-17]。在多種腫瘤組織中均發(fā)現(xiàn)STAT3過度異常表達，已廣泛報道于血液學和腫瘤學的相關(guān)研究中[18]。STAT3可由不同的生長因子、激素和細胞因子激活，活化的STAT3形成二聚體并轉(zhuǎn)移到細胞核，作為轉(zhuǎn)錄因子與特定DNA結(jié)合，直接作用于下游靶基因Survivin的啟動子，行使基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能，促進Survivin激活[19-20]。激活的Survivin直接抑制細胞凋亡中的最重要環(huán)節(jié)，即caspase級聯(lián)反應及cyt-c的釋放，阻礙了細胞凋亡進程，促使腫瘤細胞逃避凋亡而增殖[21-23]。在正常細胞中，STAT3的激活狀態(tài)僅能保持數(shù)分鐘至幾小時，持續(xù)活化、異常高表達的STAT3在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。Panni等發(fā)現(xiàn)，STAT3不僅作用于癌基因的表達，在免疫調(diào)節(jié)功能方面也有著關(guān)鍵作用[24]。

本研究證實，RGP有誘導腫瘤細胞凋亡的作用，可使凋亡指數(shù)明顯上升，可抑制STAT3活化，下調(diào)STAT3蛋白表達，并進一步抑制Survivin基因的表達，阻礙細胞凋亡caspase進程，說明RGP可能通過抑制STAT3信號轉(zhuǎn)導通路而促進細胞凋亡。本研究還發(fā)現(xiàn)，中劑量RGP組對抑制STAT3和Survivin蛋白表達更有利，促進腫瘤細胞凋亡的作用更強，高劑量RGP組促凋亡效果反而略低，其原因可能是當RGP超過一定濃度時，體內(nèi)的代謝副產(chǎn)物和原藥本身產(chǎn)生競爭抑制而不利于發(fā)揮藥物活性。RGP抗腫瘤的最佳劑量還需摸索，其促細胞凋亡的分子機制仍需進一步實驗加以明確。

[1] 王志江,魏國棟,馬思緹.地黃多糖的化學和藥理作用研究進展[J].實驗方劑學雜志, 2015,21(16):231-234.

[2] Huang Y,Qin T,Huang Y F,etal. Rehmannia glutinosa polysaccharide liposome as a novel strategy for stimulating an efficient immune response and their effects on dendritic cells[J].IntJNanomedicine, 2016,11:6795-808.

[3] Xu L,Zhang,W,Zeng L,etal.Rehmannia glutinosa polysaccharide induced an anti-cancer effect by activating natural killer cells[J/OL].IntJBiolMacromol, [2017-07-15]. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2017.07.090.

[4] 董 靜,吳勃巖,車艷新,等.熟地黃多糖誘導H22荷瘤小鼠細胞凋亡作用的研究[J].中醫(yī)藥信息,2015,32(4):32-34.

[5] 孫 陽,吳勃巖,車艷新,等.鱉甲煎丸誘導肝癌細胞凋亡及對STAT信號通路的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2016,27(4):849-851.

[6] 張芮琪,陳正禮,羅啟慧.黃芪多糖干預環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠的免疫功能[J].中國實驗動物學報,2015,23(4):389-394.

[7] Huang Y,Liu Z G,Bo R N,etal.The enhanced immune response of PCV-2 vaccine using Rehmannia glutinosa polysaccharide liposome as an adjuvant[J].IntJBiolMacromol, 2016,5(86):929-936.

[8] 佟俊杰,苗 清,王志國.TUNEL法和Annexin V-FITC流式細胞分析法檢測成纖維細胞凋亡的對比研究[J].口腔醫(yī)學,2014,34(1):12-15.

[9] Liu J L,Gao W,Kang Q,etal.Prognostic value of survivin in patients with gastric cancer:a systematic review with meta-analysis[J].PLoSOne,2013,8(8):71930.

[10] Altieri D C.New wirings in the survivin networks[J].Oncogene,2008,27(48):6276-6284.

[11] Bao W,Zhu F,Duan Y,etal.HtrA1 resensitizes multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cells by targeting XIAP[J].BiomedPharmacother,2015,70:97-102.

[12] Wu W Y,Kim H,Zhang C L,etal.Clinical significance of autophagic protein LC3 levels and its correlation with XIAP expression in hepatocellular carcinoma[J].MedOncol,2014,31(8):1-6.

[13] Caja L,Bertran E,Campbell J,etal.The transforming growth factor-beta (TGF-β) mediates acquisition of a mesenchymal stem cell-like phenotype in human liver cells[J].JCellPhysiol,2011,226(5):1214-1223.

[14] Mita A C,Mita M M,Nawrocki S T,etal.Survivin: key regulator of mitosis and apoptosis and novel target for cancer therapeutics[J].ClinCancerRes,2008,14(16):5000-5005.

[15] Evans J,Essex A,Hong X,etal.Wnt activity defines colon cancer stem cells and is regulated by the microenvironment[J].NatCellBiol,2015,12(5),468-476.

[16] Xiong A,Yang Z,Shen Y,etal.Transcription factor STAT3 as a novel molecular target for cancer prevention[J].Cancers(Basel), 2014,6(2):926-957.

[17] 高安定,林寶順,蘭小鵬.STAT3與腫瘤[J].中國生物化學與分子生物學報,2013,29(5):397-403.

[18] 韓春生.STAT3在腫瘤形成中的作用[J].中國實驗血液學雜志,2013,21(2):517-520.

[19] Carpenter R L,Lo H W.STAT3 target genes relevant to human cancers[J].Cancers(Basel),2014,6(2):897-925.

[20] Zhang M,Zhang X,Zhao S,etal.Prognostic value of survivin and EGFR protein expression in triple-negative breast cancer (TNBC) patients[J].TargetOncol,2014,9(4):349.

[21] Haura E B,Turkson J,Jove R. Mechanisms of disease:Insights into the emerging role of signal transducers and acti-vators of transcription in cancer[J].NatClinPractOncol,2005,2(6):315-320.

[22] 邵紅玲,許學亮.信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄活化因子5和Bax在非小細胞肺癌中表達的相關(guān)性研究[J].山西醫(yī)藥雜志,2012,41(8):762-764.

[23] 徐長華,鄒明花,張獻全. 3,3′-二吲哚甲烷阻斷STAT3通路影響卵巢癌細胞增殖、凋亡的實驗研究[J].第三軍醫(yī)大學學報,2014,36(16):1674-1678.

[24] Panni R Z,Sanford D E,Bellt B A,etal.Tumor-induced STAT3 activation in monocytic myeloid-derived suppressor cells enhances stemness and mesenchymal properties in human pancreatic cancer[J].CancerImmunolImmun, 2014,63(5):513-528.