自擬抑酸止痛方對胃潰瘍大鼠胃酸及胃蛋白酶的影響

王 璞 ，王長宏 ，劉明暉*， 趙樹華， 張 學，吳思宇 ，尚宇航 ，趙雨杰

(1.吉林大學臨床醫(yī)學院，吉林 長春 130021;2.吉林大學中日聯誼醫(yī)院 中醫(yī)科)

自擬抑酸止痛方對胃潰瘍大鼠胃酸及胃蛋白酶的影響

王 璞1，王長宏2，劉明暉2*， 趙樹華2， 張 學2，吳思宇1，尚宇航1，趙雨杰1

(1.吉林大學臨床醫(yī)學院，吉林 長春 130021;2.吉林大學中日聯誼醫(yī)院 中醫(yī)科)

胃潰瘍?yōu)榕R床常見病[1]，目前抑酸劑、胃黏膜保護劑[2,3]等西藥方案成熟，療效確切，但是價格偏貴、毒副作用大等問題仍不容忽視，且停藥后復發(fā)率高，流行病學數據顯示達50%-70%。近年來，中藥對胃潰瘍治療作用的實驗研究取得了諸多進展[4]，顯示出獨特的優(yōu)勢。本課題采用實驗室常用的醋酸涂抹法復制大鼠消化性潰瘍模型，以胃液量、胃酸度及胃蛋白酶活性為觀察指標，對抑酸止痛方治療消化性潰瘍的療效及作用機理進行探討，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥材與試劑 海螵蛸、乳香、沒藥，由吉林大學中日聯誼醫(yī)院中藥房提供，經執(zhí)業(yè)中藥師鑒定均為地道藥材，質量合格；奧美拉唑腸溶膠囊(沈陽澳華制藥股份有限公司，批號：20121013，規(guī)格：20 mg/粒)；酚酞(天津永晟精細化工有限公司，批號：20130428，分析純)；胃蛋白酶測試盒(南京建成科技有限公司，批號：20140310)；NaOH(齊齊哈爾化工總廠，批號：20130528)，水合氯醛(青島金沙字庫化工廠，批號：40448)。

1.2 實驗動物 健康Wistar大鼠60只，SPF級，雌雄各半，體重200±20 g，由吉林大學基礎醫(yī)學院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(吉)20070003，動物飼養(yǎng)：恒溫22℃，大鼠自由進食進水，室內保持自然光暗周期。

1.3 儀器 MP51001型電子秤(上海橫平科學儀器有限公司)；5810型低溫高速離心機(德國Eppendorf公司)；BlueStar Plus紫外-可見分光光度計(北京萊伯泰科儀器有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 藥物制備 抑酸止痛方中海螵蛸：乳香：沒藥按2∶1∶1比例組成，首次加10倍于中藥質量蒸餾水浸泡2 h后，常規(guī)煎煮2次，每次30 min，濾出藥液并加熱濃縮成每1 ml藥液含原藥材2 g，冷卻后放置于4℃冰箱備用，待使用時加入蒸餾水稀釋至所需濃度。

1.4.2 動物模型制備 將Wistar大鼠60只按隨機數字法分成假手術組、模型組、中藥大劑量組、中藥中等劑量組、中藥小劑量組及西藥對照組，每組10只，雌雄各半，按照Takagi[5]方法復制大鼠胃潰瘍模型：用10%水合氯醛按0.2ml·100 g-1比例對其進行腹腔給藥[6]，待麻醉后將大鼠仰臥固定，去毛，用75%乙醇進行消毒，用手術刀從劍突下部沿腹白線打開長度約2 cm的刀口，打開腹腔，于胃黏膜下層注入冰醋酸，生理鹽水清洗局部，縫合腹壁；假手術組開腹后于胃黏膜下層注入同體積生理鹽水。手術后第3天開始給藥，中藥大劑量組按1.0 g·kg-1體重日1次灌胃(相當于成人劑量的20倍)；中藥中等劑量組按0.5.0 g·kg-1體重日1次灌胃(相當于成人劑量的10倍)；中藥小劑量組按0.25 g·kg-1體重日1次灌胃(相當于成人劑量的5倍)；西藥對照組以奧美拉唑水溶液4 mg·kg-1體重日1次灌胃；假手術組及模型組給予相同體積的蒸餾水，以上各組給藥天數為14 d。

1.4.3 指標檢測 胃液檢測:給藥結束后1天，大鼠背位固定，剪開腹腔，結扎賁門，摘取全胃，于胃大彎處剪一小口，將胃內容物收集于刻度離心管中，記錄胃液量。胃總酸度檢測 :所收集胃液置于離心管中，以半徑4 cm、轉速3 000 r/min離心15 min后，吸取上層清液1 ml，加酚酞指示劑1滴，用0.01 mol·L-1的NaOH滴定至指示色不變，根據所消耗NaOH量，由公式總酸度(mol·L-1)=10×耗去NaOH溶液量(ml)可計算胃總酸度。胃蛋白酶活性的檢測:依據胃蛋白酶測試盒說明書進行檢測，取反應終止后的樣本在660 nm波長處測定光密度(OD)，代入回歸方程(以標準品胃蛋白酶OD值對質量濃度進行回歸分析)計算胃蛋白酶活性(U/ml)。

1.5 統(tǒng)計學方法

2 結果

與模型組對比，各組大鼠胃液量、胃酸總量及胃蛋白酶活性均顯著降低(P<0.05)；與奧美拉唑組對比，中藥高劑量組各項指標無顯著差異(P>0.05)；中藥中、低劑量組各項指標高于中藥高劑量組及奧美拉唑組(P<0.05)；隨著中藥劑量的增加，各項觀察指標依次降低(P<0.05)，說明抑酸止痛方療效與劑量成正相關。具體見表1。

表1 抑酸止痛方對大鼠胃液量、胃酸總量 及胃蛋白酶活性的影響

a與b:P<0.05;a與c:P<0.05;b與cP>0.05。

3 討論

一直以來，“胃酸-胃蛋白酶自身消化”被認為是消化性潰瘍的最終形成原因[7，8]，這一觀念在“HP時代”仍占主導地位。胃蛋白酶是由胃主細胞分泌的胃蛋白酶原經胃酸激活而形成，它具有降解蛋白質分子的作用，因此對消化道黏膜有侵襲作用[9]。胃液是消化液中的主要成分，胃黏膜壁細胞、主細胞和黏液細胞均能分泌，由胃酸、胃蛋白酶、黏液、氯化鈉、氯化鉀等成分組成。胃酸有多種作用，其主要功能之一就是激活胃蛋白酶原，使之轉變?yōu)榫哂猩锘钚缘奈傅鞍酌福瑫r為胃蛋白酶發(fā)揮作用提供適宜的外界環(huán)境。當胃內pH值上升超過4.0時[10]，胃蛋白酶即失活，因此胃蛋白酶的活性受到胃內環(huán)境制約，我們在探討消化性潰瘍的病因病機及治療方案時，首先要考慮胃酸的作用[11-12]。綜上，胃酸的作用在潰瘍發(fā)生中占主導地位。

抑酸止痛方是臨床驗方，方劑組成為海螵蛸、乳香、沒藥[13]，其中海螵蛸抑酸、定痛、止血、愈瘍之功效；乳香行氣止痛；沒藥散瘀結、消腫脹。有研究報道，以海螵蛸、乳香、沒藥為主要組成的方劑在研究中普遍應用于非甾體型、慢性乙酸性、幽門結扎型和應激型胃潰瘍模型，均有顯著的抗?jié)冏饔谩?/p>

本研究表明，抑酸止痛方對幽門結扎型大鼠胃潰瘍模型可顯著降低胃總酸度并能夠抑制胃蛋白酶活性，且無明顯的毒副作用。

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國家中醫(yī)藥管理局全國名老中醫(yī)藥專家傳承工作室項目([2014]20) ；吉林大學“大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃”項目 (20161100548)；吉林大學課題項目(2016YX285)

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2016-10-10)

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