托吡酯對腦出血大鼠血腫周圍HSP70 TNF-a表達的影響

趙 敏 劉 紅 陳德哲 于海燕 宮殿榮 楊 申

1)山東聊城市人民醫院神經內科 聊城 252000 2)山東省泰安市中心醫院神經內科 泰安 271000

托吡酯對腦出血大鼠血腫周圍HSP70 TNF-a表達的影響

趙 敏1)劉 紅1)陳德哲1)于海燕1)宮殿榮1)楊 申2)

1)山東聊城市人民醫院神經內科 聊城 252000 2)山東省泰安市中心醫院神經內科 泰安 271000

目的 觀察托吡酯對腦出血大鼠血腫周圍腦組織熱休克蛋白-70(Hsp-70)及腫瘤壞死因子-a(TNF-a)表達的影響，以分析其在大鼠神經功能保護方面的作用機制。方法 隨機選擇60只健康雄性SD大鼠，將其分為3組，分別為假手術組，腦出血組與腦出血治療組，每組各20只。利用自體股動脈取血法制作腦出血模型。對各組在術后繼續分組，依據術后6 h、24 h、48 h、72 h、5 d進行劃分，切片處理后利用干濕重法測量腦組織含水量，同時對組織Hsp-70、TNF-a的含量進行檢測。結果 腦出血治療組中各亞組的血腫周圍含水量和ICH組相比明顯較低(第一組的除外)(P<0.01)；Hsp-70陽性細胞表達高于ICH組(P<0.01)，TNF-a表達水平低于ICH組(P<0.01)。結論 托吡酯可以適當增加Hsp-70，降低TNF-a表達，有利于提高強神經細胞缺血耐受性，在神經保護方面有積極作用。

腦出血；托吡酯；熱休克蛋白-70；腫瘤壞死因子-a

腦出血是一種在中老年群體中很常見的神經系統疾病，其發病率不斷提高，這種疾病致死率較高，目前已引起廣泛關注。研究發現，腦出血在一定時間內相應區域神經元的病理改變是可逆的，因而在受損后如何盡快的采取有效治療措施使受損腦組織恢復功能，具有積極的意義[1-2]。托吡酯對癲癇具有較好的治療效果，不過關于其在出血性腦血管病治療方面的作用還缺乏相關研究。

1 材料和方法

1．1 材料 健康的成年雄性SD大鼠60只，鼠齡6～8周，將其平均分為3組每組20只，分別為假手術組ICH組ICH治療組，對各組繼續劃分為五個亞組，依據術后6 h、24 h、48 h、72 h、5 d進行劃分，每亞組4只。

1．2 模型制作 采用自體股動脈取血法制備出腦出血模型，各組的制備過程相同，區別在于假手術組進針尾殼核后不注血，在清醒狀態下對實驗對象進行神經缺陷評分，確定出其中大于2分者并入選，假手術組全部入選。選好對象之后分籠飼養，保持合理的喂養和環境條件，ICH治療組術后5個時間點分別腹腔注射托吡酯混懸液，1次/d，劑量100 mg/kg，假手術組及ICH組在同樣條件下注射生理鹽水。

1．3 免疫組化檢測 各組大鼠術后按各時間點進行麻醉處理，之后開腹剪開右心耳，將正常生理鹽水注入到左心室，一直到灌注液變清亮為止，取出腦組織后做冠狀切片，如果切片中出現明顯的圓形、橢圓形等腫塊則認為模型成功。將制備的腦片分為A、B二片，A片經過一系列的脫水處理后用石蠟65 ℃條件下包埋，為免疫組化檢測做好準備。B片為測腦含水量的備用。

1．4 觀察指標

1．4．1 腦含水量測定：取B片準確測量其濕重后進行烘烤處理并最終取出稱量干重，并以此來確定其含水量。

1．4．2 圖像分析：在顯微鏡下進行DAB染色，HSP70陽性細胞會被染為褐色，并記錄視野陽性細胞數，后確定出其平均值。

1．5 統計學方法 運用SPSS 13.0軟件進行數據統計處理，并利用單因素方差法對組間結果進行對比。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 腦組織含水量測定 各組腦組織含水量變化情況存在明顯區別，假手術組沒有變化；ICH組腦組織24 h開始出現顯著變化，至72 h達到最大值；ICH治療組和ICH組一致。見表1。

2．2 Hsp-70、TNF-a免疫組化染色 假手術組相應的HSP70表達很少；ICH組6 h后檢測到一定的Hsp-70陽性細胞，48～72 h達到最大值，之后一直保持這一水平；ICH治療組和ICH組相同；后2組和假手術組相比結果存在明顯統計學差異(P<0.01)。見表2。TNF-a的表達在ICH組6 h后出現顯著變化，72 h達最大值，假手術組在各時間點變化不明顯，ICH和ICH組相同；后2組和假手術組比較，差異有統計學意義(P<0.01)。見表3。

表1 各組大鼠ICH后血腫周圍腦組織的含水量±s)

注：假手術組與ICH組比較，*1P<0.05，△1P<0.01；ICH組與ICH治療組比較，*2P<0.05，△2P<0.01。ICH治療組與假手術組比較，*3P<0.05，△3P<0.01

表2 各組大鼠ICH后血腫周圍hsp70陽性細胞數的比較±s)

注：假手術組與ICH組比較，*1P<0.05，△1P<0.01；ICH組與ICH治療組比較，*2P<0.05，△2P<0.01。ICH治療組與假手術組比較，*3P<0.05，△3P<0.01

表3 各組大鼠ICH后血腫周圍TNF-a表達的比較

注：假手術組與ICH組比較，*1P<0.05，△1P<0.01；ICH組與ICH治療組比較，*2P<0.05，△2P<0.01。ICH治療組與假手術組比較，*3P<0.05，△3P<0.01

3 討論

腦出血是一種常見的腦部疾病，其致死率較高，主要是由于腦損傷后出現繼發性水腫導致，這類疾病對腦出血患者的健康和生活質量造成了嚴重影響[3]。托吡酯是一種抗癲癇類的常用藥物，其胃腸吸收好，可以被生物體高效利用。近年來很多研究發現，托吡酯對缺血性腦血管病具有一定治療效果，會減少了神經細胞興奮性毒性損傷從而起到相應的療效，其還可以抑制星形膠質細胞增生[4]。HSP蛋白可以起到一定的防降解作用，并抑制細胞凋亡，可以利用其作為細胞遭受可逆性損傷的標志。本文研究發現，HSP70在出血后6 h開始表達，72 h達到最大值，隨后緩慢下降。TNF-a是一種多肽類細胞因子其在腦出血后6 h開始表達，并參與到腦損傷過程中[5]。

總之，托吡酯可以促進HSP70的表達，降低炎癥反應從而起到相應的保護作用。在對腦出血相關的繼發性損害進行治療時需要選擇多種方法，可采用降低顱壓和手術處理的方法，同時行其他探索，為發現新的治療方法打下基礎。

[1] 王新征，劉金彪，侯永強，等．分化型甲狀腺癌組織中 HSP70與 TNF-α的表達及與臨床病理的相關性[J]．中國老年學雜志，2015，36(1)：112-113．

[2] Jiang H ，Lei JJ，Zhang YH．Protective effect of topiramate on hypoxic-ischemic brain injury in neonatal rat．[J]．Asian Pac J Trop Med，2014，7(6)：496-500．

[3] 陶秀娟，宋琳，劉賀榮，等．血清TNF-α和HSP70表達水平與回漢族2型糖尿病關系的研究[J]．軍事醫學，2014，(12)：940-944．

[4] Wang X，Luo Y，Sun H，et al．Dynamic expression changes of Bcl-2，Caspase-3 and Hsp70 in middle cerebral artery occlusion rats[J]．Brain Inj，2015，29(1)：93-97．

[5] 劉小轉，李三強，任江濤，等．HSP70、 IL-6和TNF-α在CCl4誘導的小鼠急性肝損傷組織中的表達及意義[J]．山東醫藥，2011，51(35)：17-19．

(收稿2016-06-12)

山東省自然科學基金項目(ZR2014HL037)

R743.34

A

1673-5110(2017)01-0050-03