某豬場CSFV、PRRSV、PCV2和PRV多重感染病例的報道

某豬場CSFV、PRRSV、PCV2和PRV多重感染病例的報道

徐 國，代振江，曾智勇＊，葉百川，張愛瓊，咸 文，何小莉
(貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

貴州省某種豬場一周內連續發生30余頭母豬早產和（或）產死胎癥狀，豬場工作人員向筆者實驗室送檢同窩流產死胎4只。根據流行情況和臨床特征，初步判斷與病毒感染有關。為篩查具體病原，本實驗室將送檢死胎組織混合樣品分別對CSFV、PRRSV 、PCV2、PRV、PPV 和JEV六種常見病毒進行病原核酸檢測，結果顯示該豬場發病豬存在CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的多重感染。

CSFV；PRRSV；PCV2；PRV；多重感染

母豬繁殖障礙又稱繁殖障礙綜合征，其病因有非傳染和傳染性兩類，豬瘟病毒（CSFV）、豬藍耳病毒（PRRSV）、圓環病毒2型（PCV2）、豬偽狂犬病毒（PRV）等是引起母豬繁殖障礙疾病的主要病原微生物[1]。豬瘟是由CSFV引起的豬的一種急性或慢性、熱性和高度接觸性傳染病，其特征為發病急、高熱稽留和細小血管變性，引起全身泛發性小點出血，脾臟梗死；豬繁殖與呼吸綜合征是由PRRSV引起的豬的一種繁殖障礙和呼吸系統的傳染病，其特征為厭食、發熱、懷孕后期發生流產，產死胎和木乃伊胎，幼齡仔豬發生呼吸系統疾病和大量死亡；豬圓環病毒病是指以PCV2為主要病原、單獨或繼發或混合感染其他致病微生物的一系列疾病的總稱，其臨床癥狀特征主要為體質下降、消瘦、貧血、黃疽、生長發育不良、腹瀉、呼吸困難、母豬繁殖障礙、內臟器官及皮膚的廣泛病理變化；豬偽狂犬病是由PRV引起的一種急性傳染病，臨床特征為體溫升高，新生仔豬表現神經癥狀，成年豬常為隱性高感染，妊娠母豬感染后可引起流產、死胎及呼吸系統癥狀[2]。

貴州省某種豬場一周內連續發生30余頭母豬早產和（或）產死胎。據述，該豬場2016年8月份對CSFV、口蹄疫（FMDV）和PRV進行了普免。該豬場保育豬中出現體溫升高、嗜睡、皮膚發紅、食欲廢絕、喘氣、被毛粗亂、精神沉郁、喜臥等癥狀。病豬剖檢可見皮下大量出血點；腎臟布滿針尖狀出血點；肺臟存在間質性肺炎、胸腔積液、心包積液。根據上述情況，懷疑該起病例與病毒感染相關。為了進一步確診，對CSFV、PRRSV、PCV2和PRV等6種常見病原進行了實驗室核酸檢測，現將檢測過程報道如下。

1 材料

1.1 病料

貴州省某種豬場送檢的母豬流產死胎。

1.2 試劑

根 據GenBank中 關 于CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV序列設計并合成6對特異性引物引物（預擴增條帶大小分別為 CSFV 508 bp、PRRSV 434 bp、P C V 2 3 5 3 b p、P R V 3 0 5 b p、PPV 271 bp和JEV 1 015 bp），核酸提取試劑盒，PrimeScript One Step RTPCR Kit Ver.2.0等。

圖1 樣品中6種病毒的PCR/RT-PCR檢測結果

2 方法

通過該養殖場送檢人員了解飼養情況、免疫接種、發病死亡情況、藥物治療和臨床癥狀之后將送檢流產死胎進行解剖觀察并記錄。將采集的組織混合樣品研磨勻漿，液氮反復凍融3次后12 000 r/min離心10 min，取上清，用 TakaRa Mini BEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver 4.0試劑盒提取核酸。

按 照 一 步 法PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2.0試劑盒說明書對CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV進行檢測。反應總體系為50 μL：2×1 Step Buffer 25 μL， 模板7.0 μL，上下游引物各1.0 μL，Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2 μL，Release Free H2O 14 μL；反應條件均為：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35個循環；72 ℃ 10 min。擴增產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

3 結果

該豬場2016年8月份對豬瘟、口蹄疫和豬偽狂犬病進行了普免，該豬場保育豬發生體溫升高、嗜睡、皮膚發紅、食欲廢絕、喘氣、被毛粗亂、精神沉郁、衰弱、喜臥等癥狀，發病率約60%，病死率約30%～40%，多于45日齡前后發病。該種豬場1周內連續發生30余頭母豬早產和（或）產死胎癥狀的情況，且仔豬有神經癥狀。

將送檢流產死胎進行解剖觀察。解剖后可見，皮下有出血點；腎臟表面布滿針尖狀出血點、剖開腎臟見有不同程度損傷；肺臟存在間質性肺炎；胸腔積液；心包積液。

將送檢流產死胎組織病料混合后，提取病料核酸。以提取的核酸為模板，應用一步法RT-PCR試劑盒，對病料進 行CSFV、PRRSV、PCV2、JEV、PPV和PRV等6種病毒的核酸檢測，結果見圖1。檢測結果表明，組織樣品中CSFV、PRRSV、PCV2、PRV為陽性，PPV和JEV檢測結果為陰性。

4 結果分析與討論

檢測結果表明，送檢流產胎兒存在SCFV、PRRSV、PCV2和PRV的多重感染。引起母豬繁殖障礙疾病既有傳染性因素，也有非傳染性疾病因素，而CSFV、PRRSV、PCV2和PRV等都是引起母豬繁殖障礙疾病的主要因素[1，2]。本文送檢病樣的豬場已對CSF和PR進行了免疫，但未進行相應的抗體監測，而本次病原篩查結果也間接表明該豬場CSF、PR免疫失敗。免疫失敗的原因是多方面的，如疫苗的接種途徑、用法用量和效價，動物應激，遺傳因素，患免疫抑制疾病等。所以，養豬場應從多方面查找免疫失敗的原因，采取措施提高抗體免疫水平并定期進行疫苗免疫抗體水平的監測。同時，對PCV2、PRRS等進行疫苗免疫，改善圈舍衛生，進行嚴格徹底的清潔和消毒以減輕感染壓力，加強綜合管理防控，堅持自繁自養。此外，剖檢時發現胎兒腎臟存在損傷，可能與發病母豬群的藥物保健有關，故建議暫停，同時在飼料或飲水中適當添加電解多維，飼喂優質飼料。

針對母豬繁殖障性疾病的治療有文獻報道可采取激素療法，如王金鵬等[3]所采用的催情散療法治愈率可達90%以上。另外，張艷豐等[4]報道的“三聯療法”也有一定效果，即先用西藥(防腐消毒劑)沖洗子宮并進行藥物灌注(青鏈霉素)，同時配合益母生化散混飼，修復受損子宮和卵巢，治療炎癥和產后感染，最后用催情散刺激卵泡發育，誘其發情，促其排卵。

[1] 宣長和.豬病學[M].3版.北京：中國農業大學出版社， 2010：177.

[2] 陳溥言.獸醫傳染病學[M].5版.北京：中國農業出版社，2006：210-231.

[3] 黃利權，蔡榮湘，陳曉清.催情散治療母豬不孕癥的試驗[J].中國獸醫雜志，1998，24（4）：44-45.

[4] 王艷豐，張丁華，曹智高，等.母豬繁殖障礙治療效果觀察[J].動物醫學進展，2014，35(12)：161-163.

2016-11-23）

省校合作計劃項目，黔科合LH字[2014]7670號

徐國，男，在讀碩士，研究方向：動物傳染病病原分子生物學。E-mail：576144546@qq.com

曾智勇（1978—），男，教授，博士，碩士生導師，從事動物傳染病病原分子生物學研究