豬O型口蹄疫抗體水平檢測與分析

豬O型口蹄疫抗體水平檢測與分析

劉 鴿，于會舉，張培生，張 倩，宋 敏，楊慧敏，吳圓圓，屈勇剛*
(石河子大學動物科技學院，新疆 石河子 832003)

為了解北疆地區口蹄疫（FMD)的免疫抗體水平，本試驗選擇克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯、奇臺5個不同區域的19個規模化豬場進行豬O型口蹄疫ELISA抗體水平檢測并做出初步分析。980份試驗血清中檢出851份陽性血清，陽性率為86.84%（851/980）；5個不同區域的19個豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率，克拉瑪依85.13%、沙灣85.43%、石河子89.39%、瑪納斯85.63%、奇臺79.19%；19個規模化豬場的豬O型口蹄疫抗體水平在70%（國家規定水平）以上者達100%，且19個豬場中豬O型口蹄疫抗體陽性率在90.00%及以上者有6個，占31.58%（6/19）；抗體陽性率在80.00%及以上者有16個，占84.21%（16/19）；只有3個豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率低于80.00%。此試驗結果說明北疆地區豬O型口蹄疫抗體水平相對較高；豬群不同構成成分豬O型口蹄疫抗體水平存在一定差異，3個階段的仔豬的豬O型口蹄疫抗體陽性率隨日齡增大而下降。希望本試驗結果在一定程度上可為北疆地區口蹄疫防疫工作提供一定的參考。

口蹄疫；ELISA；抗體水平；陽性率

口蹄疫（food and mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性和高度接觸性的偶蹄動物傳染病[1-5]，被國際獸醫局（OIE)列為必須上報的動物疫病，被我國列為一類動物傳染病[6-8]。FMD屬于小RNA病毒科口蹄疫病毒屬，包括7個血清型（A、O、C、SATI、 SATⅡ、SATⅢ和亞洲I型，其中O型口蹄疫是世界上流行最廣的一種血清型）和80多個血清亞型，并且各血清型之間無交叉免疫現象[9]。1514年，FMD被首次報道，現已在全球蔓延，并嚴重威脅畜牧業的健康發展，給畜牧業造成巨大損失[10-13]。在應對FMD方面，我國采取疫苗免疫接種和撲殺的綜合防治措施，效果明顯[14-16]。近些年，我國強制免疫中廣泛使用豬口蹄疫O型滅活疫苗和豬口蹄疫O型合成肽疫苗。

2015年下半年至今，豬肉價格較高，激發了養豬單位中畜牧工作者的工作積極性，極大地促進了養豬事業的發展。為了解2014年1月—2016年9月北疆地區口蹄疫（FMD)的免疫抗體水平，本試驗選擇克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯、奇臺5個不同區域的19個規模化豬場進行豬O型口蹄疫ELISA抗體水平檢測并做出初步分析，在一定程度上可為北疆地區口蹄疫防疫工作提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品來源

2014年1月至2016年9月采自新疆北疆地區的克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯、奇臺5個不同區域的19個規模化豬場不同類型豬群（0～10 d、11～ 20 d、21～30 d仔豬，后備母豬，經產母豬，種公豬），共采集血樣980份。

1.1.2 材料和儀器

豬O型口蹄疫病毒 ELISA 抗體檢測試劑盒（武漢科前生物）、自動酶標儀（美國 Bio Tek 儀器有限公司）、一次性5 mL獸用采血器、微量移液器（Eppendorf公司）、若干個移液槍頭（已高壓滅菌）、恒溫培養箱（光明醫療儀器廠）、平板震蕩儀等。

1.2 試驗方法

1.2.1 采集樣品

在采樣過程中要保證規范性操作，如此才可保證后續工作的順利開展。對已選定的豬群一次性從前腔靜脈（左右各有一條，可根據操作者的優勢手的習慣決定從哪側采血）或耳靜脈采集血液3～5 mL/頭，室溫靜置 30 min左右，待血清析出后，收于采樣箱中（里面放有冰袋）帶回實驗室，每份吸取 1 mL血清于滅菌的1.5 mL EP管中，逐管標記，4 000 r/min ，離心10 min，可立即進行ELISA檢測，亦可放-20 ℃保存備用，在時間允許的條件下進行檢測，但不能放置過長時間。

1.2.2 間接 ELISA 檢測方法

按照試劑盒使用說明書的步驟測樣品 OD630nm值。首先，將濃縮的洗滌液恢復到室溫（25 ℃），然后按照 1∶20稀釋濃縮的洗滌液，最好是當天用當天配（2～8 ℃，可存放一周時間）。試驗中，在豬O型口蹄疫抗原包被微孔板加入經 1∶4倍稀釋的對照血清和1∶32待檢血清，在37 ℃恒溫箱中溫浴30 min，待抗原抗體結合后，洗滌后加羊抗豬酶標二抗，再次在37 ℃恒溫箱中溫浴30 min，洗滌后加底物A、B，混勻后在室溫下避光顯色 10 min，加終止液終止反應，在10 min內，用酶標儀630 nm 波長測定各反應孔中的OD630nm值，據OD630nm值對抗體水平進行判定。

1.2.3 結果判定

在酶標儀上測各孔OD630nm值。試驗成立的條件是陽性對照孔平均OD630nm值 ≥ 0.8，陰性對照孔平均OD630nm值必須＜0.3。

樣品OD630nm值 ≥ 0.4，判為陽性；樣品OD630nm值＜0.4，判為陰性。

根據試劑盒說明書，按表1進行OD630nm值與間接血凝試驗（IHA)的轉換。

1.2.4 統計分析

用SPSS 軟件、Excel 軟件對試驗數據進行統計分析，OD630nm值結果用平均值±標準差表示。

2 試驗結果

2.1 不同地區不同豬場的豬瘟抗體陽性率及抗體水平

豬場A～E在克拉瑪依區域，F～I在沙灣區域，J～M在石河子區域，N～Q在瑪納斯區域，R～S在克拉瑪依區域。980份試驗血清中檢出851份陽性血清，陽性率為86.84%（851/980），A～S豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率依次為90.00%、85.71%、92.25%、75.00%、82.67%、83.33%、76.79%、93.02%、88.57%、91.11%、87.50%、94.74%、84.21%、86.96%、90.48%、82.93%、88.14%、80.00%、78.38%。其中，抗體陽性率在90.00%及以上者有6個，抗體陽性率在80.00%及以上者有16個，只有3個豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率低于80.00%，分別為75.00%、76.79%、78.38%，均高于70%（國家規定水平）。結果見表2。

2.2 北疆5個不同區域豬O型口蹄疫抗體分析結果

5個不同區域的19個豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率：克拉瑪依85.13%、沙灣85.43%、石河子89.39%、瑪納斯85.63%、奇臺79.19%；不難發現，石河子的抗體陽性率最高，為89.39%；奇臺的抗體陽性率最低，為79.19%；克拉瑪依、沙灣、瑪納斯的抗體陽性率相當。19個試驗豬場的豬O型口蹄疫抗體檢測平均OD630nm值：克拉瑪依1.451，沙灣1.542石河子1.395，瑪納斯1.328，奇臺1.096。對19個豬場的采樣血清進行試驗發現，間接血凝試驗（IHA)均大于等于1∶1024。結果見表3。

2.3 19個規模化豬場豬群不同構成成分的豬O型抗體水平

分析19個試驗豬場的豬O型抗體水平，0～10 d仔豬、11～20 d仔豬、21～30 d仔豬、后備母豬、經產母豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為 95.79%、91.58%、89.47%、75%、86.34%、98.82%。結果見表4。

表1 表1 豬O型口蹄疫抗體 ELISA 檢測OD630nm值與間接血凝試驗效價的轉換

表2 北疆地區5個不同區域的19個豬場豬O型口蹄疫抗體檢測結果

表3 北疆5個不同區域豬O型口蹄疫抗體分析結果

表4 19個規模化豬場不同構成成分豬群豬O型口蹄疫抗體水平

3 討論

3.1 北疆地區豬O型口蹄疫抗體水平相對較高

分析試驗結果發現，980份試驗血清中檢出851份陽性血清，陽性率為86.84%（851/980）；北疆地區的克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯、奇臺5個不同區域的19個規模化豬場的豬O型口蹄疫抗體水平在70%（國家規定水平）以上者達100%，且19個豬場中豬O型口蹄疫抗體陽性率在90.00%及以上者有6個，占31.58%（6/19）；抗體陽性率在80.00%及以上者有16個，占84.21%（16/19）；只有3個豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率低于80.00%。此試驗結果說明北疆地區豬O型口蹄疫抗體水平相對較高，對于那些豬O型口蹄疫抗體水平較低的豬場來說，應引起豬場工作人員的高度重視，從疫苗質量、免疫操作、豬群狀況等幾個方面入手，找到真正的原因并盡快解決，保障豬群健康，以求養豬事業更好更快發展，為國民提供健康放心豬肉。

3.2 豬群不同構成成分豬O型口蹄疫抗體水平存在一定差異

分析0～10 d仔豬、11～20 d仔豬、21～30 d仔豬、后備母豬、經產母豬和種公豬的豬O型口蹄疫抗體水平發現，種公豬的抗體陽性率最高，為98.82%，免疫水平較高；后備母豬的抗體陽性率最低，為75%，有待提高；0～10d仔豬、11～20 d仔豬、21～30 d仔豬的抗體陽性率依次為95.79%、91.58%、89.47%，都是較高的免疫水平，3個階段仔豬的豬O型口蹄疫抗體陽性率隨日齡增大而下降，其中仔豬出生10 d后抗體水平有下降增快的趨勢，這可能與母源抗體有一定的關系，提示在仔豬出生后應在適宜的時間及時做好免疫接種工作，并保證飼養環境良好，采取適當的綜合措施以促進仔豬的健康生長，為仔豬群的后續發展打下堅實基礎。

3.3 加強飼養管理，有效預防疾病

加強飼養管理，是一項非常重要的措施，只有好的管理，才能有效保障豬群健康。鑒于豬口蹄疫的巨大危害，采取及時有效的免疫接種是行之有效的措施，在適當的時間應進行豬O型口蹄疫的免疫接種。對種公豬和繁殖母豬進行豬O型口蹄疫的全免，還要根據各自豬場的實際情況對免疫程序進行調整。在豬場的日常工作中，應將豬群免疫接種工作放到非常重要的位置，并采取嚴格的制度規范。

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2016-10-12）

新疆石河子市農業科技攻關項目（編號：2013NY04）

作者 ：劉鴿（1986-），男，山東省淄博人，碩士研究生，主要從事動物傳染病診斷與防治工作

*通訊作者 ：屈勇剛（1971-），男，陜西省渭南人，副教授，主要從事動物傳染病診斷與防治工作