雞傳染性法氏囊病病毒檢測方法研究進展

楊先富++廖飛++莫興虎++趙孝木

摘要：對雞傳染性法氏囊病病毒檢測方法研究進展進行了綜述。

關鍵詞：雞；傳染性法氏囊病病毒檢測方法；研究進展

中圖分類號：S858.31 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2016）09-0013-01

雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）屬于雙股雙節RNA病毒科雙股雙節RNA病毒屬，無囊膜，單層衣殼，二十面體對稱，直徑為55～60nm。IBDV分為2個血清型，血清I型對雞有致病性，而血清Ⅱ型無致病性。IBDV主要侵害雞的法氏囊等淋巴組織，破壞B淋巴細胞前體，使機體不能產生免疫球蛋白，引起嚴重的免疫抑制，使病雞對其他病毒、細菌及球蟲的易感性增高，因此了解并掌握本病毒的檢測方法在養雞業上有重要的意義。下面就近年來國內外有關法氏囊病病毒檢測方法的研究進展作一簡要介紹。

1 病毒的分離與鑒定

傳統的方法是采取病雞的法氏囊或脾，研碎后加入滅菌的生理鹽水，制成1∶5～1∶10的混懸液，離心取上清液，青霉素、鏈霉素處理后，接種于法氏囊病陰性種雞或SPF群的9～11日齡雞胚的絨毛尿囊膜。雞胚常于3～5 d出現死亡，胚體充血、出血，肝有斑點狀壞死和出血斑。鑒定分離出來的IBDV可與陽性血清在雞胚或雞胚成纖維細胞培養中做中和試驗，內外一些學者直接用原代IBDV細胞培養方面開展很多工作。1994年陶素華等報道，在Vero細胞上，連續傳至第4代，接種后第5天出現明顯的致細胞病變作用，TCID50達10-9/mL以上。1995年日本學者kenji等篩選到禽淋巴肉瘤病雞的B淋巴細胞LSCC—BK3細胞株和與之配套的ELISA檢測方法，靈敏性比雞胚成纖維細胞（CEF）、雞胚腎細胞（CKC）和BGM一70細胞高，為大規模分離培養IBDV原代病毒找到了一種簡便有效的細胞學方法。

2 抗原檢測

2.1 血清學方法

瓊脂擴散試驗（AGP）。1968年Wagner等首次運用AGP試驗檢測IBDV。此試驗通常用病死雞的法氏囊或內臟懸液，與IBDV標準陽性血清進行AGP試驗。Ajinkya等（1980）用IBDV標準陽性血清檢測IBD病雞的內臟懸液，陽性率為100%。McNuhy等分離到野毒株與標準I型IBDV毒株都做AGP實驗，結果兩者沉淀線形狀有差異，故提出用此法來鑒別病毒是否屬于變異毒株。趙云英等[1]也報道了，應用血清學AGP試驗結果可見明顯的白色沉淀線。甘輝群等[2]采用雞胚接種法從某發病雞群中分離出一株病毒，通過瓊脂擴散試驗等確定該病毒為傳染性法氏囊病病毒。

有學者在抗原的處理方面進行了改進，將3%PEG（聚乙二醇）加入到普遍AGP中制成改良的AGP，由于PEG具有濃縮、沉淀、純化病毒抗原的作用。因此能使病毒濃度大大提高，促進抗原抗體復合物形成沉淀。試驗證實了此法檢測IBDV的檢出率比常規AGP高出18.8%，同時在檢出的陽性病例中，用改良AGP比常規方法檢出IBDV抗原的滴度高出1～2個倍比滴度。AGP試驗操作簡單方便、無需昂貴的儀器，在臨床中應用較多。但因敏感性較低，主要用于檢測血清中的抗體 在感染早期不能診斷出IBDV，與其他分子生物學方法相比有許多不足，應用受到一定限制。

2.2 生物化學和分子生物學方法

聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）技術。PAGE技術是研究蛋白質的一種重要方法，它主要是利用蛋白質分子量的差異將不同的蛋白質在電泳介質中區分開，通過染色對目的蛋白作出鑒定。此法不僅可檢出病毒特異性蛋白，而且可以區分出毒株間的差異。國外眾多學者應用本法對IBDV的特異性蛋白作了廣泛研究，利用PAGE技術可從IBDV中檢測到VP1～VP5五種主要蛋白，另外還可測出某些前體（即未加工成熟的）蛋白。其中VP1由病毒的小片段（B片段）基因組編碼，VP2～VP5均由病毒的大片段（A片段）基因組編碼。VP2和VP3是IBDV的主要結構蛋白，分別占病毒蛋白總量的51%和40%，而VP1和VP4則分別只占3%和6%，VP5是新近發現的，其含量和功能目前還不清楚。

綜上所述，對IBDV診斷研究已取得了很多新的進展，從目前來看，一些地方解決生產上的問題還是靠常規方法如病毒的雞胚分離、AGP檢測等。條件較好的地方采用了更加快速、靈敏的實時熒光定量RT-PCR技術進行診斷，由于我國在IBDV方面已作了上述研究，具有了一定的研究基礎和經驗，因此我們認為，我國在IBDV診斷技術研究方面將會取得更大進展。

參考文獻：

[1] 趙云英，張燕欣，張文生，等. 一株雞傳染性法氏囊病病毒的分離鑒定[J]. 中國畜牧獸醫，2012，39（6）：207-211.

[2] 甘輝群，劉明生，管遠紅. 一例雞傳染性法氏囊病病毒強毒株的分離與鑒定[J]. 江蘇農業科學，2012，40（1）：184-185.