非特異性免疫治療對射頻消融術后肝細胞癌患者免疫功能的影響

蔣居毅，劉天奇廣西壯族自治區靈山縣人民醫院肝膽外科，廣西欽州535400；廣西壯族自治區人民醫院肝膽腺體外科，廣西南寧5300

非特異性免疫治療對射頻消融術后肝細胞癌患者免疫功能的影響

蔣居毅1，劉天奇21廣西壯族自治區靈山縣人民醫院肝膽外科，廣西欽州535400；2廣西壯族自治區人民醫院肝膽腺體外科，廣西南寧530021

目的探討非特異性免疫治療對射頻消融術后肝細胞癌患者免疫功能的影響。方法采用流式細胞儀檢測分析43例肝細胞癌患者治療前和行射頻消融術并接受非特異性免疫治療后，外周血中CD4+T細胞、CD8+T細胞、NK細胞比例以及CD4+/ CD8+值。結果行射頻消融術并接受非特異性免疫治療后患者外周血中的CD4+T細胞、NK細胞比例及CD4+/CD8+值均顯著高于治療前（P＜0.05），同時治療后患者外周血中CD8+T細胞比例顯著低于治療前（P＜0.05）。結論非特異性免疫治療可提高射頻消融后肝細胞癌患者的免疫功能。

肝細胞癌；射頻消融；免疫治療；免疫功能

肝細胞癌是發病率較高的最常見癌癥之一，目前治療最有效的方法仍是外科手術切除或者肝移植，然而只有20％～30％［1-2］的患者獲得機會,同時術后高復發率及轉移率仍為治療的瓶頸［3］。隨著細胞免疫學、生物工程、基因技術創新和發展，醫學界對腫瘤免疫原理有著質的突破。有著不少的小鼠肝癌模型試驗［4］及熱消融等技術在臨床回顧分析中均證實可促進肝癌腫瘤相關抗原釋放，改善機體免疫狀態并取得臨床療效。啟發出肝癌發生與自身機體的抗腫瘤免疫效應密切相關［5-6］，肝癌的發生與肝癌免疫治療也越來越受到人們的重視，并且成為肝癌術后鞏固治療的首選方法之一。然而肝癌射頻治療后序貫免疫治療對患者機體免疫功能的影響如何，目前未見報道。此研究旨在通過檢測分析肝細胞肝癌（HCC）患者射頻消融（RFA）序貫非特異免疫治療前后的T淋巴細胞亞群、NK細胞的變化，對非特異性免疫治療對射頻消融術后肝細胞癌患者免疫功能的影響進行了初步研究，為臨床開展腫瘤非特異行免疫治療提供臨床依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

2013年6～12月在廣西壯族自治區人民醫院肝膽外科進行了肝癌射頻術序貫非特異性免疫治療43例，全部病例經空心針肝穿刺活檢組織病理學確診為HCC，全部病例無合并損害免疫功能的慢性疾病病史，如糖尿病、系統性紅斑狼瘡等；無合并其他系統感染。其中男34例，女9例，年齡25～82歲，平均52.21±12.44歲。

1.2 方法

1.2.1 治療方法肝癌射頻消融術均由同一名超聲科醫生和肝膽外科醫師共同完成，均為B超引導經皮肝癌射頻消融術。患者術后住院進行非特異性免疫治療，方案為：靜脈輸入由重組人白介素-2注射液（IL-2，106U/d）、注射用胸腺法新（邁普新，1.6 mg/隔天）皮下注射及與斑蝥酸鈉維生素B6注射液（斑蝥，40 mL/d）。5 d為1周期，3周為1療程。

1.2.2 T淋巴細胞亞群及NK細胞檢測方法術后1個月免疫治療前及術后3個月完成第3次非特異性免疫治療后抽取外周血，采用流式細胞儀檢測CD4+，CD8+及NK細胞比例。

1.3 統計學方法

將病例資料分類后分別輸入SPSS19.0做以下分析，組內治療前后比較采用配對t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

治療后與治療前相比，患者CD4+，CD4+/CD8+及NK細胞均有回升，但治療后患者CD8+仍低于治療前，差異具有統計學意義（P＜0.05，表1）。

表1 非特異性免疫治療前、后肝癌患者外周血T淋巴細胞亞群及NK細胞比較（n=43±s）

表1 非特異性免疫治療前、后肝癌患者外周血T淋巴細胞亞群及NK細胞比較（n=43±s）

指標（％）CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ NK治療前55.92±11.34 39.42±10.60 1.58±0.65 19.73±9.01治療后58.76±9.95 36.95±9.49 1.74±0.65 22.91±12.40 P 0.000 0.000 0.000 0.049

3 討論

肝癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，在腫瘤相關性死亡率居第3位。我國是肝癌高發區，占全球肝癌病例一半以上。據世界癌癥機構統計我國2008年HCC發病例數約為402 208例，病死例數為372 079例［7］。以RFA為代表的肝癌局部消融治療在近20多年發展成為繼手術切除、介入治療后的第3大肝癌治療手段,在肝癌治療領域中起著越來越重要的作用。其中有Rossi［8］、Tateishi［9］、陳敏山等［10］多方研究報道RFA治療肝癌獲得滿意效果，然而術后3年和5年的復發率仍分別高達50％和70％［11］。隨分子免疫學科等發展，已經證實腫瘤的發生、發展不僅與腫瘤自身細胞的基因遺傳有關，同時與腫瘤細胞自身的微環境有關。腫瘤的發生、發展與機體免疫功能存在著密切的關系［12］。維持機體內部免疫系統環境的一個中心環節則是T淋巴亞群細胞之間的動態平衡。

CD3+存在于所有成熟T細胞的表面，故CD3+細胞的數量代表著機體的總細胞免疫狀態。CD4+T淋巴細胞是輔助性T細胞，主要作用則是輔助機體完成抗腫瘤免疫；CD8+T淋巴細胞是抑制性細胞，主要功能是抑制住機體自身的免疫應答，二者相互制約與誘導對維持機體免疫平衡有重大意義。通常機體內部免疫狀態的動態穩定以CD4+/CD8+比值表示，若此比值降低，則提示著機體免疫功能下降，進而促進著腫瘤的發生及發展。反而當此比值上升時，則提示著機體免疫功能的好轉［13］。NK細胞是一種特殊的細胞群體，在機體抗腫瘤免疫過程中有著重大的作用，與其他抗腫瘤細胞區別則是其抗腫瘤過程不受MHC限制［14］。因此NK細胞與CD4+、CD8+及CD4+/CD8+均能反映機體免疫功能的情況。肝癌患者在自身免疫功能有著不同程度的抑制，肝癌治療術后的復發轉移與本身免疫功能的缺陷有著一定的聯系［15］。不少國內外文獻報道指出：肝癌患者機體外周血CD4+、NK細胞的數量比值明顯低于健康人群，同時不同分期肝癌患者內T淋巴細胞亞群及NK細胞的下降程度有著明顯差異［16-17］。

免疫治療主要經過增強機體免疫系統的敏感性、特異性和自動調節來清除腫瘤細胞［18］，方法包括非特異性免疫,過繼免疫,主動免疫,基因免疫及聯合免疫［19］。其中非特異性免疫治療藥物有胸腺肽、BP素、甘露聚糖肽、康艾、IL-2［20-23］等。多項臨床研究數據表明胸腺肽、BP素、甘露聚糖肽、康艾、IL-2作為免疫調節劑，在肝癌治療和預防復發中取得了較好的療效［24-26］。本研究對肝癌射頻治療后序貫“胸腺肽、IL-2、斑蝥”方案免疫治療3周期，應用流式細胞學檢測患者機體免疫功能。結果顯示肝癌患者CD4+，CD4+/CD8+高于免疫治療前，較治療前顯著改善，而CD8+低于免疫治療前，三者均由明顯統計學差異，而NK細胞較免疫前均能上升，沒有明顯統計學意義。實驗提示了肝癌患者經免疫治療后免疫狀態較得到明顯改善，此結果與Fan［27］、Deng［28］等研究發現類似，均表明過繼非特異性免疫治療中作用確切，可改善患者免疫功能。由于我們的研究樣本量不夠大,考察指標尚不夠全面，進一步的研究需加大樣本量，并需增加如腫瘤復發率、患者生存率等其它指標。

總之，在肝癌RFA術后序貫非特異免疫治療可以顯著改善患者的全身狀況,有效提高肝癌患者術后近期的免疫功能，可能利于肝細胞肝癌的療效的提高。

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Effect of non-specific immune treatment on immunity of Patient with hepatocellular carcinoma after radiofrequency ablation

JIANG Juyi1,LIU Tianqi21Department of Hepatobiliary Surgery,1Lingshan People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Qinzhou 535400,China;2the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530021,China

Objective To investigate the effect of radiofrequency ablation combined sequential nonspecific immune treatment on patient with hepatic carcinoma.Methods Before and after the radiofrequency ablation combined sequential nonspecific immune treatment,the percentage of CD4+T cells,CD8+T cells and NK cells on peripheral blood were evaluated by flow cytometry.Results After the nonspecific immune treatment,the percentage of CD4+T cells,NK cells and CD4+/CD8+ratio were significantly higher than that without treatment and CD8+was significantly decreased(P＜0.05).Conclusion Non-specific immune treatment can improve the immune function in HCC after RFA.

liver cancer;radiofrequency ablation;immune treatment;immune function

2016-10-26

廣西科學研究與技術開發計劃項目（桂科攻1355005-3-15）

蔣居毅，碩士研究生，E-mail:568118024@qq.com

劉天奇，E-mail:ljrqt@126.com