國內(nèi)外商品化豬偽狂犬病疫苗分類及特點(diǎn)

張文通，魏 鳳，苗立中，李 峰，沈志強(qiáng),

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

國內(nèi)外商品化豬偽狂犬病疫苗分類及特點(diǎn)

張文通1，魏 鳳2，苗立中2，李 峰2，沈志強(qiáng)1,2

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

偽狂犬病（PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起多種家畜和野生動(dòng)物以發(fā)熱、奇癢（豬除外）及神經(jīng)系統(tǒng)障礙為主要特征的一種疾病[1]。本病最早是由匈牙利學(xué)者Aujeszky在1902年發(fā)現(xiàn)。該病在歐洲、美洲、非洲及亞洲都有發(fā)生過的文獻(xiàn)報(bào)道。中國自1947年首次報(bào)道，目前已擴(kuò)大到絕大多數(shù)省市。偽狂犬病的暴發(fā)，給畜牧業(yè)發(fā)展造成了重大經(jīng)濟(jì)損失。

疫苗免疫接種被認(rèn)為是防控PR的有效手段，商品化疫苗的推廣應(yīng)用為有效防控中國PR疫情發(fā)揮了重要作用。筆者概述了目前國內(nèi)外市場上PR疫苗的種類、毒株組成、病毒含量及生產(chǎn)廠家，以期為了解PR疫苗提供參考。

1 總體情況

總體來看，當(dāng)前已有4種PR商品化疫苗，由32家企業(yè)生產(chǎn)，國內(nèi)市場上銷售的廠家有28家（截止到2017年7月24號(hào)，有批簽發(fā)的生產(chǎn)廠家）。其中有3種PR商品化活疫苗：豬偽狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）、豬偽狂犬病活疫苗（Bucharest株）及豬偽狂犬病活疫苗（HB-98株）；1種商品化滅活疫苗：豬偽狂犬病滅活疫苗（鄂A株）。

1.1 豬偽狂犬病滅活苗（鄂A株）

豬偽狂犬病滅活苗（鄂A株）是由陳煥春等[2]從湖北某些豬場死亡新生仔豬腦及內(nèi)臟中分離出來的，并經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)、電鏡形態(tài)觀察、中和試驗(yàn)、病毒核酸型鑒定、動(dòng)物試驗(yàn)、聚合酶聯(lián)反應(yīng)及核酸探針雜交等方法最終將分離到的毒株鑒定為豬偽狂犬病病毒鄂A株。將分離的豬偽狂犬病病毒強(qiáng)毒（鄂A株）用BHK-21傳代細(xì)胞培養(yǎng)，病毒的增值滴度即TCID50能夠達(dá)到10-8.08/0.1 mL[1]。當(dāng)BHK-21傳代細(xì)胞培養(yǎng)豬偽狂犬病病毒鄂A株的TCID50達(dá)到10-6.5/0.1 mL時(shí)收獲病毒，滅活后加入油乳劑而制成滅活苗。滅活苗的優(yōu)點(diǎn)是安全性好，不存在潛伏感染的問題。滅活苗的缺點(diǎn)一是滅活抗原成分含量不高、滅活過程中主要抗原決定簇的丟失，因此需要多次進(jìn)行免疫、加大免疫劑量及添加佐劑（佐劑可能對機(jī)體產(chǎn)生副作用）；其二是不能將內(nèi)源性蛋白抗原呈遞給機(jī)體的免疫系統(tǒng)而不能誘導(dǎo)細(xì)胞毒T細(xì)胞反應(yīng)，不能產(chǎn)生細(xì)胞免疫，而細(xì)胞毒T細(xì)胞反應(yīng)在保護(hù)性免疫中起主導(dǎo)作用；其三是不能在三叉神經(jīng)等PRV潛伏組織中存在或增值，因此不能對潛伏感染進(jìn)行有效預(yù)防或治療。

豬偽狂犬病滅活苗（鄂A株）推薦的免疫程序?yàn)椋菏褂们笆挂呙缙胶庵潦覝夭⒊浞謸u勻，頸部肌肉注射；仔豬斷奶時(shí)每頭2 mL，間隔28~42 d，加強(qiáng)免疫接種1次；母豬產(chǎn)前1個(gè)月免疫接種1次，種用公豬每年免疫2次，劑量為2 mL每次。免疫期為6個(gè)月。

1.2 豬偽狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）

豬偽狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）中毒株是用Bartha株經(jīng)過豬腎、雞胚和雞胚細(xì)胞反復(fù)傳代致弱的1個(gè)弱毒株。

Bartha株于1961年由匈牙利學(xué)者Bartha分離、再經(jīng)過雞胚成纖維細(xì)胞傳代致弱的一個(gè)疫苗毒株。該疫苗毒株由于反復(fù)傳代，或其在某些誘（突）變劑的存在下，用高于通常的培養(yǎng)溫度在細(xì)胞培養(yǎng)物上反復(fù)繼代獲得，其基因組的內(nèi)部存在著多處的點(diǎn)突變以及一些基因的缺失，它是一種天然的基因缺失疫苗。在匈牙利及歐洲地區(qū)應(yīng)用幾十年，實(shí)踐證明效果很好。近年來，采用分子生物學(xué)技術(shù)對該疫苗株的遺傳背景進(jìn)行了分析發(fā)現(xiàn)，在該疫苗株的基因組中存在多個(gè)突變，在US區(qū)存在涉及gI、gE、11K、28K的多個(gè)基因片段缺失。UI區(qū)gC存在點(diǎn)突變，該點(diǎn)突變導(dǎo)致其免疫性能下降[3]。

我國目前廣泛使用的是由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所研制生產(chǎn)的PR弱毒凍干疫苗（Bartha-K61株），是一種gI/gE雙基因缺失弱毒疫苗，由于該基因缺失而進(jìn)一步阻斷弱毒株回復(fù)毒力的可能性，所以大幅提高了這種弱毒苗的安全性。豬偽狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）因生產(chǎn)廠家不同，其病毒含量也不一樣，普通苗其病毒含量在5 000 TCID50/頭份以上，高效苗病毒含量在105.5TCID50~106.5TCID50/頭份。

豬偽狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）推薦免疫程序：肌肉注射；按瓶簽注明的頭份，稀釋為每毫升含1頭份；妊娠母豬及成年豬，每頭2.0 mL；3月齡以上仔豬及架子豬，每頭1.0 mL；乳豬，第1次接種0.5 mL，斷乳后再接種1.0 mL。

1.3 豬偽狂犬病活疫苗（Bucharest株）

偽狂犬病活疫苗（Bucharest株）中的毒株是將Bucharest株通過雞胚成纖維細(xì)胞或雞胚繼代培養(yǎng)800代以上獲得的弱毒疫苗株。經(jīng)基因組的分析表明，Bucharest株在US區(qū)絕大部分的gE基因發(fā)生缺失[4]。該疫苗毒株的缺點(diǎn)如同豬偽狂犬病活疫苗（BarthaK-61株）缺點(diǎn)一樣。

豬偽狂犬病活疫苗（Bucharest株）病毒含量在104.0TCID50/頭份以上。

豬偽狂犬病活疫苗（Bucharest株）用法與用量：3周齡以上豬，肌肉注射，按瓶簽注明頭份，用專用稀釋液進(jìn)行稀釋，每頭豬接種1頭份（2 mL）。推薦接種程序：在3周齡或3周齡以上時(shí)進(jìn)行；對于免疫母豬所產(chǎn)仔豬，應(yīng)在母源抗體下降后（約8~12周齡時(shí)）進(jìn)行。加強(qiáng)接種：對于種豬，每半年加強(qiáng)接種1次；對于懷孕母豬，可在懷孕40 d后進(jìn)行加強(qiáng)接種。

1.4 豬偽狂犬病活疫苗（HB-98株）

豬偽狂犬病活疫苗（HB-98株）是以陳煥春等分離的豬偽狂犬病病毒鄂A株為種毒，應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)、基因工程技術(shù)等手段研制出的具有獨(dú)立自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的豬偽狂犬病活疫苗（HB-98株）。該疫苗缺失了豬偽狂犬病病毒鄂A株的TK基因、gG基因及gE基因[5]。

豬偽狂犬病病毒TK基因?yàn)樨i偽狂犬病病毒的主要毒力病毒基因之一，控制病毒在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的復(fù)制[6]。TK基因的缺失可以大幅降低病毒的毒力而不影響病毒在組織培養(yǎng)的增值。

豬偽狂犬病病毒gG蛋白為豬偽狂犬病病毒的非必需蛋白，不存在病毒粒子中[6]。豬偽狂犬病病毒編碼的gG蛋白是一種趨化因子結(jié)合蛋白，由于gG蛋白與機(jī)體本身的趨化因子結(jié)合，使趨化因子不能發(fā)揮功能，導(dǎo)致機(jī)體不易或難以識(shí)別侵入的病毒。將gG缺失后消除了與機(jī)體本身的趨化因子結(jié)合的可能，游離的趨化因子能迅速識(shí)別病毒，提高疫苗的免疫原性，而且很快產(chǎn)生免疫反應(yīng)（特別是細(xì)胞免疫），從而達(dá)到治療效果。試驗(yàn)證實(shí)缺失gG基因的疫苗能顯著增強(qiáng)天然免疫應(yīng)答。

豬偽狂犬病病毒gE蛋白為豬偽狂犬病病毒的非必需蛋白，但決定其毒力，并促進(jìn)其進(jìn)入豬中樞神經(jīng)系統(tǒng)[6]。gE基因的缺失可降低病毒毒力及神經(jīng)組織嗜性。因gE不是其增值所必需蛋白，因此可作為研制豬偽狂犬病基因缺失苗的標(biāo)記基因。缺失gE基因的豬偽狂犬病活疫苗可以通過gE鑒別診斷方法區(qū)分野毒與疫苗毒，有利于根除豬偽狂犬病方案的實(shí)施。

豬偽狂犬病活疫苗（HB-98株）其病毒含量105.0TCID50/頭份以上。

豬偽狂犬病活疫苗（HB-98株）推薦免疫程序?yàn)椋篜RV抗體陰性仔豬，在出生后1~3日齡滴鼻或肌注免疫，6~8周后加強(qiáng)免疫1次；具有PRV母源抗體的仔豬，在45日齡左右肌注免疫；經(jīng)產(chǎn)母豬，每4個(gè)月免疫1次或產(chǎn)前14~21 d免疫1次；后備母豬，6月齡左右肌肉注射1次，間隔1個(gè)月后加強(qiáng)免疫1次，產(chǎn)前1個(gè)月左右再免疫1次；種公豬每年春、秋季各免疫1次。

2 小結(jié)

防制豬偽狂犬病最有效的措施就是疫苗接種。目前商品化的豬偽狂犬病疫苗有滅活苗和基因缺失疫苗。滅活苗在安全性方面高于弱毒苗，缺點(diǎn)是不能在偽狂犬病病毒潛伏組織如三叉神經(jīng)等中增值、對有潛伏感染的豬不能起到預(yù)防作用；如果豬偽狂犬病病毒抗體檢測為陰性的豬場，可以使用滅活苗進(jìn)行預(yù)防豬偽狂犬病病毒的侵襲。豬偽狂犬病基因缺失疫苗毒力較弱、免疫原性較好并且有的具有缺失標(biāo)記基因，能夠建立配套的鑒別診斷方法，為根除豬偽狂犬病提供了可能；曾經(jīng)感染過豬偽狂犬病病毒的豬場可以用基因缺失疫苗來控制疫情并淘汰野毒感染豬群。

[1] 殷震，劉景華．動(dòng)物病毒學(xué)[M]．北京：科學(xué)出版社，1997：988-1009．

[2] 陳煥春，方六榮，何啟蓋，等．豬偽狂犬病病毒鄂A株的分離鑒定[J]．畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1998，29（2）：156-161．

[3] 劉建華，李娜，仇華吉，等．偽狂犬病病毒Bartha-K61株UL49基因的克隆和序列分析[J]．中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2005，27（4）：269-272．

[4] 王全杰，張智明，戴秀莉，等．豬偽狂犬疫苗的研究進(jìn)展[J]．黑龍江畜牧獸醫(yī)，2013（8）：40-42．

[5] 湯細(xì)彪，劉峰，諶磊，等．豬偽狂犬活疫苗（HB-98株）的分子特性與免疫效果分析[J]．獸醫(yī)導(dǎo)刊，2011（6）：42-43．

[6] 趙蕾，管宇，李坤林，等．偽狂犬病病毒分子生物學(xué)的研究進(jìn)展[J]．中國獸醫(yī)科學(xué)，2011，41（7）：765-770．

S858.285.3

A

1002-1957(2017)06-0119-02

2017-08-04

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（SDAIT-08-17）

張文通（1979-），男，河南滎陽人，助理研究員，碩士，主要從事基因工程疫苗研究.E-mail：hzndzwt1@163.com

（編輯：柳青）