關于規模化養豬場疫病的監測與檢測問題

萬遂如

（中國畜牧獸醫學會動物傳染病學分會，吉林 長春 130122）

關于規模化養豬場疫病的監測與檢測問題

萬遂如

（中國畜牧獸醫學會動物傳染病學分會，吉林 長春 130122）

規模化養豬場平時對豬群健康狀況進行定期檢查，對疫病進行監測與檢測，全面收集疫病流行動態及生產中出現的問題，對豬群健康水平進行綜合評估，對疫病發生的危險程度進行預測預警是檢疫與疫病監測的主要任務，也是規模化養豬場防疫體系中的一項非常重要的技術措施。許多養豬場對豬場疫病監測與檢測不夠重視，是防疫體系中的一個薄弱環節。目前由于動物與動物產品國際貿易流動頻繁，豬只新品種不斷地引進，造成各種疾病相應增多。許多養豬場呈現老病新發，新病不斷的出現；多種病原體混合感染與繼發感染普遍存在；病原體變異加快，毒力增強，致病力增強，細菌耐藥性日趨嚴重；免疫抑制威脅加劇，免疫失敗時有發生；豬群（特別是種豬群）長期帶毒，處于亞健康狀態等。面對如此嚴峻的疫病防控形勢，規模化養豬場，特別是種豬場一定要高度重視對豬場疫病進行監測與檢測，把它作為防疫體系中的一項重要技術措施抓好抓實，并使之制度化與合理化。本文就規模化養豬場疫病的監測與檢測問題談點個人意見，僅供養豬場參考。

1 規模化豬場疫病監測與檢測的目的

（1）規模化養豬場通過有計劃的定期對豬群進行疫病監測，可系統科學地掌握豬場疫病發生與流行動態和危害程度，為制定和調整相應的疫病預防與防控措施提供有力的科學依據，做到疫病防控心中有數。

（2）養豬場通過對免疫豬群的抗體檢測，以評估疫苗的免疫效果，檢查免疫程序是否科學合理，為豬用疫苗的選擇與使用以及進一步完善結合豬場生產實際的免疫程序提供可靠的實踐證據，防止豬群免疫失敗而誘發疾病。

（3）發生疫情時對疫病進行檢測，以確診豬群發病原因，可及時針對致病病原體采取相應的控制措施，以降低疫情發生造成的經濟損失。

（4）通過對豬場疫病的監測，能及時發現養豬場相關疫病病原體的變異、新毒株與新血清型病原的出現，以便有針對性地及時調整養豬場疫病預防與控制策略，保障養豬生產的健康發展。

（5）養豬場引進新品種或進行疫病凈化時，一定要嚴格檢疫，對疫病進行監測與檢測，防止引入病原，及時淘汰陽性豬只（帶毒豬），建立健康的陰性豬群。

2 養豬場疫病監測與檢測的主要內容

2.1 獸醫臨床監測與診斷

主要內容包括認真觀察豬群的健康狀況，重點注意豬只采食飲水、運動、休息及體溫變化等，發病個體與群體的臨床表現、流行特點、發病率、死亡率及治療效果等。

2.2 病理學監測與診斷

主要內容包括病豬與病死豬的解剖，尸體外部及內部檢查，觀察大體病變；同時采取病變組織及分泌物等，進行病理組織樣本的顯微病理學觀察。

2.3 病原學監測與診斷

主要內容包括采取臨床病理樣本做病原體檢測，進行病原學的分離培養與鑒定，生化特性試驗，動物試驗，病原的分子流行病學監測，病原菌的耐藥性監測等。

2.4 病原體血清型監測與診斷

主要內容包括豬群感染的病原體血清型診斷，豬群感染狀況的血清型監測，豬群疫苗免疫效果的評價等。

3 養豬場疫病監測與檢測技術的應用

養豬場在正常生產中一般每半年對豬群檢測1次免疫抗體，每年監測1次病原。引進新品種豬只時要全面進行檢疫，進行疫病凈化時定期對豬群實時監測與檢測，發生疫情時隨即進行疫病檢測與診斷。監測與檢測之前要按照規定無菌采取血清、扁桃體、脾、肝、肺、腎、淋巴結、小腸、糞尿及其它分泌物等送相關部門進行監測與檢測。組織樣本冷凍，血清冷藏，妥善保存運輸送檢。常用的監測與檢測技術如下。

3.1 血清學技術

血清學技術是監測與檢測豬疫病的一項重要手段，它可利用已知的微生物抗原（病毒或細菌抗原、基因工程表達的重組特異性抗原蛋白）來檢測發病豬群或個體體內存在的特異性抗體，或比較發病豬群或個體急性發病期和恢復期的特異性抗體水平有無升高，從而判定豬群或個體是否受到感染而做出診斷。利用血清學技術還能監測豬群的帶毒情況，以及進行疫苗免疫效果的評價。也可應用特異性診斷血清或單克隆抗體，采用相應的血清學技術來檢測病原微生物和對分離的病原體進行相應的鑒定。血清學技術還可區分野毒感染和疫苗免疫接種豬群或個體的抗體檢測。目前在豬疫病監測與檢測中使用較多的血清學技術主要有免疫酶技術（如ELISA、免疫組織化學染色法、JPMA等）、免疫熒光技術與膠體金試紙條等，其次是中和試驗、凝集試驗、沉淀試驗、補體結合試驗等。

3.2 分子生物學技術

分子生物學技術又稱基因診斷，主要是針對不同病原微生物所具有的特異性核酸（基因）序列和結構進行測定，如聚合酶鏈式反應（PCR、PT-PCR、實時熒光定量-PCR等），主要用于檢測病原體，做疫病的早期診斷和傳染源的鑒定。核酸分子雜交技術（包括southren雜交、Norther雜交、原位雜交、斑點雜交等）可用于對疫病病原體作出快速準確診斷，并對病原體進行準確分類鑒定，檢測出帶菌、帶毒隱性感染動物以及對動物產品進行衛生檢測等。生物芯片技術（包括基因芯片、蛋白質芯片、組織芯片、細胞芯片）可用于鑒定靶序列、基因突變檢測、基因表達監控、新基因發現、遺傳制圖等。

4 養豬場主要疫病的監測與檢測

4.1 豬瘟（CSF）

養豬場按照免疫接種計劃定期應用的豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒監測豬群免疫抗體水平，可科學地評估豬瘟疫苗免疫抗體水平和免疫效果，為合理制定和調整豬瘟疫苗免疫程序提供可靠依據。除外，中和過氧化物酶聯試驗和免疫熒光抗體病毒中和試驗等也可用于豬瘟病毒抗體監測。冰凍切片直接熒光抗體試驗、抗原捕獲ELISA試驗以及RT-PCR檢測試劑盒等可用于檢測豬瘟病毒抗原與野毒感染。應用C系兔化弱毒特異單抗和強毒特異單抗親和層析提純的強弱毒抗原進行ELISA試驗，可以區分疫苗弱毒感染、野毒感染和混合感染所引起的抗體反應，這為控制和消滅豬瘟提供了新的手段。對種豬群進行豬瘟凈化時需活體采取扁桃體，對冰凍切片作直接熒光抗體試驗檢測抗原，這是養豬場凈化豬瘟最常用的一種監測方法，具有方法簡便、快速、可靠的特點。養豬場定期采用抗原或抗體檢測方法監測亞臨床感染的豬群，對防控與消滅豬瘟具有重要意義。

4.2 豬口蹄疫（FMD）

發生疫情時，可采取新鮮的水皰皮、水皰液或其他組織樣品，應用反向間接血凝試驗、反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）試驗、乳鼠中和試驗、微量補體結合反應等進行病原檢測，可用于豬口蹄疫診斷、檢測和流行病學調查。其中反向間接血凝試驗，除了檢測口蹄疫病毒之外，還可鑒定口蹄疫病毒亞型與排除豬傳染性水皰病。采取血清樣品時，可應用正向間接血凝試驗（IHA）、結構蛋白及非結構蛋白抗體酶聯免疫吸附試驗或液相阻斷酶聯免疫吸附試驗等進行抗體檢測，檢查疫苗的免疫效果。要求兩次免疫后1個月監測豬群抗體水平與陽性率，每批疫苗監測一批豬，每個疫苗供應企業監測一批疫苗。豬口蹄疫病毒非結構蛋白抗體阻斷ELISA試驗，可用于豬口蹄疫病毒（FMDV）感染的檢測、檢疫，以及口蹄疫病毒滅活疫苗免疫與自然感染口蹄疫病毒的鑒別診斷。目前養豬場常用的豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC-ELISA抗體檢測試劑盒，就可區別豬群中口蹄疫野毒感染和疫苗免疫的豬只。一般豬群中出現符合口蹄疫典型臨床癥狀特征，經病毒抗原檢測為陽性者；懷疑發病豬群，非結構蛋白抗體呈陽性者；未免疫豬群，病毒抗體呈陽性者，都可診斷為口蹄疫疫情。

4.3 豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）

用于PRRS檢測與鑒定的方法有：間接免疫熒光抗體技術、免疫過氧化物酶試驗、RT-PCR技術、電鏡技術及基因芯片技術等。這些技術均可直接檢測病豬肺臟、腹水、血液、精液、糞便及細胞培養物中的病毒抗原。方法快速，特異性高。檢測血清中的PRRSV抗體，有PRRSV抗體（間接ELISA）檢測試劑盒、免疫過氧化物酶單層試驗（IPMA）、間接免疫熒光抗體試驗（IFA）和血清中和試驗等。這些方法的敏感性和特異性都很好，臨床上使用較多。但是抗體監測不能區分疫苗免疫豬與野毒感染豬、不能區分不同毒株的感染和多毒株的共感染，抗體水平和陽性率也不能代表PRRSV疫苗的免疫效果。豬群PRRSV的血清型監測，陰性豬場每半年或每季度監測1次；陽性豬場要監測豬群抗體，以分析評估豬群中的感染狀況。目前用單克隆抗體技術檢測PRRSV抗原，可鑒定不同來源毒株的抗原表位、病毒分型以及區分野毒株和疫苗毒株感染。用擴增PRRSV基因的RT-PCR方法監測可區分美洲型和歐洲型毒株，此法已在獸醫臨床上被廣泛應用。

4.4 豬偽狂犬病（PR）

乳膠凝集試驗（LAT），如gG-LAT方法可檢測PRV抗原，區分gG基因缺失疫苗免疫豬和野毒感染豬血清抗體，可用于PR的鑒別診斷、疫病監測、流行病學調查與種豬群檢測凈化。此方法具有操作簡便、快速、敏感性高、特異性強、不需要儀器設備、易于推廣應用的特點。聚合酶鏈式反應（PCR）檢測試劑盒，既可用于檢測活體扁桃體細胞、實質組織、潛伏感染豬只的偽狂犬病病毒，又可根據gD、gE、gG基因序列設計兩對引物，進行DNA擴增，可區分疫苗毒與田間強弱毒株。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）可用于檢測抗原，又可以檢測抗體，具有快速、簡便、特異性強、敏感性高的特點。gE抗體的膠體金試紙條（gE-GICA）可用于PRV野毒感染的快速篩查，適用于PR的臨床診斷，具有簡便、快速、敏感、特異的優點。目前在獸醫臨床上與種豬群凈化時，常用的監測方法是：檢測PR抗體與血清學調查多用豬偽狂犬病乳膠凝集試驗抗體檢測試劑盒和豬偽狂犬病病毒ELISA檢測試驗盒等。種豬群凈化時，檢測偽狂犬病野毒抗體使用gE-ELISA試劑盒；免疫抗體檢測使用gB-ELISA試劑盒與滅活全病毒為抗原的ELISA試劑盒，必要時配合使用中和試驗等。監測重點是區分野毒感染豬與疫苗免疫豬。陰性豬場的種豬群要每半年監測1次；陽性豬場種豬群應每季度監測1次，要特別重視后備種豬的監測。

4.5 豬圓環病毒2型感染（PCV2）

目前我國養豬場圓環病毒2型感染率在98%以上，陰性豬場很少，在普遍感染的情況下，對病原學進行監測其意義不大。對PCV2的抗體監測和血清學調查可用豬圓環病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒與豬圓環病毒2型膠體金抗體檢測試劑盒進行。雖然PCV2抗體監測不能區分疫苗免疫豬與野毒感染豬，不能評價疫苗免疫效果，但可以反映豬場的感染狀況，可用于評價疫苗免疫狀況。

4.6 豬乙型腦炎（JE）

檢測豬乙型腦炎病毒抗原的方法有熒光抗體技術、免疫細胞化學法和反向被動血凝試驗等。逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）是病原學早期診斷最有效的診斷方法，具有敏感、特異、操作簡單、易自動化的特點。目前獸醫臨床上使用較多的豬乙型腦炎乳膠凝集試驗抗體檢測試劑盒和豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測試劑盒可用于豬乙型腦炎檢測抗體和血清學調查，具有特異、敏感、微量、快速、簡易的特點。

4.7 豬病毒性腹瀉疾病

用免疫熒光抗體技術作熒光抗體染色檢查，可檢測腹瀉病毒抗原，并區分傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、流行性腹瀉病毒（PEDV）與輪狀病毒（PoRV）3種病毒。ELISA方法在獸醫臨床上使用既可測定抗原，又可測定抗體，具有很高的敏感性和特異性，可用于腹瀉病毒的檢測（直接從糞便中檢測病毒抗原）。用PCR和RT-PCR方法檢測腹瀉性病毒，并能鑒別診斷TGEV、PEDV與PoRV 3種病毒，為鑒別病毒性腹瀉病原的混合感染提供了技術支持。近年來建立的腹瀉性病毒膠體金抗體檢測試紙條法又可用于抗體水平的檢測，方便、快速、安全、便于操作，是一種環保型的檢測方法。

4.8 豬的細菌性疾病

豬場細菌性疾病的監測除了必要的病原學監測與耐藥性監測之外，重點是對病原進行血清型鑒定，區別野毒感染豬和疫苗免疫豬，以便為豬場選用相應的疫苗免疫接種和使用最敏感的藥物防治疫病提供科學的實踐依據。目前臨床上用PCR技術檢測病原，用ELISA技術檢測抗體，其敏感性與特異性尚佳。

4.8.1 豬傳染性胸膜肺炎（APP） 間接血凝試驗（IHA），可用于APP早期診斷、檢測與分型，具有操作簡便、敏感性強、特異性高的特點。聚合酶鏈反應（PCR），可用于APP的早期診斷和快速鑒定細菌血清型，其敏感性和特異性都很高。豬傳染性胸膜肺炎APXIV-ELISA抗體檢測試劑盒和豬傳染性胸膜肺炎APXIV膠體金抗體檢測試劑盒等可用于APP檢測，并能區分野毒感染和疫苗免疫豬，目前在獸醫臨床上已廣為應用。

4.8.2 豬鏈球菌病（SS） 協同凝集試驗可用于鏈球菌血清定性，PCR方法可用于診斷及檢測鏈球菌特異性基因，其敏感性與特異性都很高。豬鏈球菌2型ELISA抗體檢測試劑盒，可用于檢測抗體和血清學調查，目前獸醫臨床上使用較多。

5 養豬場疫病監測注意的問題

5.1 養豬場要提高對豬疫病進行監測的重要性認識

隨著生態養豬生產的發展，在規模化豬場疫病防控中，獸醫實驗室監測與檢測技術的地位與作用越來越顯得突出與重要。應用當代先進的檢測技術與方法，開展疫病的監測與檢測工作，以評估各種病原體、毒素和生理生化等指標，系統全面診斷和評估豬群的健康狀況與生產性能，為疫病診斷、評估和疫病防控提供可靠、精準和科學的依據，用于指導生態養豬生產和疫病防控工作，這對發展生態健康養豬和科學的防控疫病、提高豬場的生產效益與經濟效益都具有重要的實際意義。為此，養豬場一定要高度重視豬場的疫病監測工作，并使之制度化、合理化、常態化。

5.2 大型規模化養豬場應創造條件建立自己的實驗室

一般養豬場受經費、人員與條件的限制，其豬場的疫病監測工作只能依賴于國家獸醫行政部門、相關的農業院校、科研院所以及大型動保企業的獸醫診斷室與獸醫實驗室來完成。大型規模化養豬場有條件建立自己的疫病診斷與監測實驗室，只要大力培養技術人才，購制相應的現代儀器與設備，購買商品化的、特異、準確的檢測試劑與試劑盒，就可對病原學與血清學開展監測工作。這樣既方便養豬生產，又可節約費用，提高養殖業的競爭力，從長遠來看這是大型養殖企業創新發展的必由之路。

5.3 制定疫病監測與檢測方案一定要結合養豬場的生產實際

養豬場制定疫病監測與檢測方案時一定要很好地結合豬場生產實際、疫病流行狀況、臨床檢查結果、飼養管理水平、人員素質、實驗室條件以及養豬環境污染等綜合考慮，合理制定。這樣的監測與檢測方案才具有科學性與實用性，其獲得的結果和數據才有可能符合養豬場的生產實際，再經過合理分析、科學評估后，對疫病預防與防控、對養豬生產才能真正起到指導作用。

5.4 注意檢測樣品的采集、保存與送檢

采取檢測樣品要一律嚴格遵守無菌操作，各種用具、器械、注射用器、容器及操作人員必須進行嚴格消毒，按操作規程進行采取。血清樣品于4℃冷藏保存，24小時送達實驗室。組織與器官等病料-20℃凍存，不要反復凍融，盡快送達實驗室。送檢樣品裝好后要編號、標明豬號、樣品名稱、免疫情況、采取的地點、時間等。運送實驗室一律按冷鏈要求實施。

5.5 嚴格實驗室技術操作規范

每一項檢測技術實施時都要按照實驗室技術操作規范進行，做到認真操作、細心觀察、及時記錄試驗結果，數據要準確無誤。因為檢測技術操作的規范性直接會影響到檢測結果的準確性與可靠性。

5.6 注意疫病檢測中的生物安全

實驗室檢測前后都要進行嚴格的消毒，保證無污染源。技術人員操作時要做好自身防護，如戴口罩、手套、穿工作鞋和工作服，試驗前后均要洗手消毒，防止感染與傳播人畜共患病。檢測結束后，多余的檢測樣品、廢棄物及污染物等一律集中統一消毒處理，防止二次污染豬場環境。

隨著動物疫病防控進入凈化時代，養豬場的疫病通過監測、檢驗檢疫、隔離、撲殺、建立陽性健康豬群，強化生物安全等綜合措施，在豬場消滅或消除病原，達到豬群不發病和無感染狀態，實現養豬場的疫病有效凈化。目前我國已發布了《國家中長期動物疫病防治規劃（2012—2020年）》，其中提出了優先防治禽流感等16種國內動物疫病，逐步實現種畜禽場8種主要疫病的凈化。我國對動物疫病凈化技術水平有了巨大的提升，對豬瘟、豬偽狂犬病、豬口蹄疫等疫病已經具備了凈化的條件。因此，規模化豬場，特別是種豬場一定要把豬場疫病的監測與檢測、檢疫工作融入到養豬場疫病凈化系統工程之中，實施豬場的疫病凈化，這是防控豬場流行病的方向。

中年感染炎癥或致老年癡呆

【法新社美國邁阿密11月1日電】研究人員今天說，中年感染過炎癥的人日后更有可能出現大腦萎縮—可能是癡呆或阿爾茨海默病的前兆。

這份發表在《神經學》周刊上的研究報告是揭開癡呆與炎癥之間關聯的最新成果。

不過，研究結果未能證明二者之間的因果關系。

研究報告作者、約翰斯·霍普金斯大學醫學院的基南·沃克說：“這些結果表明中年感染炎癥可能是大腦變化的一個早期誘因，與阿爾茨海默病及其他癡呆癥相關。”

他說：“因為導致腦細胞損失的進程早在癥狀出現前幾十年就已開始，所以非常重要的是，我們必須弄清中年發生的這些進程多年后是如何致病的。”

研究人員對平均年齡為53歲的1 633人進行了研究。研究人員化驗了他們血液中五項炎癥標志物的含量，包括白血球的數量。

平均24年后，參與研究的對象進行了記憶測試，并接受了大腦掃描檢查。

報告稱，中年時期三項以上炎癥標志物水平較高的人，其大腦中與阿爾茨海默病相關的海馬體及其他區域的腦容量平均降低了5%。

炎癥標志物含量高的人在記憶測試中也表現略差，平均只記住了要求記憶的10個單詞中的5個，而非炎癥組的人為5.5個。

未參與研究的專家稱這項研究規模龐大，方法嚴謹。但是，他們強調研究并未涉及患者是否最終得了阿爾茨海默病，只是說有些人表現出大腦萎縮和記憶喪失的癥狀。

英國阿爾茨海默病研究所研究部主任卡蘿爾·勞特利奇說：“研究顯示，炎癥可能是日后大腦退化的早期指標，但我們無法斷定炎癥是否會導致大腦萎縮，抑或只是對其他可能已經發生的有害進程的一種反應。”

她還說：“研究人員在單個時間點測量炎癥水平，我們不知道這是不是反映通常炎癥狀況的可靠指標。”

阿爾茨海默病協會研究與發展部主任道格·布朗說，上述研究結果與越來越多的研究結論相符，表明炎癥與免疫系統的問題跟癡呆癥有關。

（轉自 參考消息[N]，2017-11-06）

S858.28

A

1002-1957(2017)06-0093-04

2017-10-27

萬遂如（1938-），男，江西南昌人，教授，主要從事家畜傳染病的教學、科研及臨床工作，現任中國畜牧獸醫學會動物傳染病學分會名譽秘書長.

（編輯：柳青）