微小RNA-375 在急性胰腺炎患者外周血中的表達及與并發急性肝損傷的相關性

陳映群 張衛星 尹子涵 林旭偉

急性胰腺炎（Acute pancreatitis，AP）是臨床最常見急腹癥之一，發展迅速、預后兇險，可伴有其他器官功能改變，嚴重者合并多器官功能障礙綜合征［1］。研究指出，AP 時胰外臟器距胰腺越近，損傷風險越大，急性肝損傷（Acute liver injury，ALI）最為常見［2］。ALI 可通過釋放大量炎癥介質、影響毒素代謝等途徑進一步加重全身炎癥反應，增加AP 死亡率［3］。因此，及時準確評估AP 嚴重程度、盡早預測ALI 并積極治療，顯得尤其重要。微小RNA（miRNA）是內源性非編碼RNA，廣泛參與炎性反應及發育、代謝等多種生理病理過程。近年研究發現，miRNA 與AP 發生、發展密切相關［4-5］。傅冬陽等［6］利用miRNA 表達譜芯片及熒光定量聚合酶鏈反應得出miRNA-375 在AP 患者血清中明顯高表達，且與病情程度有關。但關于miRNA-375 與AP 并發ALI的相關性，尚未見研究報道。因此，本研究對此展開探討，旨在為臨床合理治療提供依據。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年1 月至2021 年12 月北京大學深圳醫院AP 患者146 例為觀察組，納入標準：均符合AP 診斷標準［7］；發病24 h 內就診；病例有完整記錄；患者或家屬知情同意。同期選取健康體檢者45 名為對照組，納入標準：體檢未見異常；知情同意并簽署同意書。排除標準：合并慢性肝功能不全；冠心病病史；肝惡性腫瘤；7 d 內有大量飲酒、服用肝毒性藥物等可疑引發肝損傷行為；惡性腫瘤、艾滋病等重大影響免疫力的疾病；孕婦或哺乳期婦女。觀察組男84 例，女62 例，年齡43～75歲，平均（61.28±6.35）歲，合并糖尿病13 例，高血壓25 例。對照組男25 名，女20 名，年齡43～75 歲，平均（61.28±6.35）歲。兩組基線資料均衡可比（P＞0.05）。本研究經院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 資料收集

收集患者一般資料，包括年齡、性別、合并癥、肝功能指標［堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、丙氨酸氨基轉移酶（Alanine aminotransferase，ALT）、谷氨酰轉肽酶（Gamma glutamyl transferase，GGT）、天冬氨酸氨基轉移酶（aspartate aminotransferase，AST）、總膽紅素］、血液學參數、淀粉酶、急性生理學及慢性健康狀況評分系統（Acute Physiology and Chronic Health Status Scoring System，APACHEⅡ）評分、Ranson 評分、改良CT 嚴重指數（Modified CT severity index，MCTSI）。

1.2.2 血清miRNA-375 檢測

采集空腹肘靜脈血3 mL，離心（時間5 min，半徑8 cm，轉速1800 r/min），取血清，提取總RNA，進行逆轉錄-聚合酶鏈反應，U6作為內參基因，采用2-ΔΔCt法計算miR-375 相對表達量。

1.2.3 AP 病情程度：輕型AP（Mild acute pancreatitis，MAP）

輕度器官功能不良，無SAP 臨床表現，對恰當補液反應良好，CT 增強可見胰實質正常。重型AP（Severe acute pancreatitis，SAP）：AP 伴有器官衰竭和/或局部并發癥。

1.2.4 ALI 診斷標準［8］

（1）ALT 和AST 升高≥3×參考范圍（upper limit of normal，ULN）；（2）ALP或GGT升高≥2×ULN。符合（1）或（2）為ALI。ALT 和AST 的ULN 均為40 IU/L；ALP 的ULN 為160 U/L；GGT 的ULN 為50 U/L。

1.3 統計學處理

采用統計學軟件SPSS 22.0 處理數據，計量資料以（±s）描述，以t檢驗進行組間比較；計數資料用n（%）表示，以χ2檢驗進行統計分析；采用Pearson 分析相關性；二元Logistic 回歸分析ALI 影響因素；診斷價值采用受試者工作特征（ROC）曲線，獲取AUC、置信區間、敏感度、特異度。均采用雙側檢驗，以P＜0.05 差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清miRNA-375 水平比較

觀察組血清miRNA-375 水平為（3.49±0.68），顯著高于對照組的（0.59±0.09），差異有統計學意義（t=28.481，P＜0.001）。

2.2 不同病情AP 患者血清miRNA-375 水平、淀粉酶水平、APACHEⅡ評分、Ranson 評分、MCTSI指數比較

SAP 患者血清miRNA-375 水平、淀粉酶水平、APACHEⅡ評分、Ranson 評分、MCTSI指數均顯著高于MAP患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同病情AP 患者血清miRNA-375 水平、淀粉酶水平、APACHEⅡ評分、Ranson 評分、MCTSI 指數（±s）Table 1 Serum miRNA-375 level，amylase level，APACHE II score，Ranson score，MCTSI index in AP patients with different conditions（±s）

表1 不同病情AP 患者血清miRNA-375 水平、淀粉酶水平、APACHEⅡ評分、Ranson 評分、MCTSI 指數（±s）Table 1 Serum miRNA-375 level，amylase level，APACHE II score，Ranson score，MCTSI index in AP patients with different conditions（±s）

病情程度MAP SAP t 值P 值n 75 71 miRNA-375 3.19±0.65 3.81±0.74 5.386＜0.001淀粉酶（IU/L）208.26±55.63 313.69±79.64 9.314＜0.001 APACHEⅡ評分（分）3.46±1.08 7.09±1.57 16.351＜0.001 Ranson 評分（分）2.51±0.84 6.25±1.12 22.905＜0.001 MCTSI 指數2.26±0.79 6.38±1.05 26.883＜0.001

2.3 AP 患者血清miRNA-375 水平與淀粉酶水平、APACHEⅡ評分、Ranson 評分、MCTSI 指數相關性

AP 患者血清miRNA-375 水平與淀粉酶水平（r=0.643，P＜0.001）、APACHE Ⅱ評 分（r=0.856，P＜0.001）、Ranson 評分（r=0.830，P＜0.001）、MCTSI指數（r=0.893，P＜0.001）均呈正相關。

2.4 AP 患者并發ALI 的單因素分析

146 例AP 患 者 中，91 例 并 發ALI，55 例 無ALI。并發ALI 的AP 患者血清淀粉酶、miRNA-375水平均顯著高于無ALI 者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 AP 患者并發ALI 的單因素分析［n（%），（±s）］Table 2 Univariate analysis of AP patients complicated with ALI［n（%），（±s）］

表2 AP 患者并發ALI 的單因素分析［n（%），（±s）］Table 2 Univariate analysis of AP patients complicated with ALI［n（%），（±s）］

臨床特征年齡＜60 歲≥60 歲性別ALI（n=91） 無ALI（n=55）χ2/t 值P 值39（42.86）52（57.14）31（56.36）24（43.64）2.5060.113男女52（57.14）39（42.86）32（58.18）23（41.82）0.0150.902糖尿病有無9（9.89）82（90.11）4（7.27）51（92.73）0.0570.812高血壓有無17（18.68）74（81.32）8（14.55）47（85.45）0.4130.520肝功能指標ALP（U/L）ALT（U/L）GGT（U/L）AST（U/L）總膽紅素（μmol/L）血液學參數中性粒細胞（×109/L）白細胞計數（×109/L）淋巴細胞（×109/L）淀粉酶（IU/L）APACHEⅡ評分（分）Ranson 評分（分）MCTSI 指數miRNA-375 138.82±64.26 159.32±71.08 251.63±76.89 102.51±36.82 29.84±9.65 129.65±57.39 151.07±62.37 243.58±65.72 95.07±33.28 28.72±8.43 0.869 0.711 0.647 1.226 0.712 0.386 0.478 0.519 0.222 0.478 12.06±3.5111.35±3.071.2400.217 12.57±3.8111.50±3.421.7080.090 0.97±0.29 282.53±72.49 5.39±1.51 4.44±1.08 4.36±1.16 3.72±0.71 1.05±0.27 221.47±53.61 4.96±1.28 4.15±0.97 4.09±0.92 3.11±0.63 1.657 5.413 1.763 1.633 1.469 5.244 0.100＜0.001 0.080 0.105 0.144＜0.001

2.5 二元Logistic 回歸分析

以是否發生ALI 為因變量，以淀粉酶和miRNA-375 為自變量進行二元Logistic 回歸分析，結果顯示，淀粉酶和miRNA-375 升高為AP 患者并發ALI 的獨立危險因素（P＜0.05）。見表3。

表3 AP 患者并發ALI 的多因素Logistic 回歸分析Table 3 Multi factor Logistic Regression Analysis of AP Patients Complicated with ALI

2.6 淀粉酶、miRNA-375 對AP 患者并發ALI 的預測價值

ROC 曲 線 顯 示，miRNA-375 預 測AP 患 者 并發ALI 的AUC 為0.810，95%CI為0.735～0.884，cut-off 值3.31，對應特異度、敏感度分別為0.746、0.791；淀 粉 酶 預 測AP 患 者 并 發ALI 的AUC 為0.708，95%CI為0.608～0.875，cut-off 值259.72 IU/L，對應特異度、敏感度分別為0.711、0.736。見圖2。

圖2 ROC 曲線Figure 2 ROC curve

3 討論

AP 可累及胰腺周圍組織及遠隔器官，以全身炎癥反應、多器官功能障礙綜合征為主要病理特征［9］。AP 發生時，大量炎性因子經門靜脈進入肝臟，引起ALI，而ALI 又會引起對胰源性致病因素的屏障作用損傷，進一步加重患者病情，增加患者病死率［10］。因此，應對AP 合并的ALI 予以充分重視。

miRNA 參與細胞增殖、分化、凋亡等一系列生命過程中的重要進程，生物信息學統計表明，現階段已發現的miRNA 調節人類基因達50%以上［11］。血清miRNA 具有穩定性高、取材方便、檢測快速的特性，可作為疾病的診斷及預后評價的無創生物標志物。miRNA-375 是在胰腺組織中檢測到的第一個miRNA，可在胰腺中高度特異性表達［12］。miRNA-375 在胰腺中的作用包括調控胰腺細胞生長及B 細胞分化，進而調節胰島素分泌，因而早期研究主要集中在胰腺、miRNA-375、糖尿病三者的關系［13］。近年研究發現，AP 患者血清miRNA-375顯著上調，且可用于病情嚴重程度評估［14］。本研究顯示，AP 患者血清miRNA-375 水平明顯高于健康體檢者，且與淀粉酶水平、APACHEⅡ評分、Ranson 評分、MCTSI 指數均呈正相關，與上述報道一致。有研究指出，miRNA-375 可特異性調節胰島表達，抑制胰島素分泌，誘發胰島素抵抗［15］。胰島素抵抗是一種慢性炎癥狀態，對AP 起致病性作用，同時，炎癥因子通過Janus 酪氨酸蛋白激酶信號傳導與轉錄激活蛋白（Janus kinase/signal transducer and activator of transcription，JAK/STAT）干擾葡萄糖代謝功能，加重胰島素抵抗，形成惡性循環，加重AP 炎性反應過程［16］。因此，miRNA-375 可能成為AP 診斷及病情評價的生物標志物。

AP 常并發胰外臟器損傷（肝、腎等），而肝臟是胰腺血液回流第一站，可認為是最主要累及的胰外臟器之一［17］。研究報道，SAP 患者肝損傷發生率高達88.9%［18］。本研究顯示，146 例AP 患者中，91 例并發ALI，發生率為62.33%（91/146），與上述報道存在差異，考慮與病例選取有關。目前，已有研究評估miRNA-375 在AP 患者診斷、病情評價中的作用，然而其對AP 并發ALI 的預測價值尚不明確。本研究創新性探討發現，AP 患者并發ALI者血清miRNA-375 水平顯著高于無ALI 者，且二元Logistic 回歸分析顯示，miRNA-375 升高為AP 患者并發ALI 的獨立危險因素，表明miRNA-375 可一定程度預測AP 患者并發ALI 的風險。胰島素抵抗可引起肝細胞防御能力（抗脂質毒性、抗氧化等）減弱，促進脂質溶解，促進肝細胞內脂質沉積，導致肝細胞損傷［19］。因此，推測AP 患者miRNA-375 高表達可能通過誘導胰島素抵抗引發ALI。另研究顯示，miRNA-375 可調控Hippo 信號通路的下游效應器Yes 相關蛋白（Yes-associated protein，YAP）［20］，而YAP 活性變化可對肝臟結構及功能產生重要影響［21］，也可能是miRNA-375 促進AP 發生ALI 的機制之一。ROC 曲線分析表明，miRNA-375 預測AP患者并發ALI 的AUC 為0.810，高于淀粉酶，對應特異度、敏感度分別為0.746、0.791，進一步提示miRNA-375 對ALI 發生風險具有較高預測價值，從而指導臨床盡早采取針對性干預措施。

綜上可知，AP 患者血清miRNA-375 異常高表達，與患者病情嚴重程度有關，且可作為并發ALI的預測標志物，為早期針對性治療提供參考。